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    一種利用放線菌發(fā)酵生產卡拉霉素的培養(yǎng)基制造技術

    技術編號:8526925 閱讀:248 留言:0更新日期:2013-04-04 08:09
    本發(fā)明專利技術公開了一種以放線菌MO97為菌種,生物合成卡拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基,包含氮源、碳源、無機鹽和金屬離子,所述的氮源包括有機氮源和無機氮源,采用本發(fā)明專利技術發(fā)酵培養(yǎng)基合成卡拉霉素時,其轉化率可達85%,可以很好的解決目前卡拉霉素產率低的問題。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術涉及微生物聚酮類化合物轉化培養(yǎng)基,具體涉及一種用于生物合成卡拉霉素的放線菌發(fā)酵培養(yǎng)基。
    技術介紹
    卡拉霉素屬廣譜抗菌素,對革蘭陽性,陰性細菌都有抑菌作用,用于大腸桿菌,產氣桿菌,腸炎桿菌,痢疾桿菌,腸炎球菌,耐藥性葡萄球菌等引起的感染。還廣泛用于對青霉素G耐藥的金黃色葡萄球菌所引起的各種感染,如敗血癥、心內膜炎、尿路感染、肺部感染等,以及對鏈霉素耐藥的結核桿菌所致的各種感染。尤其近年來研究發(fā)現卡拉霉素是腫瘤·靶點AKT抑制劑,具有抗腫瘤的作用,因此成了藥物研發(fā)熱點。目前工業(yè)生產上均采用傳統(tǒng)的培養(yǎng)基及菌種生產卡拉霉素,其轉化率低,生產率低,難以滿足市場的需求,因此現急需一種高效的轉化工藝,提高底物的轉化率,降低生產成本。
    技術實現思路
    為解決上述技術問題,本專利技術的目的是提供一種以放線菌M097為菌種,生物合成卡拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基,包含氮源、碳源、無機鹽和金屬離子。所述的氮源包括有機氮源和無機氮源;有機氮源為酵母提取物,含量為8g/L ;無機氮源為硝酸鉀,其含量為2g/L。所述的碳源為可溶性淀粉和葡萄糖,其含量為60 g/L。培養(yǎng)基中還加入鉀鹽、磷酸鹽、銨鹽和硝酸鹽等無機鹽和鎂等金屬離子。不同有機氮源對轉化的影響顯著,實驗考察了花生粉餅、豆柏、豆餅粉、牛肉膏和蛋白胨五中常用有機氮源,添加濃度均為8g/L,底物投料濃度相同,轉化結束后通過HPLC檢測各有機氮源發(fā)酵液中產物的濃度,其中牛肉膏、蛋白胨和酵母提取液中的產物含量較聞,而酵母提取液的最聞。不同碳源對轉化也具有的顯著影響,實驗考察了可溶性淀粉、葡萄糖、糊精、玉米粉和蔗糖等碳源,添加濃度均為60g/L,底物投料濃度相同,轉化結束后通過HPLC檢測各有碳源發(fā)酵液中產物的濃度,其中可溶性淀粉和葡萄糖中的產物含量較高。采用本專利技術發(fā)酵培養(yǎng)基和菌種合成卡拉霉素時,轉化率可達85%,而采用現有技術的發(fā)酵培養(yǎng)基和菌種時,轉化率< 70%。因此采用本專利技術經過組分優(yōu)化的發(fā)酵培養(yǎng)基來進行卡拉霉素的合成時可以很好的解決轉化率不高的缺點,從而降低生產成本。具體實施例方式實施例1發(fā)酵用液體種子培養(yǎng)基配方(g/L):玉米淀粉9,磷酸氫二鉀O. 9,硫酸鎂O. 6,氯化鈣O. 5,蛋白胨6,酵母提取物I。pH7.0,121°C滅菌30分鐘。液體發(fā)酵培養(yǎng)基配方(g/L):酵母提取物8,磷酸氫二鉀O. 8,硫酸鎂O. 6,氯化鈣O. 5,豆餅浸出物5,ρΗ7· 0,121°C滅菌30分鐘。發(fā)酵培養(yǎng)將10%活化放線菌M097液體菌種接入種子罐,攪拌均勻,調整pH7. 0,與26°C溫度下培養(yǎng)20h備用;將種子罐內培養(yǎng)好的液體種子按10%的接種量接入發(fā)酵培養(yǎng)基中攪拌發(fā)酵48h備用,pH7. O,發(fā)酵溫度26°C,發(fā)酵過程鼓入無菌空氣,空氣量為O. 2-1. OL/分鐘。發(fā)酵液采用超臨界CO2萃取分離,離心取上清用HPLC進行分析,采用外標法對樣品進行定量,計算轉化率為85%。HPLC條件為=LC-1OAD型高效液相色譜儀;色譜柱XDB-C18(250_X4. 6mm, 5 μ m);流動相為甲醇:水=70 30 ;流速1. Oml/ 分鐘;進樣量10 μ I ;檢測波長240nm。 上述實施例不作為對本專利技術的限定,凡在本專利技術的范圍內所作的任何修改、等同替換、改進等,均屬于本專利技術的保護范圍。本文檔來自技高網...

    【技術保護點】
    一種以放線菌MO97為菌種,生物合成卡拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基,包含氮源、碳源、無機鹽和金屬離子,其特征在于,所述的氮源包括有機氮源和無機氮源,有機氮源為酵母提取物。

    【技術特征摘要】
    1.一種以放線菌M097為菌種,生物合成卡拉霉素的發(fā)酵培養(yǎng)基,包含氮源、碳源、無機鹽和金屬離子,其特征在于,所述的氮源包括有機氮源和無機氮源,有機氮源為酵母提取物。2.如權利要求1所述的發(fā)酵培養(yǎng)基,其特征在于,所述...

    【專利技術屬性】
    技術研發(fā)人員:荊曉麗
    申請(專利權)人:青島艾華隆生物科技有限公司
    類型:發(fā)明
    國別省市:

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