本發明專利技術公開了三種香豆素類化合物瑞香新素、瑞香素和7-羥基-8-甲氧基香豆素在制備丙型肝炎病毒蛋白酶NS3/4A抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應用及其從瑞香（Daphnepapyracea?Wall.ex?Steud.var.?crassiuscula?Rehd.）中提取、分離和純化方法，上述三種香豆素類物質對丙型肝炎病毒蛋白酶NS3/4A有較強的抑制作用，活性較高，可單獨用于制備預防和治療丙型肝炎的藥物，也可與其它組分復配用于預防和治療丙型肝炎；并且，發明專利技術人采用現代植物化學分離純化技術首次從瑞香植物中提取分離得到三種香豆素類化合物，化合物純度在98%，可作為藥品檢驗中的化學標準品應用。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及藥物
，特別是涉及香豆素類化合物的藥物應用及其從瑞香 {Daphne papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)中提取的方法。
技術介紹
人體感染丙型肝炎病毒所致的丙型肝炎，已成為全球最棘手的健康問題，目前全世界已有1. 7億人感染。若無藥物的治療，長期感染丙型肝炎病毒將發展成為慢性肝炎、 肝壞死、肝癌等疾病。當前最有效的治療方法是聚乙二醇干擾素聯合利津巴韋，該方法對于廣大發展中國家普遍存在的I型丙型肝炎治療有效率低于50%，長期使用干擾素存在許多副作用，如白細胞、血小板、嗜中性白血球的減少和抑郁癥等；長期使用利津巴韋，也將產生溶血性貧血等副作用，使得患者不能持續治療，因此發展獨特、有效、更安全的丙型肝炎治療藥物尤為緊迫。丙型肝炎病毒蛋白酶NS3/4A在病毒圓熟過程中起著重要的作用，已被證實是發現治療丙型肝炎藥物的有效靶點之一。目前三種丙型肝炎NS3/4A蛋白酶抑制劑，BILN 2061，VX-950和SCH 503034，已被臨床證實療效顯著，但多為肽類抑制劑，合成困難，并有一定的毒副作用。中藥瑞香papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)系瑞香科瑞香屬常綠灌木，又名山辣子皮，麝囊，蓬萊花，雪花、奪香花，野夢花、山夢花，雪地開花、紅總管、雪凍花。主要分布于四川、貴州、云南等地海拔1000-3100米的山坡灌叢或草坡中，具有治咽喉腫痛，齒痛，風濕痛等功效。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是克服現有治療丙型肝炎的藥物合成困難、副作用多的缺陷，提供三種天然香豆素類化合物在制備丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應用，同時提供從瑞香papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)中提取、分離和純化三種化合物的方法。為了解決上述技術問題，本專利技術采用如下的技術方案本專利技術提供了瑞香新素、瑞香素和7-羥基-8-甲氧基香豆素在制備丙型肝炎病毒 NS3/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應用。 本專利技術還提供了從瑞香(Daphne papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.)中提取、分離和純化上述三種香豆素類化合物的方法取瑞香植物全株，粉碎，用乙醇加熱回流提取，提取液濃縮成乙醇浸膏，用水分散，用乙酸乙酯萃取，濃縮得乙酸乙酯浸膏，經硅膠柱層析，以體積比為50:1的氯仿-甲醇梯度洗脫，在氯仿甲醇的體積比為25:1的梯度獲得A流份、氯仿甲醇的體積比為10:1的梯度獲得B流份、氯仿 甲醇的體積比為8:1的梯度獲得C流份，三流份分別經ODS柱層析分離，A流份以體積比為 6:4的甲醇-水洗脫、B流份以體積比為1:9的甲醇-水洗脫、C流份以體積比為1:9的甲醇-水洗脫，洗脫液分別用甲醇重結晶，A流份獲得瑞香新素、B流份獲得7-羥基-8-甲氧基香豆素、C流份獲得瑞香素。進一步的，乙酸乙酯浸膏的提取方法為取瑞香植物全株，粉碎，加5 10重量倍 70 95%的乙醇加熱回流提取2 4次，每次I 2小時，濾過，合并濾液，濾液減壓濃縮至無醇味，用等體積的水分散，再用2倍體積量的乙酸乙酯萃取2 3次，濃縮得乙酸乙酯浸在前述方法中，硅膠柱層析時的硅膠為200 300目，上柱硅膠為浸膏用量的 50 150重量倍，ODS柱層析時反相娃膠為100-200目，上柱反相娃膠為浸骨用量的50 100 倍。前述提取、分離和純化方法中所用到的瑞香為瑞香科瑞香屬植物Daphne papyracea Wall, ex Steud. var. crassiuscula Rehd.的全株為了確認所提取化合物的結構及驗證其抗丙型肝炎病毒作用，專利技術人做了相關的實驗如下1、化合物結構的確認采用上述技術方案從A、B、C三流份中所提取得到的三個化合物，經1H-NMR, 13C-NMR, MS 和與文獻對照，分別被確定為A 流份獲得的化合物淡黃色粉末，MS (ESI), m/z 409 [M+Na]+，mp. 235_237°C，1H NMR (Pyridine-1/^, 400 MHz) δ 3.81 (6H, s, 2 X -OCH3), 3.90 (2H, d, J = 2.7， 13.0 Hz), 4. 29 (1H, d, J =1. 7, 13.0 Hz), 4. 31 (1H, d, J =8.1，10. 3 Hz), 5. 59 (1H, d, J = 8.2 Hz), 6. 38 (1H, d, J = 9. 5 Hz), 7.04 (1H, d, J = 8.1 Hz), 7.69 (1H, d, J = 9. 5 Hz). 13C NMR (Pyridine-^, 100 MHz) δ 56. 4, 60. 8, 78. 0, 80.1, 106.2，113.4，113.8，113.9，120.0，126.6，132.4，138.5，144.3，144.6，147.8， 160.6。以上光譜數據與文獻報道的瑞香新素波譜數據一致(Liu Yan Ze, et al. , Chin Chem. Lett. , 1997, 8(3): 229)。A流份化合物被確定為瑞香新素。分子式為=C2tlH18O8，結構式如下B流份獲得的化合物無色針晶；Gibbs反應呈陰性，E1-MS 192 [M]+, 1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 3.29 (3Η, s, -OCH3), 6. 17 (1H, d, J = 9· 2 Hz)，6.81 (1Η, d, J = 8.6 Hz), 7. 17 (1H, d, J = 8. 6 Hz), 7. 80 (1H, d, J = 9.2 Hz )· 13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ 60.4, 111.1, 112.7， 113.3， 123.5， 134.5， 145.1， 148.3， 154.1， 161. 7。以上光譜數據與文獻報道的7-羥基-8-甲氧基香豆素波譜數據一致(王明時等，中草藥，1980,11 (2),49). B流份化合物被確定為7-羥基-8-甲氧基香豆素。分子式為=CltlH8O4，結構式如下C 流份獲得的化合物無色針晶；MS (ESI), m/z 191 [Μ+ Na]+，1H NMR (MeOD, 400 MHz) δ 6. 17 (1H, d, J = 9. 2 Hz), 6.80 (1H, d, J = 8. 6 Hz), 6.98 (1H, d, J = 8.6 Hz), 7.81 (1H, d, J = 9. 2 Hz )· 13C NMR (MeOD, 100 MHz) δ 110.0 (C_3)， 112.4 (C-1O) ，112.6 (C_6)，118.8 (C_5)，132.2 (C_8), 143.6 (C_4)，145.3 (C_9)， 149.8 (C-7), 162.1 (C_2)。以上光譜數據與文獻報道的瑞香素波譜數據一致(Sadtler Standar本文檔來自技高網...
【技術保護點】
瑞香新素、瑞香素和7?羥基?8?甲氧基香豆素在制備丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應用。
【技術特征摘要】
1.瑞香新素、瑞香素和7-羥基-8-甲氧基香豆素在制備丙型肝炎病毒NS3/4A蛋白酶抑制劑和治療丙型肝炎藥物中的應用。2.從瑞香中提取、分離和純化權利要求1所述三種香豆素類化合物的方法，其特征在于取瑞香植物全株，粉碎，用乙醇加熱回流提取，提取液濃縮成乙醇浸膏，用水分散，用乙酸乙酯萃取，濃縮得乙酸乙酯浸膏，經硅膠柱層析，以體積比為50:1的氯仿-甲醇梯度洗脫，在氯仿甲醇的體積比為25:1的梯度獲得A流份、氯仿甲醇的體積比為10:1的梯度獲得B流份、氯仿甲醇的體積比為8:1的梯度獲得C流份，三流份分別經ODS柱層析分離，A流份以體積比為6:4的甲醇-水洗脫、B流份以體積比為1:9的甲醇-水洗脫、C流份以體積比為1:9的甲醇-水洗脫，洗脫液分別用甲醇重結晶，A流份獲得瑞香新素、B流份獲得7-羥基-8-甲氧基香豆素、C流份獲得瑞香素。3.按照權利要求...
【專利技術屬性】
技術研發人員：危英，馬超美，服部征雄，梁光義，汪冶，危莉，
申請(專利權)人：貴陽中醫學院，
類型：發明
國別省市：
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