本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種蛋白序列，其中，所述蛋白質(zhì)具有氨基酸列表中SEQIDNo.1所述序列；所述蛋白序列可應(yīng)用于保護(hù)腸上皮細(xì)胞的藥物藥劑中；一種含有所述蛋白序列的藥物。將本發(fā)明專利技術(shù)的一種源自于植物乳桿菌的SLP中蛋白序列應(yīng)用于保護(hù)腸上皮細(xì)胞的藥物藥劑中，以及包含該序列的藥物，具有保護(hù)腸上皮細(xì)胞的積極效果，并對人體無副作用。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種蛋白序列，尤其是一種植物乳桿菌的蛋白序列及其在保護(hù)腸上皮細(xì)胞藥物中的應(yīng)用、以及一種包含該序列的藥物。
技術(shù)介紹
腸道微生物生態(tài)系統(tǒng)數(shù)量龐大、組成復(fù)雜，其細(xì)菌數(shù)量約10倍于人體體細(xì)胞，與人類健康狀況的維持和疾病的發(fā)生有著密切的關(guān)系。其中，益生菌在腸道內(nèi)的黏附和定植對抑制致病菌的定植、移位和感染，維護(hù)腸道黏膜的完整性具有特別重要的意義。除此之夕卜，隨著抗生素、激素以及化學(xué)藥物的大量使用，加上食品中各種各樣有毒有害物質(zhì)的影響，人體內(nèi)的微生物菌群遭到嚴(yán)重破壞，各種相生相克的微生物菌群失去了原有的平衡，導(dǎo)致人體的免疫系統(tǒng)的免疫能力下降。由于上述原因，在維護(hù)腸道健康及治療腸道疾病方面，人們將注意力轉(zhuǎn)移到了生物技術(shù)上，以尋求一種既能治愈腸道疾病，又能避免上述副作用的解決之道。益生菌中的乳酸桿菌一直是近年來國內(nèi)外研究的熱點(diǎn)，乳酸桿菌是指能使糖類發(fā)酵產(chǎn)生乳酸的細(xì)菌，嗜酸性，可治療消化不良和腹瀉，可以降低腸道內(nèi)致病性大腸桿菌、侵襲性大腸桿菌等病原菌對腸上皮細(xì)胞的附著能力，是一群生活在機(jī)體內(nèi)的有益于宿主健康的微生物，能夠維護(hù)人體健康和調(diào)節(jié)免疫功能。微生物與宿主相互作用的研究是當(dāng)今微生物學(xué)領(lǐng)域的核心研究方向，近年來，腸道微生物系統(tǒng)在腸道內(nèi)的定植、繁衍機(jī)制引起廣泛關(guān)注，尤其是其特殊的遺傳特性、分泌具有潛在生物學(xué)意義的蛋白質(zhì)和生物活性物質(zhì)，在腸道環(huán)境中適應(yīng)性以及與宿主細(xì)胞的相互作用機(jī)理非常復(fù)雜。粘附腸上皮細(xì)胞的強(qiáng)弱是益生菌和致病菌侵襲性的重要指標(biāo)，學(xué)術(shù)界認(rèn)為，粘附是由細(xì)胞壁中脂磷壁酸、肽聚糖以及細(xì)菌表面粘附蛋白等粘附素參與或介導(dǎo)的與宿主細(xì)胞表面受體相結(jié)合的過程，近幾年來國內(nèi)外對乳酸桿菌的研究表明，乳酸桿菌在發(fā)揮其益生作用時(shí)，其表 面蛋白(surface layer protein, SLP)的黏附結(jié)構(gòu)域起著核心作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)提供一種源自于植物乳桿菌的SLP中的蛋白序列及其在腸上皮細(xì)胞保護(hù)制劑中的應(yīng)用、以及一種包含該序列的制劑。本專利技術(shù)第一個(gè)方面是提供一種蛋白序列，其中，所述蛋白序列具有序列表中SEQID No.1所示的氨基酸序列。本專利技術(shù)第二個(gè)方面是提供一種所述蛋白序列在保護(hù)腸上皮細(xì)胞的制劑中的應(yīng)用。本專利技術(shù)第三個(gè)方面是提供一種含有所述蛋白序列的保護(hù)腸上皮細(xì)胞的制劑。本專利技術(shù)所述的蛋白序列源自于植物乳桿菌的SLP中蛋白序列，通過實(shí)驗(yàn)證明，將其應(yīng)用于腸上皮細(xì)胞保護(hù)制劑，對腸上皮細(xì)胞具有重要的保護(hù)作用和積極效果，并且對人體無副作用。附圖說明圖1是EIEC和EPEC對NCM460細(xì)胞的黏附率結(jié)構(gòu)，其中，圖1A為本專利技術(shù)蛋白序列處理前后EIEC對NCM460細(xì)胞的黏附的對比；圖1B為本專利技術(shù)蛋白序列處理前后EPEC對NCM460細(xì)胞的黏附的對比； 圖2是EIEC和EPEC對NCM460細(xì)胞通透性(TER)影響；其中，圖2A為本專利技術(shù)蛋白序列處理前后EIEC對NCM460細(xì)胞通透性的對比；圖2B為本專利技術(shù)蛋白序列處理前后EPEC對NCM460細(xì)胞通透性的對比； 圖3是EIEC和EPEC對緊密連接蛋白(TJ)的破壞程度照片；其中，圖3A為本專利技術(shù)蛋白序列處理前后EIEC對緊密連接蛋白(TJ)的破壞程度；圖3B為本專利技術(shù)蛋白序列處理前后EPEC對緊密連接蛋白(TJ)的破壞程度； 圖4為Western blot方法驗(yàn)證本專利技術(shù)158蛋白序列存在于LP的全菌體黏附蛋白的結(jié)果照片。具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖對本專利技術(shù)具體實(shí)施例做進(jìn)一步的說明，但不作為對本專利技術(shù)的限定。一種蛋白序列，具有序列表中SEQ ID No.1所示蛋白序列(簡稱為158)，其來源于保藏號為 CGMCC No. 1258 的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum, LP)。通過Western blot方法驗(yàn)證158存在于LP的全菌體黏附蛋白中 參照圖4,全菌體蛋白通過純化的全菌體黏附蛋白電泳后,用抗ant1-158作WB分析,結(jié)果可見100-130kD有與理論相符的陽性條帶，說明ant1-158可與全菌體黏附蛋白反應(yīng)，反映了 158蛋白序列存在于 全菌體黏附蛋白中。所述158蛋白制備的方法可參考文獻(xiàn)Liu Z, Shen T, Zhang P, Ma Y, QinH, Lactobacillus plantarum surface layer adhesive protein protects intestinalepithelial cells against tight junction injury induced by enteropathogenicEscherichia coli, Mol Biol Rep, 2011; 38(5): 3471-3480 實(shí)施例1,抑制EIEC/EPEC對NCM460細(xì)胞的黏附 實(shí)驗(yàn)方法可參考文獻(xiàn)Liu Z, Shen T, Zhang P, Ma Y, Qin H, Lactobacillusplantarum surface layer adhesive protein protects intestinal epithelial cellsagainst tight junction injury induced by enteropathogenic Escherichia coli, MolBiol Rep, 2011; 38(5): 3471-3480 如圖1所示，EIEC對NCM460細(xì)胞的黏附率為15%_28%，EPEC對NCM460細(xì)胞的黏附率為20%-45%。而當(dāng)本專利技術(shù)蛋白序列(158)預(yù)處理后(I58+EIEC，I58+EPEC), EIEC和EPEC的黏附率均明顯下降，均降至10%以下，與使用植物乳桿菌進(jìn)行預(yù)處理(LP+EIEC，LP+EPEC)效果相近，甚至效果更好一些。而加入ant1-MIMP (anti_I158)阻斷其作用后,本專利技術(shù)所述蛋白序列的保護(hù)作用則消失(P〈0. 05)。實(shí)施例2,抑制EIEC/EPEC誘導(dǎo)的NCM460細(xì)胞通誘件(TER)的下降 試驗(yàn)方法參考Qin H, Zhang Z, Hang X, Jiang Y. L. , Plantarum preventsenteroinvasive Escherichia coli—induced tight junction proteins changes inintestinal epithelial cells, BMC Microbiol， 2009; 9: 63 如圖2所示的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，EIEC/EPEC干預(yù)后，NCM460細(xì)胞的TER值與對照組相比顯著下降(P〈0. 05，圖2A，圖2B)，但當(dāng)158預(yù)處理后，NCM460細(xì)胞的TER值則顯著升高，24h后，EIEC對NCM460細(xì)胞通透性由25%左右上升至65 70%左右，EPEC對NCM460細(xì)胞通透性由30%左右上升至7(Γ75%左右，與直接使用植物乳桿菌(LP)效果相近。而加入ant1-MIMP (anti_I158)阻斷其作用后,本專利技術(shù)所述蛋白序列的保護(hù)作用則消失(P〈0. 05)。實(shí)施例3,降低EIEC/EPEC對緊密連梓蛋白(TT)和F-actin的破壞作用 試驗(yàn)方法參考Qin H, Zhang Z, Hang本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種蛋白序列，其特征在于，所述蛋白質(zhì)具有序列表中SEQ?ID?No.1所示的氨基酸序列。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種蛋白序列，其特征在于，所述蛋白質(zhì)具有序列表中SEQ ID No.1所不的氣基酸序列。2.一種如權(quán)利要求...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉志華，秦環(huán)龍，汪建平，
申請(專利權(quán))人：劉志華，
類型：發(fā)明
國別省市：
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