本發明專利技術公開了與流感病毒復制相關的長鏈非編碼核酸片段以及它們的應用。本發明專利技術提供的shRNA，其生成siRNA，所述siRNA為雙鏈RNA，如序列表的序列11或序列13所示。所述shRNA具體可如序列表的序列12或序列14所示。本發明專利技術的發明專利技術人發現人肺癌細胞表達的一種長鏈非編碼RNA(IVDN8)可作為防治流感的新型藥物靶標，干擾IVDN8的表達時，病毒的復制水平則降低。因此，通過藥物干擾或抑制IVDN8表達，從而抑制或降低流感病毒或其它病毒的復制水平，可預防性地保護機體與細胞，促進人體對病毒的清除。這種以IVDN8為靶標的抗病毒新機制和新方法將有助于降低流感的感染率、減輕癥狀或縮短病程。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及與流感病毒復制相關的長鏈非編碼核酸片段以及它們的應用。
技術介紹
長鏈非編碼RNA(long non-coding RNA, IncRNA)是指長200nt以上的不編碼蛋白質的RNA。轉錄組計劃完成后，人們發現哺乳動物細胞中4/5的轉錄產物并不編碼蛋白質，其中不少是IncRNA。最初以為這些轉錄產物只是“噪音”，但近年的研究表明，IncRNA在細胞生命活動中發揮著重要而廣泛的作用。流感病毒是正粘病毒科的單鏈RNA病毒，因其基因變異迅速，大流行不斷發生。在全球范圍，流感每年導致幾十萬人死亡，預防接種及治療費用亦十分高昂。由于部分流感病毒毒株對金剛烷胺和金剛乙胺有耐藥性，目前有效的抗病毒藥物為神經胺酸酶抑制劑達菲和扎那米韋，但價格昂貴，而且副作用及耐藥毒株亦有報道。研制新型抗病毒藥物的任務仍然艱巨。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供與流感病毒復制相關的長鏈非編碼核酸片段以及它們的應用。本專利技術提供了一種shRNA(shRNAl)，其生成siRNA，所述siRNA為反向互補的雙鏈RNA，其中的一條鏈如序列表的序列11所示。所述shRNAl具體可如序列表的序列12所示。 編碼所述shRNAl的DNA分子(DNA分子I)也屬于本專利技術的保護范圍。含有所述DNA分子I的重組載體(重組載體1)1也屬于本專利技術的保護范圍。所述重組載體I可為重組質粒(重組質粒I)或重組病毒(重組病毒I)。所述重組質粒I具體可為在pSIH-Hl-copGFP慢病毒表達載體的BamHI和EcoRI酶切位點之間插入序列表的序列2自5’末端第6至64位核苷酸所示雙鏈DNA得到的重組質粒。所述重組病毒I具體可為將將所述重組質粒l、pPACKHl-GAG質粒、pPACKHl-REV質粒和pVSV_G質粒共轉染哺乳動物細胞(如293T細胞)得到的重組病毒。重組質粒l、pPACKHl-GAG質粒、pPACKHl-REV質粒和pVSV-G質粒的質量配比優選為1:1 :1 :1。本專利技術還提供了另一種shRNA (shRNA2)，其生成siRNA，所述siRNA為反向互補的雙鏈RNA，其中的一條鏈如序列表的序列13所示。所述shRNA2具體可如序列表的序列14所示。編碼所述shRNA2的DNA分子(DNA分子2)也屬于本專利技術的保護范圍。含有所述DNA分子2的重組載體(重組載體2)也屬于本專利技術的保護范圍。所述重組載體2可為重組質粒(重組質粒2)或重組病毒(重組病毒2)。所述重組質粒2具體可為在pSIH-Hl-copGFP慢病毒表達載體的BamHI和EcoRI酶切位點之間插入序列表的序列4自5’末端第6至64位核苷酸所示雙鏈DNA得到的重組質粒。所述重組病毒2具體可為將將所述重組質粒2、pPACKHl-GAG質粒、pPACKHl-REV質粒和pVSV_G質粒共轉染哺乳動物細胞(如293T細胞)得到的重組病毒。重組質粒l、pPACKHl-GAG質粒、pPACKHl-REV質粒和pVSV-G質粒的質量配比優選為1:1 :1 :1。本專利技術還保護抑制IVDN8表達的產品在制備藥物中的應用；所述藥物的作用為如下(a)和/或(b)和/或(c) (a)抑制流感病毒；(b)抑制流感病毒在細胞中的復制和/或釋放；(c)治療和/或預防流感。所述細胞具體可為A549細胞。所述流感病毒具體可為流感病毒WSN毒株。IVDN8為一種長鏈非編碼RNA，由序列表的序列I至序列5中任一所示DNA分子編碼。所述抑制IVDN8表達的產品為所述shRNAl、所述DNA分子1、所述重組質粒1、所述重組病毒1、所述shRNA2、所述DNA分子2、所述重組質粒2和所述重組病毒2中的至少一種。本專利技術還保護一種藥物，它的活性成分為抑制IVDN8表達的產品；所述藥物的作用為如下(a)和/或(b)和/或(c) (a)抑制流感病毒；(b)抑制流感病毒在細胞中的復制和/或釋放；(C)治療和/或預防流感。所述細胞具體可為A549細胞。所述流感病毒具體可為流感病毒WSN毒株。IVDN8為一種長鏈非編碼RNA，由序列表的序列I至序列5中任一所示DNA分子編碼。所述抑制IVDN8表達的產品為所述shRNAl、所述DNA分子1、所述重組質粒1、所述重組病毒1、所述shRNA2、所述DNA分子2、所述重組質粒2和所述重組病毒2中的至少一種。本專利技術還保護序列表的序列I所示的DNA片段。本專利技術還保護序列表的序列I所示的DNA片段編碼的RNA。 含有序列表的序列I所示的DNA片段的重組載體(重組載體3)也屬于本專利技術的保護范圍。所述重組載體可為重組質粒(重組質粒3)或重組病毒(重組病毒3)。所述重組質粒3具體可為在pMIG逆轉錄病毒表達載體的BglII和EcoRI酶切位點之間插入序列表的序列I所示雙鏈DNA得到的重組質粒。所述重組病毒3具體可為將所述重組質粒3、PCL-Eco質粒和pCMV-VSV-G質粒共轉染哺乳動物細胞(如293T細胞)得到的重組病毒。重組質粒UpCL-Eco質粒和pCMV-VSV-G質粒的質量配比優選為1:1 :1。序列表的序列I所示的DNA片段、序列表的序列I所示的DNA片段編碼的RNA、重組質粒3或重組病毒3均可用于制備產品；所述產品的作用為促進流感病毒在細胞中的復制和/或釋放。所述細胞具體可為A549細胞。所述流感病毒具體可為流感病毒WSN毒株。本專利技術還保護IVDN8作為靶點在開發治療和/或預防流感的藥物中的應用。IVDN8為一種長鏈非編碼RNA，由序列表的序列I至序列5中任一所示DNA分子編碼。所述流感病毒具體可為流感病毒WSN毒株。本專利技術的專利技術人發現人肺癌細胞表達的一種長鏈非編碼RNA(IVDN8)可作為防治流感的新型藥物靶標。IVDN8在細胞中呈組成型表達，參與流感病毒的感染復制過程。在細胞中人為過表達IVDN8時，流感病毒的復制水平略有增高；而干擾IVDN8的表達時，病毒的復制水平則降低?？梢奍VDN8被流感病毒利用以促進自身的復制。感染了流感病毒的細胞中，細胞保護性機制下調IVDN8的表達水平。因此，通過藥物干擾或抑制IVDN8表達，從而抑制或降低流感病毒或其它病毒的復制水平，可預防性地保護機體與細胞，促進人體對病毒的清除。這種以IVDN8為靶標的抗病毒新機制和新方法將有助于降低流感的感染率、減輕癥狀或縮短病程。附圖說明圖1為感染流感病毒的A549細胞內IVDN8表達水平降低；采用肌動蛋白mRNA作為內參；1:A549細胞；2 :感染流感病毒的A549細胞。圖2為病毒感染復制過程與IVDN8豐度降低相關(實驗一);采用肌動蛋白mRNA作為內參；1 A549細胞，轉染A549細胞的RNA ；2 A549細胞，轉染感染病毒的A549細胞的RNA混合物；3 A549細胞，轉染CIAP處理過的RNA混合物。圖3為病毒感染復制過程與IVDN8豐度降低相關(實驗二 );采用肌動蛋白mRNA作為內參；1 :A549細胞；2 :感染WSN毒株的A549細胞；3 :感染部分滅活病毒的A549細胞。圖4為Northern印跡鑒定IVDN8的主要表達形式；1 =Riboruler RNA標準分子量；2 A549細胞RNA (30微克);3 :感染WSN毒株12小時后的A549細胞RNA (30微克)。本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種shRNA，其生成siRNA，所述siRNA為反向互補的雙鏈RNA，其中的一條鏈如序列表的序列11所示。
【技術特征摘要】
1.一種shRNA，其生成SiRNAJy^ii siRNA為反向互補的雙鏈RNA，其中的一條鏈如序列表的序列11所示。2.—種shRNA，其生成siRNA，所述siRNA為反向互補的雙鏈RNA，其中的一條鏈如序列表的序列13所示。3.編碼權利要求1或2所述shRNA的DNA分子。4.含有權利要求3所述DNA分子的重組載體。5.抑制IVDN8表達的產品在制備藥物中的應用；所述藥物的作用為如下(a)和/或(b)和/或(c) (a)抑制流感病毒；(b)抑制流感病毒在細胞中的復制和/或釋放；(C)治療和/或預防流感。6.一...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳吉龍，歐陽晶，
申請(專利權)人：中國科學院微生物研究所，
類型：發明
國別省市：
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