一種復方a 酮酸片中賴氨酸的含量檢測方法技術

本發明專利技術涉及一種復方a酮酸片中賴氨酸的含量檢測方法，首先，配制濃度為10mg/ml的鄰苯二甲醛反應液（OPA試劑），其中含2%~3%（v/v）的3-巰基丙酸；然后，以自動柱前衍生的方法，在pH為10.2±0.1的硼酸緩沖液系統中將賴氨酸與反應液以約1:1（v/v）的比例混合，室溫反應；最后，采用高效液相色譜法在338nm處測定賴氨酸的含量。利用本發明專利技術的方法檢測賴氨酸的含量，有效的解決了在已有OPA柱前衍生方法中賴氨酸出現的雙峰問題，提高了賴氨酸在自動柱前衍生測定中的進樣精密度，并且大大縮短了檢測時間，特別適合實驗室測定氨基酸樣品中賴氨酸的含量。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種賴氨酸的含量檢測方法，特別涉及一種復方a酮酸片中賴氨酸的含量檢測方法。
技術介紹
目前對于氨基酸類的分析較為常用的是氨基酸分析儀及反相高效液相色譜與各種柱前或柱后衍生物相結合的氨基酸分析技術。近年來，柱前衍生反相高效液相色譜法測定氨基酸的技術取得了很大的進展。與氨基酸分析儀相比，柱前衍生法具有快速、靈敏度高、不需專用儀器等優點。常用的柱前衍生試劑有鄰苯ニ甲醛(0PA)、9-芴基甲氧基羰酰氯(FM0C-C1)、異硫氰酸苯酯(PITC)和丹酰氯(Dansyl-Cl)等。其中以OPA的應用最廣，因為OPA衍生步驟簡単，反應速度快，剰余試劑不干擾測定，衍生物可用紫外、熒光或電化學檢測器檢測。賴氨酸學名為2，6_ニ氨基己酸。其為蛋白質中唯一帶有側鏈伯氨基的氨基酸。結構式如下

【技術保護點】
一種復方a酮酸片中賴氨酸的含量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：（1）硼酸緩沖溶液的配制0.4mol／L硼酸緩沖溶液的配制：取硼酸和氫氧化鈉，加水使溶解并稀釋制，然后用堿溶液調pH至10.10~10.30；（2）鄰苯二甲醛反應液的配制：稱取鄰苯二甲醛適量，加甲醇或乙醇溶解定容，配制成100mg/ml的鄰苯二甲醛儲備液；吸取鄰苯二甲醛儲備液適量，加入2%~3%（v/v）的3?巰基丙酸混合均勻后用硼酸緩沖液稀釋，配制成鄰苯二甲醛濃度為10mg/ml的反應液；（3）樣品溶液的測定：在可使用自動柱前衍生的高效液相色譜儀下，按如下進樣程序對賴氨酸樣品進行柱前衍生，并在338nm處對衍生物進行測定：a：200μL/min的速度吸取硼酸緩沖液2.5μL；b：200μL/min速度吸取賴氨酸樣品液1μL；c：在空氣中以最大速度將硼酸緩沖液和賴氨酸樣品液進行混合得第一混合液；d：等待0.2min；e：90μL/min的速度吸取純化水進行洗針；f：最大速度吸取OPA反應液0.5~2μL；g：在空氣中以最大速度將第一混合液和OPA反應液混合；h：進樣。

【技術特征摘要】
1.一種復方a酮酸片中賴氨酸的含量檢測方法，其特征在于，包括以下步驟 (1)硼酸緩沖溶液的配制 0.4mol / L硼酸緩沖溶液的配制取硼酸和氫氧化鈉，加水使溶解并稀釋制，然后用堿溶液調pH至10. 10 10. 30 ； (2)鄰苯二甲醛反應液的配制 稱取鄰苯二甲醛適量，加甲醇或乙醇溶解定容，配制成100mg/ml的鄰苯二甲醛儲備液；吸取鄰苯二甲醛儲備液適量，加入29T3% (v/v)的3-巰基丙酸混合均勻后用硼酸緩沖液稀釋，配制成鄰苯二甲醛濃度為10mg/ml的反應液； (3)樣品溶液的測定 在可使用自動柱前衍生的高效液相色譜儀下，按如下進樣程序對賴氨酸樣品進行柱前衍生，并在338nm處對衍生物進行測定 a 200 u L/min的速度吸取硼酸緩沖液2. 5 y L ; b :200 u L/min速度吸取賴氨酸樣品液IyL; c :在空氣中以最大速度將硼酸...

【專利技術屬性】
技術研發人員：葉湘武，付愛玲，邱永鋒，
申請(專利權)人：上海景峰制藥股份有限公司，
類型：發明
國別省市：