本發明專利技術公開了日本血吸蟲重要抗原的高通量篩選及其在血吸蟲病診斷中的應用。具體的，本發明專利技術提供了一類重要的血吸蟲抗原及其在血吸蟲病診斷以及疫苗制備方面的用途。本發明專利技術人基于GST融合表達的高通量功能蛋白篩選技術，獲得24個能被血吸蟲病病人血清識別的陽性抗原，其中8個抗原呈現較強的陽性反應。血吸蟲病血清學檢測表明，用這些陽性抗原檢測血吸蟲具有高敏感性和特異性。本發明專利技術還提供了相應的診斷和監測血吸蟲病的方法和試劑盒。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物
；更具體地，本專利技術公開了日本血吸蟲重要抗原的高通量篩選及其在血吸蟲病診斷中的應用，本專利技術還涉及一類血吸蟲陽性抗原，并提供這些抗原在血吸蟲病診斷和疫苗制備中的應用。
技術介紹
血吸蟲病是一種嚴重威脅人類健康的人畜共患病，全球每年因血吸蟲病死亡人數約28萬。經過幾十年的努力，我國血吸蟲病防治工作取得了舉世矚目的成就，然而目前我國仍有現癥感染人群約50萬，尤其是目前大量人口流動，加之人們對血吸蟲病防范意識松懈，導致我國血吸蟲病防治形勢不容樂觀，防治任務依然艱巨。血吸蟲的診斷是防治血吸蟲的重要前提和手段之一。精確的診斷技術不僅可以用于患者確診，還可用于劃分流行區等級、評估流行態勢和考核防控效果等。目前血吸蟲病診斷方法主要有三種，一是病原學檢測方法，二是免疫學檢測方法，三是分子生物學檢測方法。病原學檢測方法主要包括蟲卵檢測法(Kato-Katz Technique)和毛蝴孵化法(Ha tching Test)。免疫學檢測方法主要有間接紅血球凝集試驗(IndirectHemagglutination Assay, IHA)、酶聯免疫吸附試驗(Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay, ELISA)、環卵沉淀試驗(Circum Oval Precipitating Test, COPT)以及斑點免疫金滲濾試驗(Dotimmunogoldfiltration Assay, DIGFA)。分子生物學方法是通過血吸蟲特異的核酸擴增技術來進行診斷。以上三種方法各有優缺點病原學檢測結果雖然目前仍然是血吸蟲病確診的金標準，但是病原學檢測敏感度低，費時費力，同時還有污染環境的危險。免疫學方法中的環卵沉淀試驗(COPT)和間接紅血球凝集試驗(IHA)特異性高，但敏感性低，不能廣泛使用。分子生物學的檢測方法敏感性高，但易出現假陽性，同時該方法對實驗條件要求較高，目前僅停留在實驗室研究階段，無法廣泛應用。相比而言，ELISA技術具有操作簡單、敏感度高、易標準化等優點，并且廣泛應用在多種疾病診斷中，因此是血吸蟲病診斷優先發展的方向。ELISA技術的關鍵是抗原的選擇。目前市場上血吸蟲抗體診斷ELISA使用的抗原是蟲卵可溶性抗原(SEA)，但SEA是粗抗原，成分比較復雜，受個體生理和環境情況影響很大，使得SEA-ELISA的特異性較差，容易出現交叉反應，無法區分現癥感染和既往感染。此外，蟲卵可溶性抗原SEA通常要從動物肝臟中的蟲卵提取，檢測條件難以精確控制，且SEA-ELISA的方法成本較高，因此導致批次間的結果不穩定，無法產業應用。利用基因工程技術生產重組蛋白是替代SEA的潛在新型抗原。重組抗原具有產量高、價格低、交叉反應少等優點，但抗原的選擇依然是制約產業應用的瓶頸。關鍵目前本領域內還沒有有效的、高敏感性、高特異性的抗原分子用作ELISA反應檢測血吸蟲。因此本領域迫切需要開發用于血吸蟲病診斷和防治的新靶標抗原分子。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一類用于日本血吸蟲的陽性抗原及其用途。本專利技術的另一目的在于提供一種高通量血吸蟲抗原的篩選方法。本專利技術的另一目的在于提供一種血吸蟲病診斷試劑和試劑盒。在本專利技術的第一方面，提供了一種血吸蟲陽性抗原，所述抗原選自(a)氨基酸序列如SEQ ID NO 1~24所示的多肽(b)將SEQ ID NO :1-24氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；(c)與SEQ ID NO 1~24所示氨基酸序列的同源性彡90%的、具有免疫原性的多肽；或(d)具有免疫原性的多肽(a)-(c)的片段。在另一優選例中，所述抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO :1_8所示。在另一優選例中，所述抗原用于制備檢測血吸蟲的試劑或試劑盒。在本專利技術的第二方面，提供了一種分離的多核苷酸，包括一核苷酸序列，所述核苷酸序列選自下組(a)編碼如本專利技術第一方面所述陽性抗原的多核苷酸； (b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。在另一優選例中，所述多核苷酸編碼具有SEQ ID NO 1所示氨基酸序列的抗原。在本專利技術的第三方面，提供了一種載體，所述載體含有本專利技術的第二方面所述的多核苷酸。在本專利技術的第四方面，提供了一種遺傳工程化的宿主細胞，所述宿主細胞含有本專利技術的第三方面所述的載體或染色體整合有本專利技術的第二方面所述的多核苷酸。在本專利技術的第五方面，提供了一種血吸蟲陽性抗原的制備方法，所述方法包括步驟(a)在適合表達的條件下，培養本專利技術第四方面所述的宿主細胞；(b)從培養物中分離出血吸蟲陽性蛋白抗原。在本專利技術的第六方面，提供了一種檢測血吸蟲的試劑盒，所述試劑盒包括容器或載體；以及位于所述容器內或載體上的如本專利技術第一方面所述的陽性抗原。在另一優選例中，所述試劑盒還包括酶結合液、反應底物和任選的說明書，較佳地，所述的試劑盒還可包括選自下組的組分反應終止液、樣本稀釋液、和洗滌液。在本專利技術的第七方面，提供了一種檢測血吸蟲的試劑，所述試劑包括固相載體以及包被于所述固相載體上的本專利技術第一方面所述的陽性抗原。在另一優選例中，所述的固相載體上包被有SjGPl(序列如SEQ ID N0:1所示)以及任選的選自序列如SEQ ID NO :2-24所不的一種或多種陽性抗原。在另一優選例中，所述的試劑盒或試劑用于用于檢測待測樣本是否感染血吸蟲。在另一優選例中，所述待測樣本來自血吸蟲病流行區人群。在另一優選例中，所述待測樣本來自?；蚱渌溉閯游铩Ｔ诒緦＠夹g的第八方面，提供了一種能與本專利技術第一方面所述的血吸蟲陽性抗原特異性結合的抗體。在另一優選例中，所述抗體是與氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示的陽性抗原結合的抗體。在本專利技術的第九方面，提供了一種抗原-抗體復合物，所述的復合物包括⑴氨基酸序列如SEQ ID NO :1_8所示的陽性抗原；(ii)與(i)陽性抗 原特異性結合的抗體；并且所述的抗原和抗體結合在一起。在另一優選例中，所述復合物由氨基酸序列如SEQ ID NO :1所示的陽性抗原及其特異性結合的抗體所構成。在本專利技術的第十方面，提供了本專利技術第九方面所述的抗原-抗體復合物的用途，所述復合物用于(a)制備檢測血吸蟲的試劑或試劑盒；和(b)用作檢測血吸蟲的陽性對照。在另一優選例中，所述的檢測是血清學檢測。在本專利技術的第十一方面，提供了一種高通量篩選血吸蟲抗原的方法，包括步驟(1)將含有信號肽的候選蛋白抗原與標志蛋白GST進行融合表達；(2)將步驟(I)得到的融合蛋白置于螯合了 GSH的多孔板的孔中，從而捕獲GST融合蛋白；(3)將含有血吸蟲抗體的血清置于步驟(2)的多孔板的孔中；(4)篩選形成特異性抗原-抗體復合物的孔，所對應的候選蛋白即為血吸蟲陽性抗原。在另一優選例中，在步驟⑵中將5-100種(較佳地10-80種)GST融合蛋白置于多孔板的孔中。在另一優選例中，步驟(3)所述待測樣本為人或除人外的哺乳動物的血清。在另一優選例中，步驟(3)所述的篩選方法是ELISA。在本專利技術的第十二方面，提供了一種檢測樣本中是否感染血吸蟲的方法，包括步驟(1)制備本專利技術第一方面所述的血吸蟲陽性抗原；(2)將步驟⑴得到的抗原與待檢測的樣本接觸；(3)檢測樣本中是否含有與本專利技術第一方面任一所述抗原結合本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種血吸蟲陽性抗原，其特征在于，所述抗原選自：(a)氨基酸序列如SEQ?ID?NO：1?24所示的多肽：(b)將SEQ?ID?NO：1?24氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；(c)與SEQ?ID?NO：1?24所示氨基酸序列的同源性≥90％的、具有免疫原性的多肽；或(d)具有免疫原性的多肽(a)?(c)的片段。
【技術特征摘要】
1.一種血吸蟲陽性抗原，其特征在于，所述抗原選自 (a)氨基酸序列如SEQID NO :1_24所示的多肽 (b)將SEQID NO :1-24氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基取代、缺失或添加而形成的具有免疫原性的衍生多肽；(c)與SEQID NO :1-24所示氨基酸序列的同源性彡90%的、具有免疫原性的多肽；或 (d)具有免疫原性的多肽(a)-(c)的片段。2.如權利要求1所述的陽性抗原，其特征在于，所述抗原的氨基酸序列如SEQID NO:1-8所示。3.權利要求1所述陽性抗原的用途，其特征在于，所述抗原用于制備檢測血吸蟲的試劑或試劑盒。4.一種分離的多核苷酸，其特征在于，包括一核苷酸序列，所述核苷酸序列選自下組 (a)編碼如權利要求1所述陽性抗原的多核苷酸； (b)與多核苷酸(a)互補的多核苷酸。5.如權利要求4所述的多核苷酸，其特征在于，所述多核苷酸編碼具有SEQID NO:l所示氨基酸序列的抗原。6.—種載體，其特征在于，該載體含有權利要求4所述的多核苷酸。7.一種遺傳工程化的宿主細胞，其特征在于，它含有權利要求6所述的載體或染色體整合有權利要求4所述的多核苷酸。8.—種血吸蟲陽性抗原的制備方法，其特征在于，所述方法包括步驟 (a)在適合表達的條件下，培養權利要求7所述的宿主細胞； (b)從培養物中分離...
【專利技術屬性】
技術研發人員：潘衛慶，徐新東，
申請(專利權)人：同濟大學，
類型：發明
國別省市：
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