一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，試劑R1含有緩沖液10～500mM、表面活性劑1～100g/L、電解質5～50g/L、高分子加速劑2～100g/L、穩定劑1～50g/L、防腐劑1～10g/L；試劑R2含有緩沖液10～500mM、抗人APOC2抗體150～300g/L、電解質5～50g/L、防腐劑1～10g/L；校準品含有緩沖液10～500mM、APOC2抗原0～100mg/L、穩定劑1～50g/L、防腐劑1～10g/L、抗氧化劑0.01～10g/L。本發明專利技術使用簡便快速，能夠滿足臨床快速高通量檢測樣本的要求，檢測效率明顯提高，批間差異小，試劑穩定。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及醫學免疫體外診斷試劑領域，具體涉及一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2 (AP0C2)的試劑盒。
技術介紹
人Apo CII為含79個氨基酸殘基的單鏈多肽，分子量為9. lkD。先合成的Apo CII 含101氨基酸殘，其中22個氨基酸構成信號肽，除去信號肽后則轉變為成熟Apo CIL·對 Apo CII的氨基酸序列進行Chuo-Fasman分析表明Apo CII的第13-22, 29-40,43-52氨基酸殘基為雙性α螺旋，具有與脂質結合的功能，第9-12、23-26、53-56氨基酸殘基為β轉角結構，第61-74ΑΑ殘基為α-雙性螺旋，是與脂質結合的區域，第1_39、54_69氨基酸殘基為轉角結構。對Apo CII溴化氰水解片段或合成片段的研究表明Apo CII激活低密度脂蛋白的肽段為羧基端56-79氨基酸殘基，其激活作用可被具有結合磷脂活性的第44-55 氨基酸殘基段加強；切除Apo CII羧基末端3個氨基酸殘基，Apo CII激活低密度脂蛋白的活性完全喪失。低密度脂蛋白是乳糜微粒和極低密度脂蛋白水解的關鍵酶。研究表明ApoCII是低密度脂蛋白不可缺少的激活劑，Apo CII缺乏時，低密度脂蛋白活性極低；Apo CII存在時，低密度脂蛋白活性可增加10-50倍，因此Apo CII具有促進乳糜微粒和將極低密度脂蛋白降解的作用。Apo CII激活將低密度脂蛋白的機理可能是:Apo CII從酶-底物中間體接受脂?；缓髮⑵滢D移到白蛋白上。Apo CII還具有抑制肝臟對乳糜微粒和極低密度脂蛋白攝取的作用。在體外試驗中發現，Apo CII還可抑制肝甘油三酯脂肪酶活性，抑制程度與Apo CII濃度呈線性關系。由于肝脂酶可催化經將低密度脂蛋白作用后脂蛋白殘粒中三酰甘油水解，因此Apo CII亦可能參與血漿中脂蛋白殘粒的清除過程。因此，Apo CII 對脂蛋白的結構、功能和代謝至關重要，可以為診斷脂質代謝疾病提供有價值的指標。現有的AP0C2檢測技術存在諸多不足如需要特殊的設備，樣本需要預處理，不能上全自動生化分析儀進行批量檢測分析等。酶聯免疫法應用比較普遍，其原理是將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體；洗滌除去未結合的抗體及雜質；加待測樣品，使之與固相抗體反應一段時間，讓樣品中抗原與固相載體上的抗體結合；洗滌除去未結合的物質； 加酶標抗體，使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合；洗滌除去未結合的酶標抗體; 此時固相載體上的酶量與樣品中的待測物質的量正相關；加入底物反應顯色。根據顏色反應的程度對測定物質進行定性或定量測定。該方法為非均相免疫檢測系統，測定過程較為繁瑣，耗時長，缺少單位測試運行時間；自動化程度不高，批間差和重復性相對較大；需要配備多種專門設備，一定程度上增加了成本。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，其操作簡單、準確度高、重復性好、可進行批量 樣本全自動化檢測，從而消除上述
技術介紹
中缺陷。為解決上述技術問題，本專利技術的技術方案是一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，該試劑盒包含試劑R1、試劑R2和校 準品，其中，試劑Rl包含緩沖液10 500mM、表面活性劑I 100g/L、電解質5 50g/L、高分 子加速劑2 100g/L、穩定劑I 50g/L、防腐劑I 10g/L ；試劑R2包含緩沖液10 500mM、抗人AP0C2抗體15% 30% (w/v)、電解質5 50g/L、防腐劑 I 10g/L ；校準品包含緩沖液10 500mM、AP0C2抗原O 100mg/L、穩定劑I 50g/L、防腐 劑I 10g/L、抗氧化劑O. 01 10g/L。上述緩沖液10 500mM，即為10 500mmol/L ;抗人AP0C2抗體15% 30% (w/ V)，即為抗人AP0C2抗體濃度為150 300g/L。作為一種改進，上述試劑盒中，所述緩沖液為磷酸鹽、硼酸、甘氨酸、TRIS、PBS、CAPS0、HEPES緩沖液中的一種或幾 種；抗人AP0C2抗體包括鼠抗人、兔抗人、羊抗人、雞抗人、鴨抗人抗體中的一種或兩 種；抗人AP0C2抗體的種類包括單克隆抗體或多克隆抗體中的一種；所述電解質包括氯化鈉、氯化鎂、氯化鉀、硫酸鎂中的一種或幾種；所述高分子加速劑包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇 8000中的一種或多種；所述穩定劑包括牛血清蛋白、乙二胺四乙酸二鈉、葡萄糖、海藻糖、甘露糖醇中的 一種或幾種；所述表面活性劑包括Triton系列、Tween系列、月桂醚、聚氧乙烯燒基苯基醚、聚 氧乙烯壬基苯基醚、聚氧乙烯辛基苯醚中的一種；所述抗氧化劑包括丁基羥基茴香醚、甘草抗氧化物、二丁基羥基甲苯、苯多酚、硫 代二丙酸二月桂酯系列中的一種或幾種；所述防腐劑包括疊氮鈉、苯酚、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲酸乙酯、乙基汞硫代硫 酸鈉中的一種或幾種。為了保證緩沖體系的一致性，作為一種優選的技術方案，所述試劑Rl和試劑R2中 的緩沖液種類相同。作為一種優選的技術方案，該試劑盒中，試劑Rl包含磷酸鹽緩沖液10 IOOmM,聚氧乙烯月桂醚I 50g/L,氯化鈉5 15g/L,聚乙二醇600050 100g/L,乙二胺四乙酸二鈉5 15g/L,疊氮鈉I 5g/L ；試劑R2包含磷酸鹽緩沖液10 IOOmM,羊抗人AP0C2多克隆抗體，氯化鈉5 15g/L,疊氮鈉I 5g/L ；校準品包含甘氨酸緩沖液10 500mM，AP0C2抗原O 80mg/L，乙二胺四乙酸二 鈉5 50g/L,疊氮鈉I 10g/L, 丁基輕基茴香醚0. 01 10g/L。所述校準品可以配制成高濃度單點校準品，在使用時用生理鹽水稀釋成5個不同濃度的參考校準品，也可以直接制備成5個不同濃度的參考校準品。本專利技術的免疫比濁法是抗原抗體結合動態測定方法，其基本原理是樣本中的 AP0C2抗原和試劑R2中的抗人AP0C2抗體發生相應的抗原抗體反應，形成不溶性的抗 原-抗體復合物，使反應液產生一定的濁度。反應液中抗-AP0C2抗體過量時，形成的免疫復 合物的量隨著樣本中AP0C2抗原量的增加而增加，反應液的濁度也相應增加。在特定波長 下測定該復合物的吸光值，與校準品標定的校準曲線比較，即可計算出樣本中的AP0C2的 含量。由于采用了上述技術方案，本專利技術的有益效果是與現有技術相比較，本專利技術提供的試劑盒使用簡便快速，能夠直接采用全自動生 化分析儀進行檢測，操作方法和步驟得到了簡化，滿足臨床快速高通量檢測樣本的要求，檢 測效率明顯提高；試劑盒由于使用了篩選的最優化試劑組合，使得試劑的穩定性大大提高， 2-8°C可以穩定存放一年以上。因此本專利技術試劑盒具有很高的臨床應用價值，適合臨床推廣。附圖說明圖1為本專利技術實施例3、4和5檢測AP0C2含量的方法流程示意圖；圖2為本專利技術實施例3的AP0C2校準品的標準曲線；圖3為本專利技術實施例4與對比試劑相關性趨勢圖。具體實施例方式為了使本專利技術實現的技術手段、創作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結 合具體實施例，進一步闡述本專利技術。實施例11.配制試劑試劑R1 甘氣酸(緩沖液)500 mM 聚氧乙烯烷基苯基醚(表面活性劑) 100 g/L 氯化納和氯化本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，其特征在于：所述試劑盒包含試劑R1、試劑R2和校準品，其中，試劑R1包含緩沖液10～500mM、表面活性劑1～100g/L、電解質5～50g/L、高分子加速劑2～100g/L、穩定劑1～50g/L、防腐劑1～10g/L；試劑R2包含緩沖液10～500mM、抗人APOC2抗體150～300g/L、電解質5～50g/L、防腐劑1～10g/L；校準品包含緩沖液10～500mM、APOC2抗原0～100mg/L、穩定劑1～50g/L、防腐劑1～10g/L、抗氧化劑0.01～10g/L。
【技術特征摘要】
1.一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，其特征在于所述試劑盒包含試劑 R1、試劑R2和校準品，其中，試劑Rl包含緩沖液10 500mM、表面活性劑I 100g/L、電解質5 50g/L、高分子加50g/L、防腐劑 I 10g/L ；500mM、抗人AP0C2抗體150 300g/L、電解質5 50g/L、防速劑2 100g/L、穩定劑I ' 試劑R2包含緩沖液10 腐劑I 10g/L ；校準品包含緩沖液10 , I 10g/L、抗氧化劑0. 01 -■ 500mM、AP0C2抗原O 100mg/L、穩定劑I 50g/L、防腐劑 10g/L。2.如權利要求1所述的一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，其特征在于所述緩沖液為磷酸鹽、硼酸、甘氨酸、TRIS、PBS、CAPS0、HEPES緩沖液中的一種或幾種。3.如權利要求1所述的一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，其特征在于 抗人AP0C2抗體包括鼠抗人、兔抗人、羊抗人、雞抗人、鴨抗人抗體中的一種或兩種；抗人 AP0C2抗體的種類包括單克隆抗體或多克隆抗體中的一種。4.如權利要求1所述的一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，其特征在于所述高分子加速劑包括聚乙二醇2000、聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇8000中的一種或多種。5.如權利要求1所述的一種用免疫比濁法測定載脂蛋白C2的試劑盒，其特征在于所述穩定劑包括牛血清蛋白、乙二胺四乙酸二鈉、葡萄糖、海藻糖、甘...
【專利技術屬性】
技術研發人員：宿明明，王慶國，張洋，王愛龍，
申請(專利權)人：濰坊三維生物工程集團有限公司，
類型：發明
國別省市：
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