從普通豆類提取凝集素的方法以及凝集素制劑技術(shù)

由豆類種子工業(yè)生產(chǎn)凝集素制劑的方法，其中在包含乙酸、抗氧化劑及高揮發(fā)性有機(jī)酸或其鹽的提取系統(tǒng)中從豆類種子中提取凝集素部分，所述提取處于低溫下且基本上無需混合，隨后，在濃縮之后，優(yōu)選在薄膜上濃縮之后，向所得到的PHA部分添加低揮發(fā)性防腐劑并通過噴霧干燥進(jìn)行干燥，得到凝集素制劑，其具有不低于128HU/100mg制劑的凝集素活性和較低水平的碎渣物質(zhì)。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】從普通豆類提取凝集素的方法以及凝集素制劑本專利技術(shù)的主旨是生產(chǎn)用作豬飼料添加劑的凝集素制劑的方法。從波蘭申請(qǐng)說明書P. 375476 “生產(chǎn)凝集素制劑的方法，凝集素制劑以及給予哺乳動(dòng)物凝集素制劑的方法”中已知的專利技術(shù)，采取應(yīng)用防腐劑以保護(hù)粉末形式的產(chǎn)品，并未指出在提取和提取濃縮過程中，尤其是在提取物和濃縮提取物的貯存期以進(jìn)行必要的活性分析期間，以及開始進(jìn)一步生產(chǎn)階段之前的中間期間，需要應(yīng)用防腐劑。在某些情況下，已知的上述說明書P. 375476允許將確定的生物活性的提取物直接分裝至計(jì)量容器中，避開干燥階段。然而，這需要在分裝之前引入防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)方法，并且既不會(huì)影響提取方法也不會(huì)影響其結(jié)果。文獻(xiàn)中已知的其他凝集素生產(chǎn)方法利用多級(jí)提取工序，改變提取物PH和多次過濾，鹽沉淀，滲析和冷凍干燥作為生產(chǎn)固體產(chǎn)品的方法的基礎(chǔ)。上述方法利于生產(chǎn)的凝集素制劑，其預(yù)定活性受限于提取原料中碎渣物質(zhì)的存在。因而存在對(duì)實(shí)現(xiàn)這樣的提取方法的需要，所述方法使得產(chǎn)生具有增強(qiáng)活性的產(chǎn)品成為可能。本專利技術(shù)的目的是實(shí)現(xiàn)由豆類種子生產(chǎn)用作豬飼料添加劑的粉末形式的高活性終產(chǎn)品的方法。出乎意料地，本專利技術(shù)解決了上述問題。本專利技術(shù)的主題是由豆類種子工業(yè)生產(chǎn)凝集素制劑的方法，基于將豆類種子粉碎，在酸性環(huán)境中，在抗氧化劑和防腐劑存在下，提取豆柏，其特征在于所述提取在低溫下進(jìn)行，優(yōu)選4° C至8° C，其中僅在所述提取的開始階段進(jìn)行相混合，接著濃縮提取物，優(yōu)選在薄膜上濃縮，然后向由此產(chǎn)生的PHA部分添加低揮發(fā)性防腐并干燥，優(yōu)選通過噴霧干燥，得到凝集素制劑，其具有的活性凝集素含量不低于128HU/100mg制劑。優(yōu)選地，根據(jù)本專利技術(shù)的方法，其特征在于所述提取利用含有乙酸、抗氧化劑及高揮發(fā)性短鏈有機(jī)酸或其鹽的提取系統(tǒng)，于低溫下進(jìn)行。同樣優(yōu)選地，根據(jù)本專利技術(shù)的方法，其特征在于僅在提取的第一階段混合提取的固相和液相，優(yōu)選在60分鐘之內(nèi)。優(yōu)選地，根據(jù)本專利技術(shù)的方法，其特征在于進(jìn)行提取工序的第二部分時(shí)無需相混合，優(yōu)選在7小時(shí)之內(nèi)。本專利技術(shù)的第二主題是由普通豆類種子生產(chǎn)的豬飼料添加劑，其特征在于凝集素活性不低于128HU/100mg制劑和降低水平的碎渣物質(zhì)。優(yōu)選地，根據(jù)本專利技術(shù)的飼料添加劑，其特征在于根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的方法獲得。出乎意料地，證明明顯減少提取過程中的混合時(shí)間，改變溫度范圍(及由此改變?cè)摴ば虻膭?dòng)力學(xué)和特征)，明顯提高了 PHA提取物(拉丁語植物血凝素(phytohaemagglutinin))的效率和分離性,相對(duì)于文獻(xiàn)所描述的已知的生產(chǎn)PHA凝集素的方法，這實(shí)際上促進(jìn)和保證了具有更高的生物活性和更低水平的碎渣物質(zhì)的產(chǎn)品的生產(chǎn)。生產(chǎn)粉末形式的凝集素制劑的新方法的本質(zhì)，是形成新的提取系統(tǒng)，其中引入提取系統(tǒng)中的變化，即省略混合并相應(yīng)降低工序溫度，顯著地影響提取工序的分離性，表現(xiàn)為降低提取物中的碎渣物質(zhì)含量而并未改變凝集素水平，由此未改變提取物和由其制備的凝集素制劑的活性水平。本專利技術(shù)解決了由豆類種子(在此是普通豆類)提取PHA的效率問題，保證了生產(chǎn)凝集素制劑的單獨(dú)階段中碎渣物質(zhì)的水平降低。生產(chǎn)凝集素制劑的新方法特別涉及由豆類種子提取全部形式的凝集素的階段，并且利于粉末形式的高活性凝集素制劑的生產(chǎn)。因此，最終粉末產(chǎn)品的活性可以由128HU/100mg提高至256HU/100mg，并且同樣地，顯著降低每IOOOHU的生產(chǎn)成本。相對(duì)于利用名稱為“生產(chǎn)凝集素制劑的方法，凝集素制劑以及給予哺乳動(dòng)物凝集素制劑的方法”的專利申請(qǐng)P. 375476，以及專利技術(shù)申請(qǐng)?zhí)朠L384706 ( “凝集素飼料添加劑以及生產(chǎn)其的工業(yè)方法”)中的專利技術(shù)的方法提取的含有并分離的剩余有機(jī)物質(zhì)，所述方法致使生產(chǎn)新的、不同的凝集素制劑，其具有增加的全部5種形式凝集素的質(zhì)量含量。產(chǎn)品和中間階段都通過測(cè)定血凝素活性(HU)來控制，所述血凝素活性(HU)定義為根據(jù)改進(jìn)的Pusztai and Watt (1974)方法，在+25° C的溫度下，導(dǎo)致最終稀釋物中2%紅細(xì)胞懸浮液凝集50%的物質(zhì)的量，表示為mg/ml。間接控制提取和濃縮工序的另一種方法，尤其是為了工藝技術(shù)的目的，是測(cè)定干物質(zhì)。在致力于提高生產(chǎn)凝集素制劑的效率以及用于不同條件提取的技術(shù)時(shí)，出乎意料地證明替換現(xiàn)有技術(shù)的提取技術(shù)方案的應(yīng)用，不僅改進(jìn)了由豆科植物種子(在此是普通豆類)物質(zhì)中提取PHA的條件，這通過提取物和由其在隨后工序中制備的粉末的凝集素活性相對(duì)于干物質(zhì)測(cè)定的增強(qiáng)來證實(shí)，由此證實(shí)提取物和產(chǎn)品中碎渣物質(zhì)含量的降低，并且利于具有活性大于128HU/100mg的凝集素產(chǎn)品的生產(chǎn)。生產(chǎn)粉末的生物活性超過128HU/100mg的可能性，不僅降低了生產(chǎn)相同量的粉末的成本，而且利于設(shè)計(jì)新的凝集素產(chǎn)品制劑。實(shí)施例1利用本專利技術(shù)的方法由豆類種子提取PHA并生產(chǎn)終產(chǎn)品_7] 普通豆類種子的制備在碾磨機(jī)中，于內(nèi)部冷卻和碾磨的溫度控制下，碾磨普通豆類的種子。碾磨工序的溫度在+34° C至40° C之間變化。將碾磨的粒徑設(shè)定為具有Imm直徑的顆粒，其實(shí)際上產(chǎn)生98%的部分具有0. 98至1. 02mm的粒徑。提取溶液的制備利用慢速攪拌器制備用于提取的乙酸溶液，其中將冰乙酸以IOOOml溶液中1.1g乙酸的比率混合到水中。向該溶液中添加每升溶液0.1g抗壞血酸和每升溶液0.1g丙酸。制備的提取溶液的量取決于所碾磨的豆類種子的質(zhì)量。推薦的比率是10:1。提取工序?yàn)榱颂崛。瑢y(cè)定量的粉碎的普通豆類種子添加至提取溶液中并開始混合。10分鐘之后，開始控制提取工序的pH。所推薦的用于提取工序的pH是5. 0±0. 07的范圍。提取30min之后進(jìn)行任何可能的pH校正，因?yàn)樵擖c(diǎn)之后開始值得一提的是該提取系統(tǒng)的pH穩(wěn)定。如果需要PH校正的話，20分鐘之后應(yīng)當(dāng)檢查校正結(jié)果。提取溫度應(yīng)當(dāng)為+4° C至+8° C。混合應(yīng)當(dāng)持續(xù)總共I小時(shí)，隨后的另外7小時(shí)無需混合所述混合物。提取物的離心沉淀在設(shè)計(jì)用于分離蛋白沉淀的高-RPM轉(zhuǎn)子離心機(jī)上進(jìn)行固體的分離。轉(zhuǎn)子直徑為200mm，轉(zhuǎn)速為18000RPM。該工序是周期性的，并且周期由轉(zhuǎn)子體積決定。為了將其制備用作動(dòng)物飼料，分別處理所分離的提取后的殘余物和富含蛋白的產(chǎn)物。講一步的提取工序利用反滲透濃縮澄清的提取物。提取物的初始參數(shù)為干物質(zhì)1. 242%，活性64HU/100ml。分析所濃縮溶液的血凝素活性和干物質(zhì)含量。即將噴霧干燥之前，向所濃縮的提取物添加適當(dāng)?shù)摹⒂?jì)算量的麥芽糖糊精以及N-丙基對(duì)羥基苯甲酸鈉或N-乙基對(duì)羥基苯甲酸鈉二者之一。噴霧干燥工序以不高于+180° C的進(jìn)氣溫度進(jìn)行。分析產(chǎn)品的生物活性，并配制部分原料，這根據(jù)EU的飼料添加劑要求進(jìn)行分析。所得到的產(chǎn)品是灰白色(白色至淡黃色)粉末，高度可流動(dòng)，傾向于凝結(jié)成塊且易于在水中形成懸浮液。該粉末與常用的機(jī)械澆注機(jī)完全兼容。血凝素活性不低于128HU/100mg ;Hg、As、Pb和Cd含量比EU標(biāo)準(zhǔn)更低；符合微生物純度，并且具有由生產(chǎn)起3年的保質(zhì)期。實(shí)施例2測(cè)定制劑活性的血凝試驗(yàn)紅細(xì)朐的制各將從Wistar大鼠采集的Iml血液(和I滴肝素)以1:20稀釋于生理鹽水(0. 9%NaCl)中并離心(2000RPM，15min，4° C)。將上清液連同中間相一起倒出。將紅細(xì)胞重懸于生理鹽水中本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】1.由豆類種子生產(chǎn)凝集素制劑的工業(yè)方法，其中將豆類種子碾碎，在酸性環(huán)境中，在抗氧化劑和防腐劑的存在下，提取豆柏，其特征在于，所述提取在低溫下進(jìn)行，優(yōu)選4° C至8° C，其中僅在提取的開始階段進(jìn)行相混合，接著濃縮提取物，優(yōu)選在薄膜上濃縮，然后向由此產(chǎn)生的PHA部分添加低揮發(fā)性防腐劑并進(jìn)行干燥，優(yōu)選通過噴霧進(jìn)行干燥，得到凝集素制劑，其包含不低于128HU/100mg制劑的凝集素活性。2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述提取利用包含乙酸、抗氧化劑及高揮發(fā)性短鏈有機(jī)酸...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：帕維爾·米沙洛斯基，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：百奧萊克有限公司，
類型：
國別省市：