用于在細胞培養物中生產病毒的過程中除去外來因子的方法技術

本發明專利技術涉及改進的用于生產病毒、特別是用于藥物（例如疫苗接種或基因治療）中的病毒的方法。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及改進的用于生產病毒、特別是用于藥物(例如疫苗接種或基因治療)中的病毒的方法。
技術介紹
新近開發的用于生產包含病毒的藥物(濟免疫原性的組合物或疫苗)的方法之一依賴于細胞培養物系統，特別是哺乳動物細胞培養物。通常，那些系統包括:用目標病毒感染細胞，并在細胞中復制和生產病毒足夠的時間以后，從該細胞純化病毒。在細胞上生產病毒的同時，可以在不同的生產階段給該病毒添加其它原料身組織培養試劑、穩定劑)。因而，外來因子能潛在的通過這些成分中的任一種進入病毒產物中，并污染所述產物。在細胞底物上生產的病毒特別易于發生這類污染。已知外來因子(其中大部分是病毒)會污染生物材料例如細胞系。
技術實現思路
在第一方面,本專利技術提供了用于在細胞培養物中生產目標病毒的方法，該方法包括:使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸，其中該細胞該對該目標病毒的感染是易感的，其特征在于，包含目標病毒的溶液和易感細胞之間的接觸時間少于或等于120分鐘。在第二方面，本專利技術提供了用于生產目標病毒的方法，該方法包括下述步驟: a)使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞對該目標病毒的感染是易感的， b)從該細胞除去包含 目標病毒的溶液，和 c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體。在第三方面，本專利技術提供了用于生產目標病毒的方法，該目標病毒用于藥物中，該方法包括下述步驟: a)使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞該對該目標病毒的感染是易感的， b)從該細胞除去包含目標病毒的溶液， c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體，和任選地 d)用合適的藥用載體配制生產的病毒。在第四方面，本專利技術提供了用于生產目標病毒的方法，該方法包括下述步驟: a)使細胞群體接觸包含目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液，其中該細胞對該目標病毒的感染是易感的，并且該接觸時間段足以允許該目標病毒感染細胞群體的至少一個亞群， b)從該細胞除去該包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液， c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體，其中在復制的目標病毒群體中的至少一種外來因子的DNA含量水平與在包含目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液中存在的水平相比下降了至少90%。在第五方面，本專利技術提供了用于在目標病毒復制過程中除去和/或減少外來因子發生率的方法，該方法包括下述步驟: i)給易感細胞接種病毒接種物，該病毒接種物包含目標病毒和一種或多種外來因子， )培養接種的細胞，和 iii)在接種以后小于120分鐘后，洗滌所述接種的細胞培養物。在另一個方面，本專利技術提供了用于在細胞培養物上生產目標病毒的過程中除去外來因子的方法，該方法包括下述步驟: a)使細胞群體接觸包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞易于被目標病毒感染， b)從該細胞除去包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液， c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體。在另一個方面，本專利技術提供了一種用于在細胞培養物上生產目標病毒的過程中除去外來因子的方法，該方法包括下述步驟: a)使細胞群體接觸包含該目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液，其中該細胞對該目標病毒的感染是易感的，并且該接觸時間段足以允許該目標病毒感染細胞群體的至少一個亞群， b)從該細胞群體除去包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液， c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體，其中與包含目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液相比，從復制的目標病毒群體除去了或基本上除去了該至少一種外來因子。本專利技術也提供了通過本專利技術的方法可得到的研究用病毒種子、主要病毒種子和/或工作病毒種子；以及從本專利技術的病毒種子生產的免疫原性的組合物或疫苗。本專利技術也提供了通過本文所述的任一種方法可得到的病毒懸浮液或病毒制劑、包含所述懸浮液或制劑的疫苗/免疫原性組合物、和它們用于藥物、特別是預防和/或治療疾病中的用途。具體實施例方式病毒表現出不同的物理化學性質，因而它們對物理或化學處理的易感性不同。通常，有包膜病毒具有比無包膜病毒更低的抗性，并且眾所周知，溶劑可以破壞有包膜病毒例如正粘病毒科(Orthomyxoviridae)或副粘病毒科(Paramyxoviridae)。從適合用于藥物的病毒培養物中清除污染性外來因子(具體地，外來病毒)的方法，經常是難以明確的，特別當外來病毒對物理化學試劑處理具有比目標病毒更高的抗性時。當目標病毒和外來病毒都能夠在相同細胞培養物上復制時，用于除去和/或減少外來病毒的發生率的方法是更有限的。一種經典的除去任何外來因子的方法是，通過終點稀釋，克隆目標病毒(例如，疫苗病毒)?？梢允褂猛鈦聿《镜目共《緞┗蛞种苿?當已知時)，盡管對目標病毒的影響通常 是未知的。非常希望從用于生產目標病毒的細胞除去外來因子(當存在時)以避免和/或減少對目標病毒復制的任何干擾，或從由目標病毒的繁殖和生產得到的病毒懸浮液除去外來因子。在允許病毒復制的細胞培養物(即對病毒易感的細胞)中，培養適合用于免疫原性組合物(例如疫苗和/或基因治療)中的病毒。外來因子可以污染細胞培養物、用于接種所述細胞的目標病毒接種物以及在病毒復制和生產過程中使用的任意試劑(例如mm)。雖然有些污染物可能是無害的，但是特別希望除去或大幅減少外來因子的發生率或存在，因為它們可能干擾要用于疫苗和/或基因治療中的目標病毒的生長。類似地，由于安全性原因和健康規管問題，優選地獲得這樣的終產物(例如疫苗):其包含病毒，不含有或基本上不含有任何外來因子污染。因而，本專利技術的一個目的是，提供一種當在細胞培養物上生產病毒時用于除去外來因子的方法。本專利技術人已經演示了在易感細胞培養物中復制/繁殖和生產目標病毒過程中除去和/或減少外來因子的發生率或存在的方法。令人驚奇地，專利技術人觀察到，減少易感細胞和包含目標病毒的溶液之間的接觸時間，會導致不含有或基本上不含有外來因子的目標病毒的生產。術語“接觸時間”是本領域眾所周知的，在本文中用于表示，在接種之后，即在通過洗滌(欲用不含病毒的培養基替換在細胞上的培養基適當的1、2、3、4、5次或更多次)除去或基本上除去病毒接種物之前，病毒接種物與細胞發生接觸的時間段。減少的接觸時間可以隨要生產的目標病毒的類型而變化。例如，接觸的持續時間可以短至使病毒吸附或附著于易感細胞的至少一個亞群所需的時間。技術人員能夠監測給定的病毒與給定的細胞的附著動力學，并從而確定最佳的病毒接觸時間?？梢源_定病毒接觸時間的最大持續時間，使得當在目標病毒接種物中可檢測出外來因子時，在根據本專利技術的方法得到的目標病毒制劑中的外來因子的量減少了至少50%、適當地90%、更適當地95%和甚至99%或99.9%。因此，在有些實施方案中，在本專利技術的方法中，使易感細胞接觸包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液，其中接觸時間段足 以允許目標病毒感染(特別地，至少吸附)細胞群體的至少一個亞群，且其中與在包含目標病毒的溶液中最初存在的水平相比，在生產的目標病毒制劑中的外來因子的DNA含量水平下降了至少90%、適當地至少99%和更適當地99.9%。在本專利技術的方法中，合適的接觸時間少本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.07.08 GB 1011502.01.一種用于在細胞培養物中生產目標病毒的方法，該方法包括:使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸，其中該細胞易于被該目標病毒感染，其特征在于，包含目標病毒的溶液和易感細胞之間的接觸時間少于或等于120分鐘。2.一種用于生產目標病毒的方法，該方法包括下述步驟:a)使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞易于被該目標病毒感染；b)從該細胞除去包含目標病毒的溶液，和c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體。3.一種用于生產目標病毒的方法，該目標病毒用于藥物中，該方法包括下述步驟:a)使細胞群體與包含目標病毒的溶液接觸少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞易于被該目標病毒感染，b)從該細胞除去包含目標病毒的溶液，c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體，和任選地d)用合適的藥用載體配制生產的病毒。4.根據權利要求1-3中的任一項的方法，其中該包含目標病毒的溶液包含一種或多種外來因子。5.根據權利要求4的方法，其中該細胞易于被一種或多種外來因子感染。6.一種用于生產目標 病毒的方法，該方法包括下述步驟:a)使細胞群體接觸包含該目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液，其中該細胞易于被該目標病毒感染，并且該接觸時間段足以允許該目標病毒感染細胞群體的至少一個亞群，b)從該細胞除去該包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液，c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體，其中與在包含目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液中存在的DNA含量水平相比，在復制的目標病毒群體中，該至少一種外來因子的DNA含量水平下降了至少90%。7.一種用于在細胞培養物上生產目標病毒的過程中除去外來因子的方法，該方法包括下述步驟:a)使細胞群體接觸包含該目標病毒和至少一種外來因子的初始溶液，其中該細胞易于被該目標病毒感染，并且該接觸時間段足以允許該目標病毒感染細胞群體的至少一個亞群，b)從該細胞群體除去包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液，c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體，其中與包含目標病毒和該至少一種外來因子的初始溶液相比，從復制的目標病毒群體中除去或基本上除去該至少一種外來因子。8.根據權利要求6或7的方法，其中該接觸時間段少于或等于120分鐘。9.一種用于在細胞培養物上生產目標病毒的過程中除去外來因子的方法，該方法包括下述步驟:a)使細胞群體與包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液接觸少于或等于約120分鐘的時間段，其中該細胞易于被該目標病毒感染，b)從該細胞除去包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液， c)在培養基中培養該細胞，以生產復制的目標病毒群體。10.根據權利要求6-9的方法，其中在步驟a)中的接觸時間足以允許該目標病毒吸附至細胞群體的至少一個亞群上。11.根據權利要求7或權利要求9的方法，其中與在包含目標病毒和至少一種外來因子的溶液中存在的DNA含量水平相比，在復制的目標病毒群體中，該至少一種外來因子的DNA含量水平下降了至少90%。12.根據權利要求6-11的方法，其中該細胞易于被一種或多種外來因子感染。13.根據權利要求2-12中的任一項的方法，其中使用在步驟c)處得到的復制的目標病毒群體作為包含目標病毒的溶液用于根據另一個...

【專利技術屬性】
技術研發人員：FMI科利格農，ISL克諾特，JPJJ馬泰塞，
申請(專利權)人：葛蘭素史密絲克萊恩生物有限公司，
類型：
國別省市：