本發明專利技術公開了一種新型抗腫瘤納米藥物載體及其制備方法與應用。本發明專利技術通過殼聚糖和脫氧膽酸進行酰胺化反應形成共聚物殼聚糖-脫氧膽酸，殼聚糖-脫氧膽酸和甲醛形成希夫堿中間體后與聚乙二醇反應，得到的殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇與葉酸發生酰胺化反應而制備新型抗腫瘤納米藥物載體，利用腫瘤細胞表面葉酸受體高表達而正常組織很少有葉酸受體過分表達的特點，接有葉酸分子的新型抗腫瘤納米藥物載體與腫瘤細胞有更強的親和力，克服了普通納米粒功能較單一的缺點。制備的新型抗腫瘤納米藥物載體能夠很好的避開吞噬細胞的吞噬，有利于在體內長期循環而不被清除，主動靶向修飾能夠更好的與腫瘤細胞特異性結合，減少了藥物對人體正常細胞的損害。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于納米藥物載體
，特別涉及一種新型抗腫瘤納米藥物載體及其制備方法與應用。
技術介紹
癌癥是人類生命健康的最大殺手，化學治療是癌癥治療最重要的手段，然而多數化學治療藥物缺少特定到達腫瘤組織的能力，對腫瘤細胞缺乏選擇殺傷作用，在殺傷腫瘤細胞的同時也傷及正常細胞，特別是癌細胞因為給藥處理產生耐藥性，為了克服癌細胞的耐藥性需要給予更高的抗癌藥劑量，從而對正常細胞造成較大的副作用，甚至中斷治療；另一方面，多數抗腫瘤藥物的功效由于其自身性質，如水溶性差、治療窗口窄等也限制了腫瘤治療的效果。從上世紀70年代開始，納米載體作為化療藥物傳遞系統用于癌癥治療引起了人們的極大關注。用于藥物傳遞系統的納米粒子其粒徑在10 lOOOnm，可以有多種材料構成，包括聚合物、脂質、病毒和有機金屬復合物等。近年來，聚合物納米制劑因為具有較好的理化性能而備受關注。聚合物膠束由雙親性的聚合物材料在水環境中自組裝形成，是具有均一納米級粒徑及球形的核殼結構載體。其親水性外殼可以增強膠束在水性生物介質的分散性和穩定性，并與生物介質相容，內核可包埋難溶性藥物。特別是殼聚糖，由于其優良的細胞相容性、生物可降解性、生物粘附性、無毒性、無免疫原性、抗菌活性等優點，已被大量用于藥物載體，傳遞蛋白、基因、藥物等生物活性分子。因此，以殼聚糖為基礎材料，對其進行疏水修飾，使其在水溶液中自組裝形成膠束的藥物載體被各國學者所研究。簡單疏水修飾的殼聚糖形成的膠束雖然具有可降解，無毒，載藥量高等優點，但是作為抗腫瘤藥物載體，經靜脈注射后，這樣的納米粒也很容易被體內的吞噬細胞當作外來異物識別而被吞噬，在人體內循環的時間不是足夠的長，降低了生物利用率。另外，簡單疏水修飾的殼聚糖膠束也不具有很強的靶向性，不能夠與腫瘤細胞特異的結合，從而不能夠有效降低抗癌藥物對正常細胞的毒副作用。在本研究之前，雖然有研究者分別制備了具有靶向性和體內長循環性的疏水殼聚糖膠束，但同時滿足以上要求的傳遞載體系卻很少。
技術實現思路
本專利技術的首要目的在于克服現有技術的缺點與不足，提供一種新型抗腫瘤納米藥物載體的制備方法。本專利技術的另一目的在于提供由上述制備方法得到的新型抗腫瘤納米藥物載體。本專利技術的再一目的在于提供 所述的新型抗腫瘤納米藥物載體的應用。本專利技術的目的通過下述技術方案實現:一種新型抗腫瘤納米藥物載體的制備方法，包括以下步驟:(I)殼聚糖疏水改性:將殼聚糖(CS)和脫氧膽酸(DA)按摩爾比1:40 1:162于25 40°C反應48 72h，純化后得到共聚物殼聚糖-脫氧膽酸(CS-DA)；(2)聚乙二醇(MPEG)修飾殼聚糖-脫氧膽酸:將步驟(I)制備的殼聚糖-脫氧膽酸和聚乙二醇溶于30 50ml 1%(ν/ν)醋酸溶液中，室溫攪拌15 30min后加入甲醛，室溫反應I 6h，純化后得到殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇(CS-DA-MPEG)聚合物；其中聚乙二醇與殼聚糖-脫氧膽酸的質量比為12:1 20:1，甲醛和殼聚糖-脫氧膽酸的質量比為1:2 1:4;(3)接枝聚合物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇的靶向修飾:將葉酸(FA)和步驟(2)制備的殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇按質量比1:1 2:1于35 40°C水浴中避光反應16 24h，純化后得到接枝共聚物載體殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸(CS-DA-MPEG-FA)；(4)新型抗腫瘤納米藥物載體的制備:將步驟(3)制備的接枝共聚物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸溶于醋酸溶液中，得到混合液，每毫升醋酸溶解接枝共聚物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸I 2mg ；將混合液置于透析袋中透析后，將透析袋內的溶液冷凍干燥，得到新型抗腫瘤納米藥物載體；步驟(I)中:所述的殼聚糖的分子量優選為50000 ；所述反應的條件優選25°C磁力攪拌48 72h ； 所述的反應優選在催化劑1-乙基-(3- 二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)中進行；所述的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺與脫氧膽酸的摩爾比優選為2:1，所述的1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺與N-羥基琥珀酰亞胺的摩爾比優選為3:1 ；所述的純化優選采用以下方法進行:待反應結束時，向反應瓶中加入氨水，離心，棄去上清液，甲醇洗滌沉淀3 5次后透析7天，冷凍干燥，得到共聚物殼聚糖-脫氧膽酸；所述的冷凍干燥的條件為在-10°C冷凍過夜后置于凍干機中凍干24h ；優選的，所述的殼聚糖疏水改性采用以下方法進行:將殼聚糖溶于1%(ν/ν)醋酸水溶液中，得到殼聚糖醋酸溶液；將DA、EDC、NHS加入甲醇中活化半小時，得到混合液；然后將混合液滴加到殼聚糖醋酸溶液中，25°C磁力攪拌48 72h，純化后得到共聚物殼聚糖-脫氧膽酸；殼聚糖和脫氧膽酸的摩爾比為1:40 1:162 ;步驟(2)中:所述的聚乙二醇優選為甲氧基聚乙二醇；所述的甲氧基聚乙二醇的分子量優選為5000 ；所述的室溫反應優選在二甲基亞砜(DMSO)中進行；所述的純化優選采用以下方法進行:向反應瓶中加入50ml丙酮使反應物沉淀下來，棄去上清液將沉淀透析7天，冷凍干燥，得到聚合物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇；所述的冷凍干燥的條件為在-10°C冷凍過夜后置于凍干機中凍干24h ；步驟(3)中:所述的避光反應優選在催化劑1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺(EDC)中進行；所述的葉酸和1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺的質量比優選為1:1 ;所述的純化優選采用以下方法進行:用氫氧化鈉溶液將反應液的pH調至9后離心，棄去上清液將沉淀透析，冷凍干燥，得到殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸聚合物；所述的透析的條件為在pH為7.4的PBS溶液中透析7天后在雙蒸水中透析7天；所述的冷凍干燥的條件為在-10°C冷凍過夜后置于凍干機中凍干24h ；優選的，所述的接枝聚合物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇的靶向修飾采用以下方法進行:將殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇溶于1%(ν/ν)醋酸溶液中，得到殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇醋酸溶液；將葉酸溶解于DMSO中，加入0.3g EDC后避光攪拌lh，得到混合液，將混合液在30分鐘內滴加到殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇醋酸溶液中，于35 40°C水浴中避光攪拌反應16 24h，純化后得到接枝共聚物載體殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸；葉酸和殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇的質量比為1:1 2:1 ;步驟(4)中:所述的醋酸溶液優選為1%(ν/ν)醋酸水溶液；優選的，每毫升醋酸溶解接枝共聚物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸Img ；所述的透析優選為去離子水透析；所述的透析袋截留分子量為10000 ；所述的透析優選按照以下方法進行:先用生理鹽水透析24h，然后用雙蒸水透析24h，其中前3h每Ih換一次雙蒸水，以后每3h換一次雙蒸水；所述的冷凍干燥按照以下方法進行:在-10 -20°C冷凍過夜后置于凍干機中凍干12 24h，優選在-10°C冷凍過夜后置于凍干機中凍干24h ；—種新型抗腫瘤納米藥物載體，由上述制備方法得到；所述的新型抗腫瘤納米藥物載體可應用于輸送多種治療腫瘤的化療藥物，如阿霉素、紫杉醇、喜樹堿等。本專利技術的專利技術機理如圖5所示。本專利技術相對于現有技術具有如下的優點及效果:本專利技術通本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種新型抗腫瘤納米藥物載體的制備方法，其特征在于包括以下步驟：（1）殼聚糖疏水改性：將殼聚糖和脫氧膽酸按摩爾比1:40～1:162于25～40℃反應48～72h，純化后得到共聚物殼聚糖?脫氧膽酸；（2）聚乙二醇修飾殼聚糖?脫氧膽酸：將步驟（1）制備的殼聚糖?脫氧膽酸和聚乙二醇溶于30～50ml1%醋酸溶液中，室溫攪拌15～30min后加入甲醛，室溫反應1～6h，純化后得到殼聚糖?脫氧膽酸?聚乙二醇聚合物；聚乙二醇與殼聚糖?脫氧膽酸的質量比為12:1～20：1，甲醛和殼聚糖?脫氧膽酸的質量比為1:2～1:4；（3）接枝聚合物殼聚糖?脫氧膽酸?聚乙二醇的靶向修飾：將葉酸和步驟（2）制備的殼聚糖?脫氧膽酸?聚乙二醇按質量比1:1～2:1于35～40℃水浴中避光反應16～24h，純化后得到接枝共聚物載體殼聚糖?脫氧膽酸?聚乙二醇?葉酸；（4）新型抗腫瘤納米藥物載體的制備：將步驟（3）制備的接枝共聚物殼聚糖?脫氧膽酸?聚乙二醇?葉酸溶于醋酸溶液中，得到混合液，每毫升醋酸溶解接枝共聚物殼聚糖?脫氧膽酸?聚乙二醇?葉酸1～2mg；將混合液置于透析袋中透析后，將透析袋內的溶液冷凍干燥，得到新型抗腫瘤納米藥物載體。...
【技術特征摘要】
1.一種新型抗腫瘤納米藥物載體的制備方法，其特征在于包括以下步驟: (1)殼聚糖疏水改性:將殼聚糖和脫氧膽酸按摩爾比1:40 1:162于25 40°C反應48 72h，純化后得到共聚物殼聚糖-脫氧膽酸； (2)聚乙二醇修飾殼聚糖-脫氧膽酸:將步驟(I)制備的殼聚糖-脫氧膽酸和聚乙二醇溶于30 50ml 1%醋酸溶液中，室溫攪拌15 30min后加入甲醛，室溫反應I 6h，純化后得到殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇聚合物；聚乙二醇與殼聚糖-脫氧膽酸的質量比為12:1 20:1，甲醛和殼聚糖-脫氧膽酸的質量比為1:2 1:4 ; (3)接枝聚合物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇的靶向修飾:將葉酸和步驟(2)制備的殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇按質量比1:1 2:1于35 40°C水浴中避光反應16 24h，純化后得到接枝共聚物載體殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸； (4)新型抗腫瘤納米藥物載體的制備:將步驟(3)制備的接枝共聚物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸溶于醋酸溶液中，得到混合液，每毫升醋酸溶解接枝共聚物殼聚糖-脫氧膽酸-聚乙二醇-葉酸I 2mg ;將混合液置于透析袋中透析后，將透析袋內的溶液冷凍干燥，得到新型抗腫瘤納米藥物載體。2.根據權利要求1所述的新型抗腫瘤納米藥物載體的制備方法，其特征在于:步驟(I)中所述反應的條件為25°C磁力攪拌48 72h。3.根據權利要求1所述的 新型抗腫瘤納米藥物載體的制備方法，其特征在于:步驟(I)中所述的殼聚...
【專利技術屬性】
技術研發人員：郭瑞，張淵明，師忠根，唐渝，
申請(專利權)人：暨南大學，
類型：發明
國別省市：
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