可逆終端及其合成和在DNA合成測序中的用途制造技術

本發明專利技術公開了一種可逆終端及其合成和在DNA合成測序中的用途。所述可逆終端的結構式如式(I)所示：其中R1為熒光素，R2為連接單元。本發明專利技術的可裂解該可逆終端可用于DNA合成測序；同時，本發明專利技術的可逆終端的合成所需原料簡單易得，合成過程均為常規化學反應，可用于大規模推廣使用，并且生物學評價結果表明該類可逆終端能完全滿足高通量測序的生化反應要求，具備較好的實用前景。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及化學合成和生物化學領域，具體涉及一類可逆終端及其合成和在DNA合成測序中的用途。
技術介紹
DNA測序技術是現代生物學研究中重要的手段之一。人類基因組計劃完成后，DNA測序技術得到了迅速發展。DNA測序(DNA sequencing)是指分析特定DNA片段的堿基序列，也就是腺嘌呤(A)、胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)與鳥嘌呤(G)的排列方式。發展精確、高通量、低成本的DNA測序方法對于生物、醫藥科學等具有非常重要的意義。 合成法測序(Sequencing By Synthesis, SBS)是新一代DNA測序技術之一。合成法測序方法通過把大量被測的模板DNA片段進行固定，并在固定化的DNA測序模板上雜交結合通用的DNA引物，分別控制四種核苷酸在DNA引物上的延伸。通過檢測延伸反應過程或延伸核苷酸，實現高通量并行的DNA序列信息的檢測。在合成法測序中，首先要合成DNA鏈延長的四種核苷酸原料，又叫“可逆終端”(reversible terminator)。這類核苷酸衍生物必須有一個可裂解的連接單元把核苷酸和熒光素連接起來。然后，在下一個指示核苷酸并入之前，在溫和的條件下使該連接單元斷裂，以便下一個可逆終端可以順利并入，從而依次讀出DNA堿基序列。該連接單元對合成法測序的讀長和效率都有重要影響，因此，人們也一直致力于發展新的可裂解連接單元，來提高DNA測序的效率。目前已報道的連接單元有光裂解、Pd催化裂解、氟化物可裂解等，但是這些連接單元目前僅限于基礎研究,并不能實際應用(Accounts ofChemical Research2010,43,551-563.)。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供一種可逆終端及其合成和在DNA合成測序中的用途。該可逆終端具有還原敏感或酸敏感性。本專利技術的目的是通過以下技術方案來實現的:本專利技術涉及一種可逆終端，其結構式如式(I)所示:本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種可逆終端，其結構式如式(I)所示：其中R1為熒光素，R2為連接單元。FDA00002739562400011.jpg

【技術特征摘要】
1.一種可逆終端，其結構式如式(I)所示:2.按權利要求1所述的可逆終端，其特征在于，所述可逆終端的結構式如式(II)所示:3.按權利要求2所述的可逆終端，其特征在于，所述可逆終端是通過如下步驟合成的:A、化合物F2的合成:在冰水浴攪拌條件下，摩爾比為1.0: (1.2 2)的丙炔胺與三 氟乙酸甲酯反應，得化合物F24.按權利要求2所述的可逆終端，其特征在于，所述可逆終端是通過如下步驟合成的: A、化合物F2的合成:在冰水浴攪拌條件下，摩爾比為1.0: (1.2 2)的丙炔胺與三 氟乙酸甲酯反應，得化合物5.按權利要求1所述的可逆終端，其特征在于，所述可逆終端的結構式如式(III)所示:6.按權利要求5所述的可逆終端，其特征在于，所述可逆終端是通過如下步驟合成的: A、化合物N-1的合成:以甲醇為溶劑，在TEA存在的條件下，半胱胺鹽酸鹽在冰浴攪拌條件下與2-輕乙基二硫化物7.按權利要求1所述的可逆終端，其特征在于，所述可逆終端的結構式如式(IV)所示...

【專利技術屬性】
技術研發人員：沈玉梅，趙小東，邵志峰，龔兵，湯道年，李小衛，彭麗娜，邢宇洋，莊園，黎慶，伍新燕，
申請(專利權)人：上海交通大學，
類型：發明
國別省市：