本發明專利技術涉及一種具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束及其制備方法。該具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束包括：mPEG-PCL-s-s-FITC和mPEG-PCL-s-s-Dabcyl，其中，具有FRET效應的供體FITC和受體Dabcyl通過共價交聯接合到mPEG-PCL-s-s-NH2上，且所述mPEG-PCL-s-s-FITC和mPEG-PCL-s-s-Dabcyl的質量比為1:1～1:3。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及基因及藥物載體領域，特別是涉及一種具有FRET效應的還原敏感型熒光納米膠束及其制備方法。
技術介紹
突光共振能量轉移(FluorescenceResonance Energy Transfer, FRET)技術作為一種經典的熒光技術，與熒光成像技術結合，在生物大分子相互作用、免疫分析、核酸檢測等方面具有廣泛的應用。FRET是指在兩個不同的熒光基團中，當作為供體的熒光基團與作為受體的熒光基團的吸收光譜有一定重疊，并且這兩個熒光基團的距離在廣10納米時，熒光能量由供體分子向受體分子轉移。使得供體分子的熒光強度比它單獨存在時要低的多，而受體分子發射的熒光卻大大增強。近年來，具有環境響應性的智能型自組裝形成的聚合物膠束作為藥物載體在生物醫學領域顯示了良好的應用前景，引起了越來越多科學工作者的關注。智能型聚合物納米膠束利用某些鏈段對環境的敏感性，在相應條件下使其發生降解、聚合物結構的相轉變或體積相轉變等，從而達到控制藥物釋放的目的。目前，已合成了多種基于一種或多種環境響應型的智能化的聚合物納 米膠束，如Jun Chen等合成了一種pH值和還原敏感雙重響應的聚合物，用于細胞內的阿霉素運輸，有效地增強了阿霉素在細胞內的釋放。但是，同時具有FRET效應和還原敏感響應的熒光納米膠束一直未見報道。
技術實現思路
基于此，有必要提供一種同時具有FRET效應和還原敏感響應的熒光納米膠束及其制備方法。一種具有FRET效應的還原敏感型熒光納米膠束的制備方法，包括:制備聚乙二醇-聚己內酯(mPEG-PCL);將mPEG-PCL溶于四氫呋喃(THF)中，加入三乙胺(TEA)并攪拌，再加入對硝基苯氯甲酸酯(4-nitrophenyl chlorformate, PNC),室溫攪拌反應過夜，經純化處理得到mPEG-PCL-PNC ；將胱胺二鹽酸鹽(cystamine dihydrochlochloride)溶于二甲基亞諷(Dimethylsulfoxide, DMS0)和吡啶的混合液中，室溫攪拌4小時，將所述mPEG-PCL-PNC溶于二甲基亞砜，混合所述胱胺二鹽酸鹽和mPEG-PCL-PNC的溶液，并于35 50 V下連續攪拌反應2 3天，在重蒸水中透析3 4天，收集透析產物，冷凍真空干燥后得到mPEG-PCL-s-s-NH2 ；將所述HiPEG-PCL-S-S-NH2溶于二甲基甲酰胺中，加入異硫氰酸熒光素(Fluorescein Isothiocyanate, FITC),所述 mPEG-PCL-s-s-NH2 與 FITC 的摩爾比為1: f 1: 5，常溫下攪拌，反應過夜，在二甲基甲酰胺中透析f 2天，轉移至重蒸水中繼續透析2 3天，真空冷凍干燥得到mPEG-PCL-s-s-FITC ；將所述mPEG-PCL-s-s-NH2溶于二甲基甲酰胺中，加入改性4- 二甲胺偶氮苯-4'-羧酸(Dabcyl),所述mPEG-PCL-s-s-NH2與所述改性Dabcyl的摩爾比為1:1 1:5,常溫下攪拌，反應過夜，在二甲基甲酰胺中透析f 2天，轉移至重蒸水中繼續透析2 3天，真空冷凍干燥得到mPEG-PCL-s-s-Dabcyl ；將所述mPEG-PCL-s-s-FITC和mPEG-PCL-s-s-Dabcyl分別溶于四氫呋喃中，然后按照所述mPEG-PCL-s-s-FITC與mPEG-PCL-s-s-Dabcy的質量比為1:1 1:3的比例混合得到混合溶液，在攪拌的過程中滴加重蒸水，將滴加了重蒸水的混合溶液轉移到重蒸水中透析2 3天，得到具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束。在其中一個實施例中，所述改性Dabcyl通過以下步驟制備:將Dabcyl溶于二甲基甲酰胺中，依次加入體積為所述二甲基甲酰胺的5 10倍量的二環己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，常溫下攪拌反應過夜，離心取上清，得到改性Dabcyl。在其中一個實施例中，所述制備mPEG-PCL包括步驟:將權利要求1.一種具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束的制備方法，其特征在于，包括:制備 mPEG-PCL ； 將所述mPEG-PCL溶于四氫呋喃中，加入三乙胺并攪拌，再加入PNC，室溫攪拌反應過夜，經純化處理得到mPEG-PCL-PNC ； 將胱胺二鹽酸鹽溶于二甲基亞砜和吡啶的混合液中，室溫攪拌4小時，將所述mPEG-PCL-PNC溶于二甲基亞砜，混合所述胱胺二鹽酸鹽和mPEG-PCL-PNC的溶液，并于35 5(TC下連續攪拌反應2 3天，在重蒸水中透析3 4天，收集透析產物，冷凍真空干燥后得到 mPEG-PCL-s-s-NH2 ； 將所述mPEG-PCL-s-s-NH2溶于二甲基甲酰胺中，加入FITC，所述mPEG-PCL-s-s_NH2與所述FITC的摩爾比為1: f 1: 5，常溫下攪拌，反應過夜，在二甲基甲酰胺中透析f 2天，轉移至重蒸水中繼續透析2 3天，真空冷凍干燥得到mPEG-PCL-s-s-FITC ； 將所述mPEG-PCL-s-s-NH2溶于二甲基甲酰胺中，加入改性Dabcyl，所述mPEG-PCL-s-s-NH2與改性Dabcyl的摩爾比為1:1 1: 5，常溫下攪拌，反應過夜，在二甲基甲酰胺中透析廣2天，轉移至重蒸水中繼續透析2 3天，真空冷凍干燥得到mPEG-PCL-s-s-Dabcyl ;及 將所述mPEG-PCL-s-s-FITC和mPEG-PCL-s-s-Dabcyl分別溶于四氫呋喃中，然后按照所述mPEG-PCL-s-s-FITC與mPEG-PCL-s-s-Dabcy的質量比為1:1 1:3的比例混合得到混合溶液，在攪拌的過程中滴加重蒸水，將滴加了重蒸水的混合溶液轉移到重蒸水中透析2 3天，得到具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束。2.根據權利要求1所述的具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束的制備方法，其特征在于，所述改性Dabcyl通過以下步驟制備:將Dabcyl溶于二甲基甲酰胺中，依次加入體積為所述二甲基甲酰胺的5 10`倍量的二環己基碳二亞胺和N-羥基琥珀酰亞胺，常溫下攪拌反應過夜,離心后取上清,得到改性Dabcyl。3.根據權利要求1所述的具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束的制備方法，其特征在于，所述制備mPEG-PCL包括步驟: 將d用氫化鈣干燥，減壓蒸餾；取甲基化的聚乙二醇，于80°C抽真空I小時；往所述甲基化的聚乙二醇中加入辛酸亞錫和干燥的在氮氣保護下140°C反應8小時后，加入氯仿溶解反應產物，再用正己烷沉淀，抽濾，真空干燥后得到mPEG-PCL。4.根據權利要求1所述的具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束的制備方法，其特征在于，所述mPEG-PCL與所述三乙胺的摩爾比為300:1 100:1。5.根據權利要求1所述的具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束的制備方法，其特征在于，所述mPEG-PCL與所述PNC的摩爾比為0.1: f 1:1。6.根據權利要求1所述的具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束的制備方法，其特征在于，所述mPEG-PCL-PNC與胱胺二鹽酸鹽的摩爾比為0.01: f 0.1:1。7.根據權利要求1所述的具有FRET效應的還原敏感型本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束的制備方法，其特征在于，包括：制備mPEG?PCL；將所述mPEG?PCL溶于四氫呋喃中，加入三乙胺并攪拌，再加入PNC，室溫攪拌反應過夜，經純化處理得到mPEG?PCL?PNC；將胱胺二鹽酸鹽溶于二甲基亞砜和吡啶的混合液中，室溫攪拌4小時，將所述mPEG?PCL?PNC溶于二甲基亞砜，混合所述胱胺二鹽酸鹽和mPEG?PCL?PNC的溶液，并于35~50℃下連續攪拌反應2~3天，在重蒸水中透析3~4天，收集透析產物，冷凍真空干燥后得到mPEG?PCL?s?s?NH2；將所述mPEG?PCL?s?s?NH2溶于二甲基甲酰胺中，加入FITC，所述mPEG?PCL?s?s?NH2與所述FITC的摩爾比為1:1~1:5，常溫下攪拌，反應過夜，在二甲基甲酰胺中透析1~2天，轉移至重蒸水中繼續透析2~3天，真空冷凍干燥得到mPEG?PCL?s?s?FITC；將所述mPEG?PCL?s?s?NH2溶于二甲基甲酰胺中，加入改性Dabcyl，所述mPEG?PCL?s?s?NH2與改性Dabcyl的摩爾比為1:1~1:5，常溫下攪拌，反應過夜，在二甲基甲酰胺中透析1~2天，轉移至重蒸水中繼續透析2~3天，真空冷凍干燥得到mPEG?PCL?s?s?Dabcyl；及將所述mPEG?PCL?s?s?FITC和mPEG?PCL?s?s?Dabcyl分別溶于四氫呋喃中，然后按照所述mPEG?PCL?s?s?FITC與mPEG?PCL?s?s?Dabcy的質量比為1:1~1:3的比例混合得到混合溶液，在攪拌的過程中滴加重蒸水，將滴加了重蒸水的混合溶液轉移到重蒸水中透析2~3天，得到具有FRET效應的還原敏感型聚合物納米膠束。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：蔡林濤，石碧華，劉朋，龔萍，王碧，
申請(專利權)人：深圳先進技術研究院，
類型：發明
國別省市：廣東;44
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