【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及細(xì)胞生物學(xué)和分子生物學(xué)領(lǐng)域，具體地說，涉及。
技術(shù)介紹
滋養(yǎng)層干細(xì)胞(Trophoblast stem cells, TSC)是胚胎發(fā)育過程中分化為胎盤部分的前體細(xì)胞。在小鼠中，TSC可經(jīng)囊胚一端的滋養(yǎng)外胚層(Trophectoderm, TE)貼壁后獲得。與來自于囊胚的內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(Inner cell mass, ICM)的胚胎干細(xì)胞(Embryonic stemcells, ESC)的多能性相比，TSC的分化發(fā)育能力是有限的。目前在一些物種中獲得的TSC已經(jīng)用于研究細(xì)胞的分化現(xiàn)象(Flechon.J.E.1995; Talbot, 2000;Miyazaki, 2002; Hashizume K, 2006)ο2i 體系主要包含了 CHIR99021 和 PD0325901。CHIR99021 是一種針對(duì)于GSK3 (glycogen synthase kinase3)且特性明確的、高效選擇性的小分子抑制劑(Murray等，2004)。PD0325901 是一種 MEK (mitogen-activated protein kinase kinase)的小分子抑制劑。已有研究顯示在MEF細(xì)胞和3i (CHIR99021, PD184352, SU5402)的培養(yǎng)條件下，可從Rat囊胚獲得有生殖嵌合能力的大鼠ES細(xì)胞(Ping Li，2008)。同時(shí)該研究顯示以L細(xì)胞和2i (CHIR99021，Η)0325901)的培養(yǎng)條件下獲得的Rat ES貼壁生長更穩(wěn)定且該ES細(xì)胞可用于遺傳操作。目前，在家畜TSC研究方面，國外有相關(guān)培養(yǎng)體系的研究報(bào)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種牛滋養(yǎng)層干細(xì)胞建系方法，其特征在于，在體外條件下，將經(jīng)過鏈霉蛋白酶處理去透明帶后的牛囊胚接種于經(jīng)絲裂霉素處理后的小鼠胎兒成纖維細(xì)胞和Wnt?3A小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞的飼養(yǎng)層中，加入2i小分子抑制劑培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，從而構(gòu)建牛滋養(yǎng)層干細(xì)胞系。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種牛滋養(yǎng)層干細(xì)胞建系方法，其特征在于，在體外條件下，將經(jīng)過鏈霉蛋白酶處理去透明帶后的牛囊胚接種于經(jīng)絲裂霉素處理后的小鼠胎兒成纖維細(xì)胞和fct-3A小鼠皮下結(jié)締組織細(xì)胞的飼養(yǎng)層中，加入2i小分子抑制劑培養(yǎng)液進(jìn)行細(xì)胞的傳代培養(yǎng)，從而構(gòu)建牛滋養(yǎng)層干細(xì)胞系。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建系方法，其特征在于，所述2i小分子抑制劑培養(yǎng)液配方以IL計(jì)為:DMEM/F12 (1:1 )482.4mlNeurobasali vi Medium482.4mlB27 Supplement(50x)1OmlN-2 Supplement( IOOx)5mlGI Litama x (100 χ)1Omi青霉素-鏈霉素溶液(IOOx)1Oml5m M PD03259011ΟΟμ.130mM CHIR990211ΟΟμΙ 其中，PD0325901為非ATP競爭性的MAPK激酶MEK抑制劑，分子式C16H14F3IN2O,分子結(jié)構(gòu)如式(I)所示:3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建系方法，其特征在于，所述囊胚為發(fā)育到第7天的牛囊胚。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的建系方法，其特征在于，小鼠胎兒成纖...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：李榮鳳，李雪玲，黃翔華，烏云畢力格，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：內(nèi)蒙古大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：內(nèi)蒙古;15
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