一種用于中藥批次一致性的判斷方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種用于中藥各批次樣本一致性的判斷方法，在指紋圖譜相似度分析的基礎(chǔ)上，通過建立參考圖譜，并計算各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與參考圖譜的馬氏距離，然后將馬氏距離轉(zhuǎn)化為F檢驗，從而判斷不同批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與參考圖譜之間在一定概率水平下是否有顯著差異；對于馬氏距離判定為有顯著差異的批次樣品，采用t檢驗方法可以判定這些批次樣品HPLC指紋圖譜中哪些色譜峰對應(yīng)成分含量是否有顯著性差異。本發(fā)明專利技術(shù)的方法基于色譜指紋圖譜，簡便、易行、實用，能夠從概率的角度通過判斷中藥各批次樣品指紋圖譜的差異來實現(xiàn)對各批次樣品一致性的判斷，為中藥批次一致性的判斷提供了方法依據(jù)。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及。
技術(shù)介紹
中藥用來防治和治療疾病已有上千年的歷史。與合成藥物不同，中藥及其制劑的療效發(fā)揮主要是多種成分的協(xié)同作用。最近幾十年，由于其低毒性和高療效，中藥在全球的需求量逐年增長，尤其是在亞洲、歐洲和北美洲。需求量的增大也就意味著對質(zhì)量標準提出更高的要求。每一批次的中藥都應(yīng)滿足特定產(chǎn)品的規(guī)范要求，如生產(chǎn)日期和保質(zhì)期等。然而，即使僅有幾種草藥制成的簡單制劑就可能包含上百種獨特的、專一性的成分，其質(zhì)量控制遠比合成藥困難的多。若將中藥所含全部成分進行表征是中藥質(zhì)量控制及評價所面臨的一個巨大挑戰(zhàn)。此外，只篩選一種或幾種成分進行中藥質(zhì)量控制并不符合傳統(tǒng)的中藥理論。近些年來，通過大量的研究表明，色譜指紋圖譜已經(jīng)成為一種廣泛接受的中藥質(zhì)量控制及評價方法。1991年，WHO頒布了基于中藥質(zhì)量、安全、效用和預(yù)期用途評估的指導(dǎo)方針。那時，色譜指紋圖譜作為一種可以接受的測定方法來應(yīng)用。十幾年后，美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)、歐洲醫(yī)藥評價署(EMES)及國家食品藥品監(jiān)督管理局(SFDA)都接受色譜指紋圖譜用于草本藥物的質(zhì)量控制，并推動了其發(fā)展 6]。作為一種質(zhì)量評價方法，色譜指紋圖譜能夠反映復(fù)雜分析樣品(如中藥)中包含的多種化學成分信息，可以給出更加全面的質(zhì)量評價。為了推進指紋圖譜方法有效用于中藥質(zhì)量控制，SFDA建議中藥色譜指紋圖譜應(yīng)該進行相似度評價(包括相關(guān)系數(shù)和夾角余弦兩種計算方法m)。如今，相似度已廣泛用于評價指紋圖譜的相似性。然而，相似度越高是否意味著指紋圖譜的差異就越小呢？近年來，高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜結(jié)合某些特征性成分的含量測定方法已經(jīng)建立并用于中藥制劑的質(zhì)量控制。在這些研究工作中，盡管樣品的指紋圖譜相似度評價令人滿意，但不同樣品中某些成分的含量仍然呈現(xiàn)較大的差異。這說明指紋圖譜相似度評價不能夠充分反映指紋圖譜之間的相似性，也不能充分說明樣品所含成分含量的相似性。如何評價指紋圖譜之間的相似性(或差異)是一個值得深入研究的問題。為了確保中藥各批次樣品質(zhì)量具有較好的穩(wěn)定性和一致性，各批次樣品的指紋圖譜差異越小越好。然而，在現(xiàn)階段，對于中藥這樣的復(fù)雜分析體系，通過對其所含所有成分進行定性、定量分析來實現(xiàn)質(zhì)量控制并不現(xiàn)實。因此，本申請基于色譜指紋圖譜提出了一種用于中藥質(zhì)量批次一致性的判斷方法，該方法能夠從概率的角度判斷不同批次樣品指紋圖譜之間的差異是否顯著，并能給出指紋圖譜中哪些色譜峰對應(yīng)成分在含量上存在較大差異，以期為中藥質(zhì)量控制及評價提供一種有效、實用的方法模式。
技術(shù)實現(xiàn)思路
針對上述現(xiàn)有技術(shù)，本專利技術(shù)基于色譜指紋圖譜，提出了一種用于中藥各批次樣本一致性的判斷方法，該方法簡便、易行、實用，能夠從概率的角度通過判斷中藥各批次樣品指紋圖譜的差異來實現(xiàn)對各批次樣品一致性的判斷。中藥各批次樣本的一致性可以通過判斷各批次樣本指紋圖譜之間的差異來體現(xiàn):若不同批次樣品色譜指紋圖譜的差異在一定概率水平上無顯著性，則各批次樣品的一致性無顯著性差異；否則，一致性有顯著性差異；對于一致性有顯著性差異的批次樣品，可以分析指紋圖譜中哪些色譜峰差異較大。本專利技術(shù)是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的:一種用于中藥各批次樣本一致性的判斷方法，步驟如下:(I)擇取待判斷的多個不同批次的中藥樣品，研磨后，采用適合提取該中藥有效成分的溶劑提取，獲得提取液；(2)采用高效液相色譜儀在適合該中藥的檢測波長處采集上述不同批次的中藥樣品的提取液的原始高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜；(3)將上述所得的HPLC指紋圖譜進行方法學驗證，使所測定的HPLC指紋圖譜符合指紋圖譜技術(shù)規(guī)范要求(即:精密度試驗、重現(xiàn)性試驗和穩(wěn)定性試驗符合要求。根據(jù)精密度試驗和重現(xiàn)性試驗要求，考察色譜峰的相對保留時間、峰面積比值的一致性。在指紋圖譜中規(guī)定共有峰面積比值的各色譜峰，其峰面積比值的相對標準偏差(RSD)不得大于3% ;根據(jù)穩(wěn)定性試驗要求，考察色譜峰的相對保留時間、峰面積比值的一致性，確定檢測時間)；然后計算各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜的平均圖譜作為對照圖譜；分別計算各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與對照圖譜的相似度；若相似度(r)大于等于0.900，則保留，若r<0.900，則將其剔除，然后重新計算剩余批次的中藥樣品的對照圖譜，及剩余各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與剩余批次的中藥樣品的對照圖譜的相似度，然后再采用與上述相同的標準考察相似度(即:若r大于等于0.900，則保留，若r〈0.900，則將其剔除);重復(fù)該過程，直到其符合要求(即:相似度r均> 0.900)；(4)從上述選擇后剩余的批次中選擇有效成分含量高的樣品(可以選擇一批，也可以選擇若干批)的HPLC指紋圖譜作為參考，選擇與參考樣品的HPLC指紋圖譜歐氏距離最近的多個批次的中藥樣品，然后與參考樣品構(gòu)建參考類別，并計算參考類別樣品的平均指紋圖譜，即參考圖譜；(5)基于上述參考類別，計算各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與參考圖譜的馬氏距離，然后將馬氏距離轉(zhuǎn)化為F檢驗，從而判斷不同批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與參考圖譜之間在一定概率水平下是否有顯著差異；(6)找出馬氏距離判定為有顯著性差異的那些批次的中藥樣品，采用t檢驗將這些批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜的共有峰與參考類別各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜的共有峰進行檢驗，判斷共有峰中各色譜峰面積在一定概率水平下是否有顯著性差異；判斷為有顯著性差異的色譜峰，表明該批次的中藥樣品中，在該色譜峰所表示的有效成分含量上明顯低于或高于參考類別的中藥樣品的相應(yīng)成分的平均含量。優(yōu)選的，所述步驟(4)具體如下:選擇有效成分含量高的批次樣品(參考樣品)的HPLC指紋圖譜作為參考，計算其它各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與參考樣品的HPLC指紋圖譜的歐氏距離，根據(jù)歐氏距離由小到大將其它各批次的中藥樣品進行排列，選擇與參考樣品的HPLC指紋圖譜歐氏距離最近的多個(不少于10個)批次的中藥樣品，并與參考樣品構(gòu)建參考類別，并計算參考圖譜。優(yōu)選的，所述步驟(5)中，判斷各批次的中藥樣品的一致性優(yōu)劣是基于馬氏距離給出的概率值確定的；在計算馬氏距離之前，先將參考類別的中藥樣品的HPLC指紋圖譜數(shù)據(jù)進行主成分分析(Principal component analysis, PCA),主成分數(shù)是根據(jù)對應(yīng)特征值大于全部特征值平均值的原則來確定。根據(jù)主成分數(shù)確定得分向量，進而計算馬氏距離；然后將馬氏距離通過F檢驗給出相應(yīng)概率值(P)，若某批次的中藥樣品的P〈0.05 ( α=0.05)，則判斷該批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與參考圖譜有顯著差異，表示該批次樣品與參考類別的中藥樣品一致性存在顯著性差異。若無顯著差異，則判斷該批次的中藥樣品與參考類別的中藥樣品為同一類別的批次樣品，一致性無顯著性差異。所述步驟(6)中，采用t檢驗進行峰面積顯著性檢驗，理論上，色譜峰面積與對應(yīng)成分含量成比例關(guān)系，基于峰面積的t檢驗結(jié)果與基于對應(yīng)成分含量的t檢驗結(jié)果是一致的；換言之，采用t檢驗通過判定峰面積是否有顯著性差異，即可判斷對應(yīng)成分含量是否有顯著性差異，無需色譜峰對應(yīng)成分的定量分析。本專利技術(shù)的用于中藥各批次樣本一致性的判斷方法，方法簡便、易行、實用，適于對中藥批次一致性的快本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種用于中藥各批次樣本一致性的判斷方法，其特征在于：步驟如下：（1）擇取待判斷的多個不同批次的中藥樣品，研磨后，采用適合提取該中藥有效成分的溶劑提取，獲得提取液；（2）采用高效液相色譜儀在適合該中藥的檢測波長處采集上述不同批次的中藥樣品的提取液的原始高效液相色譜指紋圖譜；（3）將上述所得的HPLC指紋圖譜進行方法學驗證，使所測定的HPLC指紋圖譜符合指紋圖譜技術(shù)規(guī)范要求；然后計算各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜的平均圖譜作為對照圖譜；分別計算各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與對照圖譜的相似度；若相似度r大于等于0.900，則保留，若r<0.900，則將其剔除，然后重新計算剩余批次的中藥樣品的對照圖譜，及剩余各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與剩余批次的中藥樣品的對照圖譜的相似度，然后再采用與上述相同的標準考察相似度；重復(fù)該過程，直到其符合要求；（4）從上述選擇后剩余的批次中選擇有效成分含量高的樣品的HPLC指紋圖譜作為參考，選擇與參考樣品的HPLC指紋圖譜歐氏距離最近的多個批次的中藥樣品，然后與參考樣品構(gòu)建參考類別，并計算參考類別樣品的平均指紋圖譜，即參考圖譜；（5）基于上述參考類別，計算各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與參考圖譜的馬氏距離，然后將馬氏距離轉(zhuǎn)化為F檢驗，從而判斷不同批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜與參考圖譜之間在一定概率水平下是否有顯著差異；（6）找出馬氏距離判定為有顯著性差異的那些批次的中藥樣品，采用t檢驗將這些批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜的共有峰與參考類別各批次的中藥樣品的HPLC指紋圖譜的共有峰進行檢驗，判斷共有峰中各色譜峰面積在一定概率水平下是否有顯著性差異；判斷為有顯著性差異的色譜峰，表明該批次的中藥樣品中，在該色譜峰所表示的有效成分含量上明顯低于或高于參考類別的中藥樣品的相應(yīng)成分的平均含量。...

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：聶磊，臧恒昌，曾英姿，王培，段曉菊，姜紅，
申請(專利權(quán))人：山東大學，
類型：發(fā)明
國別省市：