表面活性肽及其鹽的制造方法技術

本發明專利技術提供一種表面活性肽或其鹽的制造方法，其包括以下工序：向含有式(1)：(式中，*表示光學活性位點。X表示選自亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸中的氨基酸，R表示碳原子數9～13的烷基及支鏈烷基。M表示堿金屬、堿土金屬、任選被取代的胺等)。所示的表面活性肽或其鹽的培養液或從培養液中除去了不溶物的溶液中加入含有支鏈烷基醇的有機溶劑來萃取表面活性肽或其鹽。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】表面活性肽及其鹽的制造方法
本專利技術涉及一種具有表面活性能的表面活性肽或其鹽的制造方法。
技術介紹
已有報告指出，表面活性肽除了具有高表面活性能以外，還具有抗菌活性、溶血性、蛋白變性抑制等多種多樣的功能。這樣的作為功能性材料而有用的表面活性肽，已知可由芽孢桿菌(bacillus)屬微生物生產，并可通過對該芽孢桿菌屬微生物進行培養而實現工業上對表面活性肽的批量生產(專利文獻1等)。作為由含有該表面活性肽的培養液制造表面活性肽及其鹽的方法，例如可以舉出如下方法：1)使培養液成為酸性，加入二氯甲烷和甲醇、并使(二氯甲烷:甲醇)＝2:1(體積比)，從而將表面活性肽萃取至有機層，進行濃縮，然后利用薄層色譜法(TLC)進行純化的方法(專利文獻2)；2)在培養液(pH6)中加入辛烷后，對有機層進行濃縮并通過超濾來進行純化的方法(非專利文獻1)；3)通過離心分離從培養液中分離出菌體等不溶物后，使濾液成為酸性而取得沉淀物，向其中加入二氯甲烷并對表面活性肽進行固液萃取后，對有機層進行濃縮。接著，在加入堿水后廢棄有機層，使水層成為酸性而得到沉淀物，再對該沉淀物進行冷凍干燥的方法(專利文獻3)?，F有技術文獻專利文獻專利文獻1：日本特開2002-176993號公報專利文獻2：韓國公開專利第2005-0007670號公報專利文獻3：中國專利申請公開第101041846號說明書非專利文獻非專利文獻1：BiochemicalEngineeringJournal、2008、42、248-253
技術實現思路
專利技術要解決的問題但是，這些從培養液中獲得表面活性肽及其鹽的制造方法由于以下原因而不能認為適于工業上實施。例如，1)的方法雖然可以直接從培養液中萃取表面活性肽，但由于使用了環境負擔高的二氯甲烷作為萃取溶劑，而且要利用薄層色譜法進行純化，因此，從操作方面上，不能認為適于工業上實施。就方法2)而言，相對于表面活性肽1重量份，需要2500重量份的溶劑(生產1kg表面活性肽時，溶劑為2.5噸)，從環境及成本方面上，不能認為適于工業上實施。就方法3)而言，在菌體分離后，要使濾液成為酸性來收集沉淀物，并且要用二氯甲烷從沉淀物中進行萃取等，操作繁瑣，除此之外，還要使用環境負擔大的溶劑，因此，不能認為適于工業上實施。鑒于上述情況，本申請的課題在于提供一種不需要繁瑣的操作、且經濟方面有利的適于工業上實施的表面活性肽及其鹽的制造方法。例如，本申請的課題在于提供一種不需要分離不溶物(菌體)而直接從培養液中萃取表面活性肽的方法。除了上述課題以外、或者代替上述課題，本申請的目的還在于提供一種即使使用低環境負擔型的溶劑也可以高效地從培養液中萃取表面活性肽的表面活性肽及其鹽的制造方法。解決問題的方法本專利技術人等針對適于工業上實施的表面活性肽及其鹽的制造方法進行了深入研究，結果發現，通過使用支鏈烷基醇作為萃取溶劑，即使不從培養液中除去不溶物也可以容易地對表面活性肽進行萃取、純化。即，本專利技術涉及一種表面活性肽或其鹽的制造方法，該方法包括：向含有表面活性肽或其鹽的培養液中或從培養液中除去了不溶物的溶液中，加入含有支鏈烷基醇的有機溶劑來萃取表面活性肽或其鹽。其中，所述表面活性肽或其鹽以下式表示。[化學式1](式中，*表示光學活性位點。X表示選自亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸中的氨基酸，R表示碳原子數9～13的烷基及支鏈烷基。M表示堿金屬、堿土金屬、任選被取代的胺等。)萃取時水層的pH優選為酸性(特別是1～5)，例如，優選支鏈醇的碳原子數為3～10，其在有機溶劑中的含量為30重量%以上。所述有機溶劑可以含有輔助溶劑，優選相對于培養液1重量份，支鏈烷基醇和輔助溶劑的總量為0.6～1.5重量份。對于萃取后的液體，可以在使其與堿水溶液混合后，分離有機層而得到水溶液，接著，將該水溶液和無機酸混合，由此使表面活性肽以固體形式從該混合液中析出。另外，也可以在萃取后的液體中混合堿，從而從該混合液中得到固體形式的表面活性肽鹽。還可以將通過以上的制造方法得到的表面活性肽和堿混合來得到表面活性肽鹽或其溶液。專利技術的效果根據本專利技術的方法，無需繁瑣的操作即可高效且經濟方面有利地實現對表面活性肽及其鹽的純化。另外，用于萃取的支鏈烷基醇對環境的負擔也小。因此，本專利技術的方法適宜用于工業生產。具體實施方式以下，對本申請專利技術進行詳細敘述。在本申請專利技術中，使用支鏈烷基醇從培養液中萃取表面活性肽或其鹽。從培養液中萃取的表面活性肽或其鹽用下述式(1)表示(以下稱為化合物(1))。[化學式2]需要說明的是，式中簡稱的含義如下所述。L-Leu：L-亮氨酸D-Leu：D-亮氨酸L-Val：L-纈氨酸式(1)中，*表示光學活性位點(OpticallyActiveCenter)。X表示選自L-亮氨酸、L-異亮氨酸及L-纈氨酸中的任一種氨基酸。R表示碳原子數9～13的直鏈烷基或支鏈烷基。這里，作為碳原子數9～13的直鏈烷基，可以例示：壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基等。另外，作為碳原子數9～13的支鏈烷基，例如可以舉出：7-甲基辛基、8-甲基壬基、9-甲基癸基、10-甲基十一烷基、11-甲基十二烷基、6-甲基辛基、7-甲基壬基、8-甲基癸基、9-甲基十一烷基、10-甲基十二烷基等。這些基團也可以被1種或2種以上的取代基取代。作為取代基，可以舉出：氨基、羥基、苯基、芳基、烷?；⑾┗⑷不⑼檠趸?、硝基、鹵原子等。M表示氫、堿金屬、堿土金屬、任選被取代的胺(包括任選被取代的銨)等。這里，所謂堿金屬，沒有特別限定，表示鋰、鈉、鉀等。所謂堿土金屬，沒有特別限定，表示鈹、鎂、鈣等。任選被取代的胺只要是與表面活性肽形成鹽的胺就沒有特別限定，除氨以外，還表示一取代胺(RNH3)、二取代胺、三取代胺。作為胺的取代基，例如可以舉出：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、叔丁基等烷基、芐基、甲基芐基、苯基乙基等芳烷基、苯基、甲苯基、二甲苯基等芳基等有機基團。具體可以舉出：甲胺、乙胺、芐基胺、苯胺、二乙基胺、二環己基胺、吡咯烷、嗎啉、N-芐基-N-乙基胺、N-乙基苯胺、三乙基胺、吡啶等。所述胺可以進一步結合質子而成為銨離子。這些有機基團也可以進一步被1種或2種以上的取代基取代。優選的M為堿金屬(鈉、鉀等)、特別是鈉。上述表面活性肽包含在微生物的培養液中。該培養液例如可以通過日本特開2002-176993中記載的方法適當地進行制備。更具體而言，作為上述微生物，可使用芽孢桿菌屬微生物，優選使用枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、更優選使用枯草芽孢桿菌SD901(國際保藏編號FERMBP-7666)。上述微生物通常通過下述方法進行培養：預先在營養培養基(例如，包括1wt/v%聚胨、0.5wt/v%酵母提取物、0.5w/v%NaCl、其余部分為水的L培養基等)中進行預培養來增加菌數，并將該預培養液接種于主培養液。需要說明的是，在上述預培養中，出于防止其它微生的繁殖的目的，也可以根據需要適量(例如1～30ppm(質量標準；以下相同))添加抗生素(例如氯霉素、四環素等)。主培養液通常含有碳源、氮源、金屬離子、pH調節劑。碳源包括糖類(葡萄糖、麥芽糖、蔗糖等)、淀粉類、醇類、有機酸類等。主培養液中的碳源的量例如為1～40質量%左右。作為氮本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2010.10.01 JP 2010-2241201.表面活性肽或其鹽的制造方法，該方法包括以下工序：向含有式(1)所示的表面活性肽或其鹽的培養液或從培養液中除去了不溶物的溶液中，加入含有30重量％以上碳原子數3～10的支鏈烷基醇的有機溶劑來萃取表面活性肽或其鹽，萃取時水層的pH為酸性，式中，*表示光學活性位點，X表示選自亮氨酸、異亮氨酸、纈氨酸的氨基酸，R表示碳原子數為9～13的直鏈烷基或碳原子數為9～13的支鏈烷基，M表示氫、堿金屬、堿土金屬、任選被取代的胺。2.根據權利要求1所述的方法，其中，萃取時水層的pH為1～5。3.根據權利要求1所述的方法，其中，成為支鏈烷基醇的支鏈基點的碳為叔碳。4.根據權利要求1所述的方法，其中，所述支鏈烷基醇的碳原子數為3～6。5.根據權利要求1所述的方法，其中，所述支鏈烷基醇為異丁醇、仲丁醇、叔丁醇、新戊醇、叔戊醇、異己醇、5-甲基己醇、6-甲基庚醇、或7-甲基辛醇。6.根據權利要求1所述的方法，...

【專利技術屬性】
技術研發人員：泉田將司，川崎宏明，諸島忠，
申請(專利權)人：株式會社鐘化，
類型：
國別省市：