一種西葫蘆離體快速繁殖的方法技術

本發(fā)明專利技術公開一種西葫蘆離體快速繁殖的方法，涉及一種植物組織培養(yǎng)技術，屬于生物工程技術領域。其有益效果在于：本發(fā)明專利技術與現(xiàn)有技術相比，以組織培養(yǎng)的方法可加速繁殖速度，在本發(fā)明專利技術的培養(yǎng)條件下，在無菌苗的培養(yǎng)、愈傷組織的誘導、芽的分化、生根培養(yǎng)中大大縮短西葫蘆的生理周期，更重要的是所獲得的愈傷組織適合進一步進行西葫蘆細胞培養(yǎng)，進行西葫蘆細胞次生代謝產(chǎn)物研究，另外其重要意義還表現(xiàn)在：為西葫蘆進行分子育種奠定組培基礎；為一些西葫蘆品種的快速繁殖奠定基礎；獲得西葫蘆有用次生代謝產(chǎn)物。

【技術實現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術涉及一種植物組織培養(yǎng)技術，屬于生物工程
，具體地說是。
技術介紹
西葫蘆(Cucurbita pepo L.),別名:英瓜、番瓜等,葫蘆科南瓜屬的一年生蔓性草本植物。原產(chǎn)北美洲南部，今廣泛栽培。我國春季提早栽培的西葫蘆，是早春瓜類最早上市的一種蔬菜，為渡蔬菜春淡作出了積極貢獻，也是菜農(nóng)獲得高效栽培的一種主要品種。近幾年來，發(fā)現(xiàn)西葫蘆在保健、營養(yǎng)、醫(yī)療方面具有重大價值；其富含水分具有清熱利尿、除煩止渴、潤肺止咳、消腫散結(jié)、潤澤肌膚等功效；還用于輔助治療水腫腹脹、煩渴、瘡毒以及腎炎、肝硬化腹水等癥；現(xiàn)代研究表明，西葫蘆含有一種干擾素的誘生劑，可刺激機體產(chǎn)生干擾素，提高免疫力，發(fā)揮抗病毒和腫瘤的作用。因此西葫蘆受到越來越廣泛的關注，其栽培與常規(guī)育種取得較大進展，但常規(guī)育種無法滿足生產(chǎn)需要，許多西葫蘆的優(yōu)良基因資源得不到利用，特別是在抗逆和高含量次生代謝物育種方面，研究較為薄弱。隨著生物技術的飛速發(fā)展，為西葫蘆的次生代謝物育種研究提供了重要基礎。目前西葫蘆的繁殖常采用種子繁殖，繁殖時間長，繁殖系數(shù)低，而且受品種基因型的限制，芽的分化率相對較低，而污染率比較高，并且出現(xiàn)外植體褐化問題，在后期的利用愈傷組織進行細胞培養(yǎng)過程中，細胞生物量不太高，這些對于利用南瓜組織進行細胞培養(yǎng)，生產(chǎn)次生代謝物等均有局限性。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術旨在提供一 種西葫蘆離體快速繁殖的方法，將西葫蘆無菌苗培養(yǎng)愈傷組織的誘導、芽的分化、生根培養(yǎng)中大大縮短西葫蘆的生理周期。為了實現(xiàn)本專利技術所述，采用的技術方案步驟如下:一、選取飽滿、大小一致的西葫蘆種子，在25°C的恒溫水中浸種7h 8h，然后在超凈臺上，用70%的酒精表面消毒30s，置0.1%的HgCl2溶液中分別消毒4 8min，消毒期間要不停搖動，然后用無菌水沖洗4 5次，種子消毒之后在無菌條件下將其分別放入無菌苗萌發(fā)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述萌發(fā)培養(yǎng)基按每ILMS中加入瓊脂8g、蔗糖20g組方，pH值調(diào)到5.8，培養(yǎng)箱溫度25 ± I °C，黑暗培養(yǎng)I 2天；二、將已萌發(fā)的種子進行6h黑暗，16 20h光照，光照度為80%，在無菌苗子葉剛轉(zhuǎn)綠時取其子葉、下胚軸、胚根做外植體誘導愈傷組織；取用子葉接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，先去掉子葉邊緣；將剩下的橫切，取其近葉柄端，每片子葉得兩塊約2mmX6mm的外植體；將得到的外植體表面朝上接種在愈傷誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)；三、①取下胚軸為誘導愈傷組織時，誘導步驟為取用下胚軸接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，下胚軸取子葉下約0.3cm部位,切成0.5cm 1.0cm的切段；由下胚軸得到的外植體分水平放置或下端插入愈傷誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，于25 ± I °C溫度條件下培養(yǎng)20 40天得愈傷組織；②取為胚根誘導愈傷組織時，誘導步驟為:取用胚根接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，胚根取靠近胚軸的區(qū)段，切成0.5cm 1.0cm的切段，由胚根得到的外植體分水平放置和下端插入愈傷誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種之后，放在培養(yǎng)箱中25±1°C培養(yǎng)；四、選生長較好的愈傷組織切成體積約為0.5 1.0cm3的切塊并轉(zhuǎn)入芽分化培養(yǎng)基中25±1°C進行培養(yǎng)20 40天，每兩周更換一次培養(yǎng)基，愈傷組織逐步分化成芽；五、將 分化的芽從基部切下，插入生根培養(yǎng)基中25±1°C培養(yǎng)至芽生根；所述步驟三中的愈傷誘導培養(yǎng)基為:MS+2.0mg/L 6BA+0.2mg/L NAA。所述步驟四中的芽分化為:將培養(yǎng)好的愈傷組織作為進一步分化培養(yǎng)的材料，將其切成體積約為0.5cm3左右的切塊，并轉(zhuǎn)入芽分化培養(yǎng)基中，在25土 1°C溫度F進行培養(yǎng)28 32天，每兩周更換一次培養(yǎng)基，愈傷組織分化成芽，芽分化培養(yǎng)基組成為:在MS加入1.0mg/L BA 和 0.lmg/L NAA,即 MS+1.0mg/LBA+0.lmg/LNAA。所述步驟五中的生根培養(yǎng)為:將分化的芽從基部切F，插入生根培養(yǎng)基中，在25±1°C溫度下培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為:在1/2MS加0.lmg/L NAA母液，即:l/2MS+0.lmg/LNAA0本專利技術所述的，其有益效果在于:以組織培養(yǎng)的方法可加速繁殖速度，在無菌苗的培養(yǎng)、愈傷組織的誘導、芽的分化、生根培養(yǎng)中大大縮短西葫蘆的生理周期，更重要的是所獲得的愈傷組織適合進一步進行西葫蘆細胞培養(yǎng)，進行西葫蘆細胞次生代謝產(chǎn)物研究，另外其重要意義還表現(xiàn)在:為西葫蘆進行分子育種奠定組培基礎；為一些西葫蘆品種的快速繁殖奠定基礎；獲得西葫蘆有用次生代謝產(chǎn)物。具體實施例方式以下以具體實施例來說明本專利技術的技術方案。實施例1一、選取飽滿、大小一致的西葫蘆種子，在25°C的恒溫水中浸種7h，然后在超凈臺上，用70%的酒精表面消毒30s，置0.1%的HgCl2溶液中分別消毒8min，消毒期間要不停搖動，然后用無菌水沖洗4次，種子消毒之后在無菌條件下將其分別放入無菌苗萌發(fā)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，所述萌發(fā)培養(yǎng)基按每ILMS中加入瓊脂8g、蔗糖20g組方，pH值調(diào)到5.8，培養(yǎng)箱溫度25 °C，黑暗培養(yǎng)I天；二、將已萌發(fā)的種子進行6h黑暗，20h光照，光照度為80%，在無菌苗子葉剛轉(zhuǎn)綠時取其子葉、下胚軸、胚根做外植體誘導愈傷組織；取用子葉接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，先去掉子葉邊緣；將剩下的橫切，取其近葉柄端，每片子葉得兩塊約2mmX6mm的外植體；將得到的外植體表面朝上接種在愈傷誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)；三、①取下胚軸為誘導愈傷組織時，誘導步驟為取用下胚軸接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，下胚軸取子葉下約0.3cm部位，切成0.5cm的切段；由下胚軸得到的外植體分水平放置或下端插入愈傷誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，于25°C溫度條件下培養(yǎng)20 40天得愈傷組織，所述的愈傷誘導培養(yǎng)基:MS+1.0mg/L 6BA+0.lmg/LNAA ;②取為胚根誘導愈傷組織時，誘導步驟為:取用胚根接種在愈傷誘導培養(yǎng)基上，胚根取靠近胚軸的區(qū)段，切成0.5cmcm的切段，由胚根得到的外植體分水平放置和下端插入愈傷誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng)，接種之后，放在培養(yǎng)箱中25±1°C培養(yǎng)，所述的愈傷誘導培養(yǎng)基:MS+2.0mg/L 6BA+0.2mg/L NAA ；四、選生長較好的愈傷組織切成體積約為0.5cm3的切塊并轉(zhuǎn)入芽分化培養(yǎng)基中25±1°C進行培養(yǎng)20天，每兩周更換一次培養(yǎng)基，愈傷組織逐步分化成芽，所述的芽分化培養(yǎng)基為:MS+0.lmg/L BA+0.05mg/L NAA ；五、將分化的芽從基部切下，插入生根培養(yǎng)基中25土 1°C培養(yǎng)至芽生根，所述的生根培養(yǎng)基為:l/2MS+0.05mg/L NAA。`本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術保護點】
一種西葫蘆離體快速繁殖的方法，其特征在于：在無菌苗的培養(yǎng)、愈傷組織的誘導、芽的分化、生根培養(yǎng)中大大縮短西葫蘆的生理周期；愈傷誘導培養(yǎng)基為：MS+2.0mg/L?6BA+0.2mg/L?NAA。

【技術特征摘要】
1.一種西葫蘆離體快速繁殖的方法，其特征在于:在無菌苗的培養(yǎng)、愈傷組織的誘導、芽的分化、生根培養(yǎng)中大大縮短西葫蘆的生理周期；愈傷誘導培養(yǎng)基為:MS...

【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：房世平，
申請(專利權(quán))人：蘭州宏慶科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：