本發明專利技術公開了一種水產品中組胺的快速檢測方法，特點是包括將魚肉樣品在冰浴下用組織搗碎機充分勻漿后，將魚肉樣品加入到帶塞試劑瓶中，然后加入5倍魚肉重量的蒸餾水以及氯化鈉，調節pH值為8.0-10.0的步驟；將磁力攪拌吸附萃取棒加入試劑瓶中，在電磁攪拌器上于45-60℃萃取0.5-3h的步驟；將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，吸去水分后，在線熱解析進樣和GC分離檢測技術直接對水產品中的組胺進行定量分析；最后根據組胺的含量與組胺峰面積的定量關系標準曲線計算得到樣品中組胺含量的步驟，優點簡單快速，不需要復雜的前處理過程及繁瑣的衍生化過程。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及一種組胺的檢測方法，尤其是涉及。
技術介紹
組胺是一種具有生物活性的低分子含氮有機化合物，普遍存在于各類食品如發酵制品、乳制品、酒類、水產品及其制品中，尤其水產品最為突出。組胺作為人體內的一種化學傳導物質，通過與細胞膜上的兩類受體(Hl和H2)作用而發揮毒性，如食入過量組胺，輕者引起過敏反應，重者將危機生命。一些蛋白含量較高的中上層魚類如金槍魚、鯖魚、秋刀魚等，若在其死后不加以合理控制，極易產生組胺，國內外報道的組胺中毒事件多發生在此類魚中。同時，水產品中以鮐鰺、鯖魚等易產組胺的中上層魚類為原料的產品，因為組胺含量超標而被禁止出口的事件近年來時有發生，給水產品出口貿易帶來很大影響。因此，為確保水產食品食用安全，促進水產品進出口貿易，亟需一個快速、精確、可靠的組胺檢測方法。目前，水產品中組胺的檢測方法主要包括HPLC法、毛細管電泳法、比色法、生化傳感器法、酶聯免疫法、薄層色譜法等。這些方法一般都需要進行酸萃取，有機溶劑萃取等比較繁瑣的前處理過程及衍生化過程，使得這些分析方法復雜、費時；薄層色譜雖然不需要昂貴設備，具有操作簡單、快速、分析量大以及成本低廉的優點，但該法是半定量檢測方法，只能用于組胺的監測及前期篩選。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是提供一種不需要復雜的前處理過程及繁瑣的衍生化過程，可進行定性定量分析的簡單快速的水產品中組胺的快速檢測方法。本專利技術解決上述技術問題所采用的技術方案為:，具體包括以下步驟: (1)將魚肉樣品在冰浴下用組織搗碎機充分勻漿后，將魚肉樣品加入到帶塞頂空樣品瓶中，然后加入5倍魚肉重量的蒸餾水、用NaOH溶液調節pH值為8.0-10.0，并加入氯化鈉固體使其含量達到30wt% ； (2)將磁力攪拌吸附萃取棒加入步驟(I)的樣品瓶中，蓋上瓶蓋，在電磁攪拌器上于30-45 °C萃取0.5-3h，其中電磁攪拌速度為1000-1500r/Min ； (3)萃取完畢，將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，用無塵吸水紙吸去磁力攪拌吸附萃取棒上的水分后，待用； (4)組胺的分離分析 氣相色譜分析條件: 帶直接熱解析進樣系統的氣相色譜儀Agilent6890氣相色譜儀； 色譜柱:具備溫度范圍為280°C以上的鍵合固定相毛細管柱；熱解析進樣系統一級熱解析溫度:280°C，時間5min，捕集溫度-20—-30°C，二級熱解析溫度280°C，時間3-5min，氫火焰離子化(FID)檢測器溫度300°C ； 色譜柱柱溫:150°C，保持2min ;然后以15°C /min的速度升溫至230°C，保留Imin，再以50°C /min的速度升溫至290°C,保留5min ； (5)標準曲線建立 采用內標法，在樣品中加入不同濃度的組胺標準品和內標化合物1，9-壬二醇，在步驟(4)的氣相色譜分析條件下，測出一系列不同濃度的組胺標準品對應的組胺峰面積，并根據內標化合物校正峰面積后，確定組胺的含量與組胺峰面積的定量關系，建立標準曲線； (6)樣品測定 根據上述步驟(I)- (4)獲得待測樣品的組胺峰面積，根據組胺的含量與組胺峰面積的定量關系，計算得到待測樣品中的組胺含量。所述的磁力攪拌吸附萃取棒表面設置有烯酸酯涂層(PA:Polyacrylate)或者乙二醇娃酮(EG- Silicone: Ethylene Glycol (EG)-Silicone)涂層。由于這兩個涂層是具有一定的極性，更適合組胺這種極性化合物的萃取。所述的色譜柱采用0V-1701，其長X內徑X膜厚度=30mX0.53mmXmmXl.5mm。與現有技術相比，本專利技術的優點在于:本專利技術公開了，采用無溶劑磁攪拌子吸附萃取技術結合在線熱解析進樣和GC分離檢測技術直接對水產品中的組胺進行定量分析。由于組胺的沸點高達209.5°C，一般不能直接進行GC分析，需要進行分離純化、再衍生化才能進行分析，本方法利用磁攪拌子吸附萃取技術的特點實現復雜水產品中的組胺的直接萃取，并通過使用耐高溫的鍵合相毛細管氣相色譜柱可實現高沸點化合物的分離， 能夠在不通過復雜的前處理過程及繁瑣的衍生化過程的情況下直接分析樣品中的組胺，檢測極限達到5(^g/kg，是一種簡單快速、操作簡便的無溶劑組胺萃取和無衍生化組胺分離檢測相結合的組胺定性定量檢測方法。附圖說明圖1為鯖魚樣品中組胺的含量與組胺峰面積的定量關系標準曲線圖。具體實施例方式以下結合附圖實施例對本專利技術作進一步詳細描述。具體實施例1 本專利技術，具體包括以下步驟: (1)將魚肉樣品在冰浴下用組織搗碎機充分勻漿后，將魚肉樣品加入到帶塞頂空進樣瓶中，然后加入5倍魚肉重量的蒸餾水，用NaOH溶液調節pH值為8.0-10.0，并加入NaCl固體使其含量達到30wt% (NaCl在魚肉樣品溶液中的質量分數為30%)； (2)將長度為Icm的Twister磁力攪拌吸附萃取棒加入步驟(I)的樣品瓶中，蓋上瓶蓋，在電磁攪拌器上于30-45 °C萃取0.5-3h，電磁攪拌速度為1000-1500r/Min ； (3)萃取完畢，將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，用無塵吸水紙吸去磁力攪拌吸附萃取棒上的水分，將磁力攪拌吸附萃取棒放入存儲器備用； (4)組胺的分離分析 氣相色譜分析條件:帶直接熱解析進樣系統的氣相色譜儀Agilent6890氣相色譜儀色譜柱:0V-1701 (長X內徑X膜厚度=30mX0.53mmXmmXl.5mm)，或其他同類型高溫穩定性色譜柱。非極性柱、弱極性柱、中極性柱、應用溫度范圍為280°C以上的鍵合固定相毛細管柱均可使用，其中中極性柱效果最好。熱解析系統一級熱解析溫度:280°C，5min，捕集溫度-20—-30°C，二級熱解析溫度280°C，3-5min，氫火焰離子化(FID)檢測器溫度300°C ;柱溫:150°C,2min ;以15。。/min升溫至230°C，保留lmin，再以50°C /min升溫至290°C ； (5)組胺的定性，載與樣品分析相同條件下進行組胺標準品分析，比較樣品和標準品的色譜峰進行定性，并通過GC-MS進行確認； (6)組胺的定性定量:采用內標法，在樣品中加入不同濃度的組胺標準品和內標化合物1，9-壬二醇，在相同 條件下，測出添加、不添加標準化的樣品的中組胺峰面積，并根據內標化合物校正峰面積后，做出組胺的含量與峰面積的標準曲線，根據標準曲線計算同條件下待測樣品中組胺的含量。具體實施例2 本專利技術同實施例1，其區別在于: 步驟(I)中魚肉樣品取市售鯖魚樣品，用NaOH溶液調節pH值為9.0 ; 步驟(2)中在電磁攪拌器上于38°C萃取1.5h，電磁攪拌速度為1250r/Min ； 步驟(4)中組胺的分離分析: 氣相色譜條件分析條件: 熱解析系統一級熱解析溫度:280°C，5min，捕集溫度_25°C，二級熱解析溫度280°C，4min，氫火焰離子化(FID)檢測器溫度300°C ;柱溫:150°C，2min ；以15°C /min升溫至230°C，保留 lmin，再以 50°C /min 升溫至 290°C， 通過實施例2的方法得到的組胺的含量與峰面積的標準曲線，如圖1所示。具體實施例3 檢測極限的測定 按照上本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種水產品中組胺的快速檢測方法，其特征在于具體包括以下步驟：（1）將魚肉樣品在冰浴下用組織搗碎機充分勻漿后，將魚肉樣品加入到帶塞頂空樣品瓶中，然后加入5倍魚肉重量的蒸餾水、用NaOH溶液調節pH值為8.0?10.0，并加入氯化鈉固體使其含量達到30wt%；（2）將磁力攪拌吸附萃取棒加入步驟（1）的樣品瓶中，蓋上瓶蓋，在電磁攪拌器上于30?45?℃萃取0.5?3h，其中電磁攪拌速度為1000?1500r/Min；（3）萃取完畢，將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，用無塵吸水紙吸去磁力攪拌吸附萃取棒上的水分后，待用；（4）組胺的分離分析氣相色譜分析條件：帶直接熱解析進樣系統的氣相色譜儀Agilent6890氣相色譜儀；色譜柱：具備溫度范圍為280℃以上的鍵合固定相毛細管柱；熱解析進樣系統一級熱解析溫度：280℃，時間5min，捕集溫度?20—?30℃，二級熱解析溫度280℃，?時間3?5min，氫火焰離子化（FID）檢測器溫度300℃；色譜柱柱溫：150℃，保持2min；然后以15℃/min的速度升溫至230℃，保留1min，再以50℃/min的速度升溫至290℃，保留5min；（5）標準曲線建立采用內標法，在樣品中加入不同濃度的組胺標準品和內標化合物1,9?壬二醇，在步驟（4）的氣相色譜分析條件下，測出一系列不同濃度的組胺標準品對應的組胺峰面積，并根據內標化合物校正峰面積后，確定組胺的含量與組胺峰面積的定量關系，建立標準曲線；（6）樣品測定根據上述步驟（1）?（4）獲得待測樣品的組胺峰面積，根據組胺的含量與組胺峰面積的定量關系，計算得到待測樣品中的組胺含量。...
【技術特征摘要】
1.一種水產品中組胺的快速檢測方法，其特征在于具體包括以下步驟: (1)將魚肉樣品在冰浴下用組織搗碎機充分勻漿后，將魚肉樣品加入到帶塞頂空樣品瓶中，然后加入5倍魚肉重量的蒸餾水、用NaOH溶液調節pH值為8.0-10.0，并加入氯化鈉固體使其含量達到30wt% ； (2)將磁力攪拌吸附萃取棒加入步驟(I)的樣品瓶中，蓋上瓶蓋，在電磁攪拌器上于30-45 °C萃取0.5-3h，其中電磁攪拌速度為1000-1500r/Min ； (3)萃取完畢，將磁力攪拌吸附萃取棒用蒸餾水沖洗干凈，用無塵吸水紙吸去磁力攪拌吸附萃取棒上的水分后，待用； (4)組胺的分離分析 氣相色譜分析條件: 帶直接熱解析進樣系統的氣相色譜儀Agilent6890氣相色譜儀； 色譜柱:具備溫度范圍為280°C以上的鍵合固定相毛細管柱； 熱解析進樣系統一級熱解析溫度:280°C，時間5min，捕集溫度-20—-30°C，二級熱解析溫度280°C，時間3-5min，氫火焰離子化(FID)檢測...
【專利技術屬性】
技術研發人員：歐昌榮，湯海青，曹錦軒，蘇秀榕，賀林娟，黃玲，廖媛媛，謝誠，
申請(專利權)人：寧波大學，
類型：發明
國別省市：
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。