用于維持血小板的功能的組合物制造技術

一種用于維持血小板的功能的組合物，其將下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物作為有效成分，式中，X表示亞苯基；Y表示氫原子、或－(CH2)mR1；m表示0～4的任一整數；R1表示－NR5COR2、－NR5SO2R2、或－NR3R4；R2表示C1～C6烷基、芳基、或C1～C6烷氧基等；R3和R4表示C1～C6烷基等；R5表示氫原子、C1～C6烷基等；Z表示氫原子或C1～C6烷基。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及利用了 N —羥基甲酰胺衍生物的用于維持血小板的功能的組合物、用于調制血小板的方法、包含血小板的血液制劑、以及用于維持血液制劑中的血小板的功能的方法。
技術介紹
對于以白血病為代表的血液相關疾病的治療，使治療所需的量的血細胞穩定地增殖并供給是極其重要的，因此迄今為止很多研究者進行了想要使造血干細胞或造血前體細胞有效率地增殖的嘗試。已知在血細胞中巨核細胞為血小板前體細胞，即產生血小板的細胞，經過proplatelet (胞體突起)結構而產生血小板,在治療性應用中處于重要位置。由于血小板在血液凝固(止血)中是必須的，因此在白血病、骨髓移植、抗癌治療等中的需求極其高。在血小板的生產中，迄今為止除了通過捐獻者的獻血進行采集的方法以外，還嘗試了使用施與血小板生成素(TPO)的方法、使用從臍帶血或骨髓細胞分化巨核細胞的方法等。最近，也嘗試了使造血前體細胞在生物體外增殖，由這些前體細胞調制血小板的方法等。例如，本專利技術者等報告了由人胚胎干細胞(ES細胞)調制內包造血前體細胞的網狀結構物，由該網狀結構物比較大量并且有效率地進行血小板的產生的方法(專利文獻I)、由人工多能性干細胞(iPS細胞)通過體外的培養體系而有效率地調制成熟巨核細胞和血小板的方法(專利文獻2)等。這樣，雖然在細胞外調制血小板本身的方法的研究進展了，但是調制出的血小板的功能缺乏穩定性，因此需要開發出可大量地調制可耐受長期保存的功能的血小板的方法。血小板與細胞外基質的結合在誘導血液凝固(止血、血栓形成等)方面是重要的過程?？梢哉J為該過程通過血小板受體GPIb介由α亞基(GPIba)而與血管性血友病因子(von Willebrand factor:VWF)結合來開始的。然而報告了，在37°C附近的條件下,金屬蛋白酶的 ADAM17 (a disintegrinand metallopeptidase domain (去整合素和金屬蛋白酶結構域)17)在GPIba的胞外區脫落(Shedding，切割而除去)，從而GPIb a與VWF的會合被抑制，血小板的血液凝 固功能消失(非專利文獻I和非專利文獻2)。因此預想，為了保持在體外調制的血小板的功能，需要至少抑制ADAM17的活性。實際上，由本專利技術者等報告了通過時機良好地添加直接抑制金屬蛋白酶活性的抑制劑(GM6001等)、或間接地抑制ADAM17等金屬蛋白酶活性活化的p38MAP激酶抑制劑，從而可以保持在體外調制的血小板的功能(專利文獻3)。然而，GM6001等抑制劑不僅抑制ADAM17的活性，而且也抑制其它金屬蛋白酶(特別是造血功能所必須的MMP9、MMP14)的活性，因此在利用了這些抑制劑的體外的血小板的調制中，需要在最多觀察到血小板產生的一定時期添加這些抑制劑。在缺乏一致性和再現性的細胞培養中要求估計該時機等復雜的操作，因此利用了這些抑制劑的血小板的調制方法，在大量地調制功能性血小板這方面，特別是在血小板產生體系的工廠化中，仍然不充分。此外認為，非選擇性金屬蛋白酶抑制劑，因為抑制膜型和游離型金屬蛋白酶、ADAM等全部金屬蛋白酶活性，因此通過在生物體內部的使用，從而有發揮各種副作用(由抑制作用于每個臟器的必須MMP或ADAM產生的弊病)的危險性。實際上，非選擇性金屬蛋白酶抑制劑由于會引起被稱為肌肉骨骼綜合征的嚴重副作用，因此這些多數抑制劑的開發已經中止(非專利文獻3)。此外暗示出GM6001那樣的具有異羥肟酸結構的抑制劑具有致突變性(非專利文獻4)。因此，通過使用了上述抑制劑的方法而得到的血小板在安全性這樣的方面也仍然不充分。另一方面，現在，作為保存由生物體調制的血小板的方法，除了在20°C 24°C下一邊攪拌一邊保存的方法以外，不存在有效的方法，因此認為在為了保持血小板的功能而利用抑制ADAM17的金屬蛋白酶活性的方法的情況下，在上述室溫(20°C 24°C )條件下進行血小板的調制也是有效的。然而，迄今為止，關于在室溫條件下，是否能夠由臍帶血或骨髓細胞分化成巨核細胞，此外，是否能夠由來源于ES細胞等的造血前體細胞產生血小板，未經任何驗證。如上所述，現狀是，能夠作為用于維持血小板的功能的組合物的有效成分而實用化的化合物還未發現，因此，用于在體外取得功能上穩定的血小板的方法，特別是適于安全性高的血小板的大量生產的方法并未確立?，F有技術文獻專利文獻專利文獻1:國際公開2008/041370號專利文獻2:國際公開2009/122747號專利文獻3:國際公開2009/119105號 非專利文獻非專利文獻1:Bergmeier 等人，Circulation Research, 2004 年，95 卷，660 670頁非專利文獻2 =Bergmeier 等人，Blood, 2003 年，102 卷，4229 4235 頁非專利文獻3:Peterson 等人，Cardiovasc.Res., 2006 年，69 卷，677 687 頁非專利文獻4:Skipper 等人，Cancer Res.，1980 年,40 卷,4704 4708 頁
技術實現思路
專利技術所要解決的課題本專利技術是鑒于上述現有技術所具有的課題而提出的，其目的在于，尋找通過特異性抑制ADAM17的金屬蛋白酶活性，抑制GPIb α的脫落而能夠維持血小板的功能的化合物。進一步的本專利技術的目的在于，提供利用尋找出的化合物來維持血小板的功能的組合物，有效率地產生血小板，和謀求血液制劑的品質維持的提高。用于解決課題的手段本專利技術者等為了達成上述目的而反復進行了深入研究，結果發現，由來源于ES細胞、iPS細胞等的造血前體細胞向巨核細胞的分化誘導、由該巨核細胞引起的血小板的產生，不能在25°C的室溫條件的培養中進行，而優選37°C附近的培養條件。因此，本專利技術者等人接下來進行了可特異性抑制在37°C附近的培養中發生的由ADAM17引起的GPIb α的脫落的化合物的探索。其結果是發現，具有特定的結構的N—羥基甲酰胺衍生物對于ADAM17具有特異性的抑制作用，在添加于產生血小板的培養體系、來源于人外周血的血小板的情況下，可抑制GPIba的脫落，在37°C附近的溫度條件下也可維持血小板的功能。本專利技術者等人發現，由于尋找出的N—羥基甲酰胺衍生物的這樣的作用，該衍生物在有效率的血小板的產生、包含血小板的血液制劑的品質維持的提高等方面是極其有用的，從而完成本專利技術。本專利技術中，更具體而言，提供以下的專利技術。(I).用于維持血小板的功能的組合物，其將下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物作為有效成分，權利要求1.一種用于維持血小板的功能的組合物，其將下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物作為有效成分，2.根據權利要求1所述的組合物，上述通式(I)所示的化合物為N— 一 N —羥基甲酰胺、或N —{4 一節基}甲磺酰胺。3.根據權利要求1或2所述的組合物，其為用于維持血小板的功能的試劑或對包含血小板的血液制劑的添加劑。4.一種用于調制血小板的方法，其特征在于，在由可分化成巨核細胞的細胞分化誘導成巨核細胞并由該巨核細胞產生血小板的培養體系中，添加下述通式(I)所示的化合物、或其鹽、或它們的溶劑化物，5.根據權利要求4所述的方法，上述通式(I)本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：江藤浩之，大西椋子，中內啟光，村田隆彥，
申請(專利權)人：國立大學法人東京大學，科研制藥株式會社，
類型：
國別省市：