本發明專利技術涉及一種用于養殖海水魚類三聯口服疫苗，該三聯口服疫苗由藥用淀粉、麥芽糊精、濃度為1×1012cfu的副溶血性弧菌菌液、濃度為1×1012cfu的溶藻弧菌菌液及濃度為1×1012cfu的遲緩愛德華氏菌菌液按比例3:1:0.35:0.35:0.35，單位為：克:克:ml:ml:ml混合配制而成；本發明專利技術所涉及用于養殖海水魚類三聯口服疫苗的制備，其方法步驟包括：⑴滅活；⑵微丸制備；⑶腸溶層包衣制備及⑷誘食劑的噴涂；本發明專利技術所涉及用于養殖海水魚類三聯口服疫苗的使用方法，其方法步驟包括：⑴第一次投喂和⑵加強投喂。本發明專利技術制備了副溶血性弧菌、溶藻弧菌和遲緩愛德華氏菌三聯口服疫苗，并采用投喂接種的方法，免疫效果理想，工作量小，適合大規模接種，同時，本發明專利技術采用功能性包衣材料，既保護疫苗在胃液中不被消化，又使疫苗在腸道中迅速釋放，產生免疫反應，獲得高效免疫效果。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于養殖海水魚類的疫苗及使用的
，具體涉及。
技術介紹
我國海水養殖魚類的疾病呈逐年增加趨勢，尤其是副溶血性弧菌、溶藻弧菌和遲緩愛德華氏菌的流行，造成了巨大的經濟損失，嚴重阻礙了我國水產養殖業的發展。目前魚類細菌性疾病主要是通過采用抗菌藥物結合優化養殖技術的方法進行疾病的預防和治療。然而，長期使用抗生素及化學藥品，使大部分細菌產生了較強且廣泛的耐藥性，并且還造成環境污染以及藥物殘留超標等食品安全問題。由于藥殘問題，多次造成我國的水產品出口受限。為了達到環境安全、食品安全及無公害水產養殖的目的，國家已經命令禁止生產和使用危害嚴重的藥物，盡量少用或不用藥物。隨著免疫學技術的發展，近年來諸多學者研究表明疫苗免疫接種是防治魚類細菌性疾病的有效方法，為魚類細菌病的防治尋找到了另一有效安全的防治途徑，是我國科學研究重點支持的領域之一。隨著高密度、設施集約化養殖模式的普及，魚類細菌性疾病呈現出多重感染、混合感染、交叉感染的新趨勢，同時感染多種細菌的情況非常普遍，因此一些學者開展了二聯疫苗、三聯疫苗和多聯疫苗研究。如近些年已經開展了鰻弧菌和溶藻弧菌二聯疫苗對大菱鲆的免疫效果研究、開展了嗜水氣單胞菌和河弧菌二聯疫苗對鯽的免疫效果研究、開展了溶藻弧菌、副溶血弧菌和 嗜水氣單胞菌三聯疫苗對大黃魚常見細菌性疾病免疫保護的實驗研究、開展了三聯疫苗預防斑點叉尾鮰細菌性疾病研究。以上研究全部采用注射和浸泡免疫方法，由于浸泡具有免疫效果差、疫苗用量大等缺點，注射接種疫苗操作過程繁瑣、工作量大、傷口容易感染等，均不適宜在生產實踐中應用。口服接種具有免疫效果好、操作方便、刺激較小以及工作強度小等特點，適宜在生產中大規模應用，成為當前的研究熱點。另外，近年來也有科研人員采用2%海藻酸鈉、6%PVP_K30制備了銀鯽口服嗜水氣單胞菌微膠囊疫苗，相對免疫保護率為61.1%，高于全細胞疫苗組的50% ;用聚乳酸一乙醇酸共聚物PLG和聚乙烯醇采用復乳揮發法制備嗜水氣單胞菌口服疫苗，產品相對免疫保護率為42.9%，高于全細胞疫苗組的32.1%。以上研究均是希望遞送疫苗到后腸，刺激腸道粘膜免疫相關淋巴組織發揮免疫作用。但是，以上技術沒有對相關魚類的胃腸道消化生理特性研究，也沒有對其進行耐酸性研究，因此疫苗有效成分不能實現腸道釋放的目的，如養殖海水魚類，如大菱鲆、牙鲆等，胃液pH—般在2.5 5.5，胃排空時間一般為4 8小時，腸液PH —般在6.0 7.8，由于魚用疫苗易受溫度、酸堿度、胃蛋白酶影響，直接口服接種會損壞疫苗，降低疫苗免疫效果，如果疫苗過早釋放，將被胃酸、消化酶分解，不能起到免疫保護作用，限制了其在生產中的應用。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服現有技術的不足之處，提供。本專利技術實現目的的技術方案如下:一種用于養殖海水魚類三聯口服疫苗，該三聯口服疫苗由藥用淀粉、麥芽糊精、濃度為IXlO12Cfu的副溶血性弧菌菌液、濃度為IXlO12Cfu的溶藻弧菌菌液及濃度為IXlO12Cfu的遲緩愛德華氏菌菌液混合配制而成，所述藥用淀粉:麥芽糊精:濃度為IXlO12Cfu的副溶血性弧菌菌液:濃度為IXlO12Cfu的溶藻弧菌菌液:濃度為IXlO12Cfu的遲緩愛德華氏菌菌液的比例為=3:1:0.35:0.35:0.35，單位為:克:克:mL:mL:mL0而且，所述副溶血性弧菌菌液、溶藻弧菌菌液及遲緩愛德華氏菌菌液經過了 0.5%的甲醛滅活。一種用于養 殖海水魚類三聯口服疫苗的制備，其特征在于:該制備過程的方法如下:⑴滅活:使用0.5%的甲醛對副溶血性弧菌菌液、溶藻弧菌菌液和遲緩愛德華氏菌菌液進行滅活；(2)微丸制備:①按藥用淀粉:麥芽糊精:濃度為IXlO12Cfu的副溶血性弧菌菌液:濃度為IXlO12Cfu的溶藻弧菌菌液:濃度為IXlO12Cfu的遲緩愛德華氏菌菌液的比例為:3:1:0.35:0.35:0.35，單位為:克:克:mL:mL:mL的配比將上述物質混合均勻成微濕的軟材；②制微丸:對上述軟材使用微丸機制微丸，微丸機采用400轉/分鐘的轉速，制備成10 20目的微丸；⑶腸溶層包衣制備:①將主要成分為腸溶型丙烯酸樹脂包衣材料溶于90%的乙醇中，制備成10% 15%的懸濁液；②使用包衣機將上述懸濁液均勻噴涂于疫苗微丸的表面；⑷誘食劑的噴涂:①將二甲基-β -丙酸噻亭(DMPT)溶于水中，制成10% 30%的水溶液；②使用包衣機將上述水溶液均勻噴涂于上述制備的腸溶層包衣表面。而且，所述步驟⑵所述制備成的微丸的有效疫苗含量為109cfu/g量級水平。而且，所述步驟⑶的①的步驟中腸溶型丙烯酸樹脂的具體標號為E0BS60，pH6.0。而且，所述步驟⑷的①的步驟中誘食劑二甲基-β -丙酸噻亭(DMPT)，以甜菜堿代替作為誘食劑。一種用于養殖海水魚類三聯口服疫苗的使用方法，其特征在于:該方法的步驟如下:⑴第一次投喂:在每天正常餌料投喂間隔，將三聯口服疫苗微丸投喂魚，投喂量為正常餌料量的50%，每天2次；⑵加強投喂；在第一次投喂三聯口服疫苗微丸后的第25 - 35天開始與第一次投喂方法相同的加強投喂。本專利技術的優點和效果是:1、本專利技術與現有疫苗制備方法相比，本專利技術首次制備了副溶血性弧菌、溶藻弧菌和遲緩愛德華氏菌三聯口服疫苗，并采用投喂接種的方法，免疫效果理想，工作量小，適合大規模接種。2、本專利技術采用功能性包衣材料，既保護疫苗在胃液中不被消化，又使疫苗在腸道中迅速釋放，與后腸黏膜充分接觸，產生免疫反應，獲得高效免疫效果，解決了直接口服給藥免疫效果差的問題。3、本專利技術充分考慮工廠化海水魚的生活環境、身體機能、捕食習慣等特點，在配方比例上反復進行實驗，科學取值，針對性很強，使用方便，效果非常顯著，有很高的市場應用價值。具體實施例方式下面結合具體實施方案對本專利技術進一步說明，其具體實施方案應該理解為僅為舉例說明，不是限定性的，不能以下述舉例說明來限定本專利技術的保護范圍。一種用于養殖海水魚類三聯口服疫苗，該三聯口服疫苗由藥用淀粉、麥芽糊精、濃度為IXlO12Cfu的副溶血性弧菌菌液、濃度為IXlO12Cfu的溶藻弧菌菌液及濃度為IXlO12Cfu的遲緩愛德華氏菌菌液混合配制而成，所述藥用淀粉:麥芽糊精:濃度為IXlO12Cfu的副溶血性弧菌菌液:濃度為IXlO12Cfu的溶藻弧菌菌液:濃度為IXlO12Cfu的遲緩愛德華氏菌菌液的比例為=3:1:0.35:0.35:0.35，單位為:克:克:mL:mL:mL0在本專利技術的具體實施中，所述副溶血性弧菌菌液、溶藻弧菌菌液及遲緩愛德華氏菌菌液在使用前要經過0.5%的甲醛滅活。一種用于養殖海水魚類三聯口服疫苗的制備，該制備過程的方法如下:⑴滅活:使用0.5%的甲醛對副溶血性弧菌菌液、溶藻弧菌菌液和遲緩愛德華氏菌菌液進行滅活； ⑵微丸制備:①按藥用淀粉:麥芽糊精:濃度為IXlO12Cfu的副溶血性弧菌菌液:濃度為IXlO12Cfu的溶藻弧菌菌液:濃度為IXlO12Cfu的遲緩愛德華氏菌菌液的比例為:3:1:0.35:0.35:0.35，單位為:克:克:mL:mL:mL的配比將上述物質混合均勻成微濕的軟材；②制微丸:對上述軟材使用微丸機制微丸，微丸機采用400轉/分鐘的轉速，制備成10 20目的微丸，所述制備成的微丸本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于養殖海水魚類三聯口服疫苗，其特征在于：該三聯口服疫苗由藥用淀粉、麥芽糊精、濃度為1×1012cfu的副溶血性弧菌菌液、濃度為1×1012cfu的溶藻弧菌菌液及濃度為1×1012cfu的遲緩愛德華氏菌菌液混合配制而成，所述藥用淀粉:麥芽糊精:濃度為1×1012cfu的副溶血性弧菌菌液:濃度為1×1012cfu的溶藻弧菌菌液:濃度為1×1012cfu的遲緩愛德華氏菌菌液的比例為：3:1:0.35:0.35:0.35，單位為：克:克:mL:mL:mL。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：孫志景，張振國，姜巨峰，吳會民，馮守明，夏蘇東，劉肖蓮，
申請(專利權)人：天津市水產研究所，
類型：發明
國別省市：
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