本發明專利技術公開了一種針對結核病具有免疫原性的融合蛋白及其應用，本發明專利技術的針對結核病具有免疫原性的融合蛋白，為含有分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白，本發明專利技術還進一步公開了一種重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌，所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌的基因組中整合有本發明專利技術融合蛋白的編碼基因。本發明專利技術的融合蛋白或其編碼基因或重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌可用于制備結核病疫苗。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于基因工程
，尤其涉及一種針對結核病具有免疫原性的融合蛋白及其應用。
技術介紹
結核病(TB)是一種嚴重危害人民健康的慢性傳染病，目前全球有約20億人被感染，每年新出現結核病患者約800-1000萬，每年因結核病死亡人數約為200-300萬。目前我國患結核病人數居世界第二位，僅次于印度年發病人數約為130萬，是全球22個結核病流行嚴重的國家之一，同時也是全球27個耐多藥結核病流行嚴重的國家之一，每年因結核病死亡人數每年達13萬，超過其它傳染病死亡人數的總和。因此結核病是我國重點控制的重大疾病之一。結核病的病原菌主要是分枝桿菌屬中的結核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis,以下簡寫為M.tb)和牛分支桿菌(Mycobacterium bovis,以下簡寫為Mb)。分枝桿菌是一類典型的細胞內寄生細菌，它在被宿主細胞吞噬后能長期存活于吞噬體，并以吞噬體作為自己的“避風港”，這就極大地限制了機體對它產生免疫應答的能力。當宿主感染分枝桿菌時，少部分的宿主會直接形成活動性結核病，而大部分的宿主則由于自身的免疫反應，迫使細菌進入一種休眠狀態，從而控制疾病的進一步發展。但是當處于潛伏感染狀態的宿主年老或者免疫能力下降時，細菌就會再度活化，繼而發展為活動性結核病。目前預防結核病唯一能用于臨床的疫苗是卡介苗(BCG)，而BCG由于其不能較好的為成人提供保護，其他新發展的結核病疫苗大多數都是基于結核菌感染早期表達抗體的預防性疫苗，由于這些疫苗選擇生長早期和對數生長期表達的抗原，不能誘導機體產生針對結核分枝桿菌休眠期(靜止生長期或低氧狀態)表達的潛伏抗原的免疫應答。而潛伏感染狀態是結核病復發的主要來源，是結核不能被徹底清除的原因之一，針對這些潛伏抗原開發新型疫苗勢在必行。 根據數篇文獻的研究表明，DosR (Dormancy Survival Regulator)調控系統在分枝桿菌在由活化狀態轉向潛伏狀態的過程中起到了至關重要的作用。它能夠控制48個基因的誘導表達，而這些基因的表達是分枝桿菌在面對體內低氧、CO、NO等條件時，適應并持留所必須的條件，Rv2626c就是DosR調控編碼的潛伏期抗原。目前尚無利用Rv2626c制備的結核病疫苗。
技術實現思路
本專利技術的目的在于克服現有技術中的缺陷，提供一種具有結核病免疫原性的融合蛋白及其應用。本專利技術一方面提供了一種融合蛋白，為含有分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白。所述融合蛋白中，Ag85a的氨基酸序列為SEQ ID NO:1:FSRPGLPVEYLQVPSPSMGRDIKVQFQSGGANSPALYLLDGLRAQDDFSGWDINTPAFEWYDQSGLSVVMPVGGQSSFYSDWYQPACGKAGCQTYKWETFLTSELPGWLQANRHVKPTGSAVVGLSMAASSALTLAIYHPQQFVYAGAMSGLLDPSQAMGPTLIGLAMGDAGGYKASDMWGPKEDPAWQRNDPLLNVGKLIANNTRVWVYCGNGKPSDLGGNNLPAKFLEGFVRTSNIKFQDAYNAGGGHNGVFDFPDSGTHSWEYWGAQLNAMKPDLQRALGATPNTGPAPQGAo所述融合蛋白中，Rv2626c的氨基酸序列為SEQ ID N0:2:TTARDMNAGVTCVGEHETLTAAAQYMREHDIGALPIC ⑶ DDRLHGMLTDRDIVIKGLAAGLDPNTATAGELARDSIYYVDANASIQEMLNVMEEHQVRRVPVISEHRLVGIVTEADIARHLPEHAIVQFVKAICSPMALASo所述融合蛋白中，Ag85a蛋白和Rv2626c蛋白之間可選擇地含有連接肽。所述Ag85a蛋白可連接于Rv2626c蛋白的N端或C端，較佳的，連接于Rv2626c蛋白的N端。進一步的，所述融合蛋白還含有單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LL0。進一步的，所述融合蛋白為單 核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO與分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白。所述單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO的氨基酸序列為SEQ ID NO:3:KIMLVFITLILISLPIAQQTEAKDASAFNKENSISSMEKKHADEIDKYIQGLDYNKNNVLVYHGDAVTNVPPRKGYKDGNEYIVVEKKKKSINQNNADIQVVNAISSLTYPGALVKANSELVENQPDVLPVKRDSLTLSIDLPGMTNQDNKIVVKNATKSNVNNAVNTLVERWNEKYAQAYPNVSAKIDYDDEMAYSESQLIAKFGTAFKAVNNSLNVNFGAISEGKMQEEVISFKQIYYNVNVNEPTRPSRFFGKAVTKEQLQALGVNAENPPAYISSVAYGRQVYLKLSTNSHSTKVKAAFDAAVSGKSVS⑶VELTNIIKNSSFKAVIYGGSAKDEVQIIDGNLGDLRDILKKGATFNRETPGVPIAYTTNFLKDNELAVIKNNSEYIETTSKAYTDGKINIDHSGGYVAQFNISWDEINYDPEGNEIVQHKNWSENNKSKLAHFTSSIYLPGNARNINVYAKECTGLAWEffffRTVIDDRNLPLVKNRNISIWGTTLYPKYSNSVDNPIE所述融合蛋白中，Ag85a蛋白和Rv2626c蛋白的融合蛋白插入于前述單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO的第37位和第38位氨基酸殘基(相當于野生型LLO的第37位和第52位氨基酸殘基)之間。進一步的，所述融合蛋白的氨基酸序列為SEQ ID N0:4:KIMLVFITLILISLPIAQQTEAKDASAFNKENSISSMFSRPGLPVEYLQVPSPSMGRDIKVQFQSGGANSPALYLLDGLRAQDDFSGWDINTPAFEWYDQSGLSVVMPVGGQSSFYSDffYQPACGKAGCQTYKffETFLTSELPGffLQANRHVKPTGSAVVGLSMAASSALTLAIYHPQQFVYAGAMSGLLDPSQAMGPTLIGLAMGDAGGYKASDMWGPKEDPAWQRNDPLLNVGKLIANNTRVWVYCGNGKPSDLGGNNLPAKFLEGFVRTSNIKFQDAYNAGGGHNGVFDFPDSGTHSWEYWGAQLNAMKPDLQRALGATPNTGPAPQGAGGGGSGGGGSTTARDIMNAGVTCVGEHETLTAAAQYMREHDIGALPICGDDDRLHGMLTDRDIVIKGLAAGLDPNTATAGELARDSIYYVDANASIQEMLNVMEEHQVRRVPVISEHRLVGIVTEADIARHLPEHAIVQFVKAICSPMALASEKKHADEIDKYIQGLDYNKNNVLVYHGDAVTNVPPRKGYKDGNEYIVVEKKKKSINQNNADIQVVNAISSLTYPGALVKANSELVENQPDVLPVKRDSLTLSIDLPGMTNQDNKIV本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種針對結核病具有免疫原性的融合蛋白，為含有分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白。
【技術特征摘要】
1.一種針對結核病具有免疫原性的融合蛋白，為含有分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白。2.如權利要求1所述融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中，Ag85a的氨基酸序列為SEQ ID NO:1 ；Rv2626c 的氨基酸序列為 SEQ ID NO: 2。3.如權利要求1所述融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中，所述Ag85a蛋白連接于Rv2626c蛋白的N端或C端。4.如權利要求1所述融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白為單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO與分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白。5.如權利要求1所述融合蛋白，其特征在于，所述單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO的氨基酸序列為SEQ ID NO:3。6.如權利要求5所述融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白中，Ag85a蛋白和Rv2626c蛋白的融合蛋白插入于所述單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO的第37位和第38位氨基酸殘基之間。7.如權利要求5所述融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列為SEQIDN0:4。8.一種多核苷酸，其編碼權利要求1-7任一權利要求所述融合蛋白。9.一種載體,其含有權利要求8所述多核苷酸。10.如權利要求9所述載體，其特征在于，所述載體為原核載體或穿梭質粒。11.一種宿主細胞 ，其被權利要求9或10所述載體所轉化。12.—種重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌，所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌的基因組中，整合有編碼分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白的基因，所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌能融合表達單核細胞增生性李斯特菌溶血素蛋白LLO與分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白。13.如權利要求12所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌，其特征在于，所述編碼分枝桿菌Ag85a和Rv2626c的融合蛋白的基因重組整合于野生型單核細胞增生李斯特菌基因組DNA中hly基因的111位與154位堿基之間。14.如權利要求12所述重組減毒單核細胞增生性李斯特細菌，其特征在于，所述分枝桿菌Ag85a...
【專利技術屬性】
技術研發人員：焦新安，殷月蘭，付紅，陳祥，孫林，潘志明，黃金林，耿士忠，李求春，
申請(專利權)人：揚州大學，
類型：發明
國別省市：
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