本發明專利技術公開了一種高靈敏、高線性的D-D二聚體檢測試劑盒，試劑一為30mmol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。試劑二包括有濃度為0.01%(w/v)至0.04%(w/v)的大直徑鼠抗人D-D二聚體單克隆抗體膠乳顆粒與濃度為0.05(w/v)至0.2%(w/v)的小直徑鼠抗人D-D二聚體單克隆抗體膠乳顆粒混合液，小直徑鼠抗人D-D二聚體單克隆抗體膠乳顆粒上的特異性抗體含量為大直徑鼠抗人D-D二聚體單克隆抗體膠乳顆粒上的特異性抗體含量的0.5%至10%。通過優化大、小微粒的平均直徑和它們在反應體系中的濃度，可以實現D-D二聚體低濃度場合的高靈敏度檢測，也可以使高濃度場合下的檢測范圍得以拓寬。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生物樣本檢測領域，特別是涉及到一種利用平均直徑不同的兩種乳膠微粒來提高生物樣本檢測靈敏度和檢測范圍的試劑盒及其使用方法，具體地說是一種高靈敏、高線性的D-D 二聚體檢測試劑盒及其使用方法。
技術介紹
D 二聚體(D-D dimer)來源于纖溶酶溶解的交聯纖維蛋白凝塊。是在血液凝固 纖溶系統中，由于凝固第十三因子的作用，安定的交聯纖維蛋白被纖溶酶分解的FDP的一種，纖維蛋白單體經活化因子XIII交聯后，再經纖溶酶水解所產生的一種特異性降解產物，是一個特異性的纖溶過程標記物。血液中D 二聚體的增加證明體內有血栓形成，啟動纖溶系統，在惡性腫瘤，產科疾患，血管病變，DIC (Disseminated Intravascular Coagulation Syndrome;彌散性血管內凝血綜合癥)等疾病中顯示高值。纖維蛋白降解產物D-二聚體的水平升高，表明體內存在著頻繁的纖維蛋白降解過程。因此，纖維D-二聚體是深靜脈血栓(DVT)，肺栓塞(PE)，彌漫性血管內凝血(DIC)的關鍵指標。該適應癥所采用的診斷方法是D 二聚體測定。血清D 二聚體的測定目前檢測的方法是膠乳免疫比濁法，標本中的D-D 二聚體與鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳增強顆粒發生抗原抗體反應，產生凝集以致濁度上升。通過對濁度，測定D二聚體濃度。其反應過程如下: 血清中D-D 二聚體+鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體一抗原抗體復合物。然而，現有的方法在檢測靈敏度上及線性上均不寬，在用于臨床檢測D-D 二聚體時常常受到高濃度樣本檢測線性不足亦或是低濃度樣本檢測靈敏度低的制約。
技術實現思路
本專利技術所要解決的技術問題是針對上述現有技術現狀，而提供一種同時運用平均直徑不同的兩種乳膠微粒對D-D 二聚體進行檢測，并通過優化大、小微粒的平均直徑和它們在反應體系中的濃度，可以實現低濃度場合的高靈敏度檢測，也可以使高濃度場合下的檢測范圍得以拓寬，并提升低濃度場合的檢測準確度從而得到準確的臨床判定的高靈敏、高線性的D-D 二聚體檢測試劑盒及其使用方法。本專利技術解決上述技術問題所采用的技術方案為: 一種高靈敏、高線性的D-D 二聚體檢測試劑盒，其中:包括有試劑一、試劑二、D-D 二聚體標準品以及對照用D-D 二聚體異常血清，試劑一為三羥甲基氨基甲烷緩沖液，試劑二包括有濃度為0.01%(w/v)至0.04%(w/v)的大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒與濃度為0.05 (w/v)至0.2%(w/v)的小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒混合液，小直徑鼠抗人D-D 二聚體單 克隆抗體膠乳顆粒上的特異性抗體含量為大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒上的特異性抗體含量的0.5%至10%。本專利技術解決上述技術問題所采用的技術方案為: 上述的大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒直徑在0.15微米至0.29微米之間，小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒直徑在0.05微米至0.10微米之間。上述的大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒以及小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒上的抗體的蛋白質質量高于兩種膠乳顆粒總蛋白量質量的14%。上述的試劑二中含有的D-D 二聚體單克隆抗體為大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒以及小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒所能吸附的D-D 二聚體單克隆抗體最大量的85%至120%。上述的試劑二中含有的D-D 二聚體單克隆抗體為大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒以及小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒所能吸附的D-D 二聚體單克隆抗體最大量的95%至120%。上述的試劑一為30mmol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。一種高靈敏、高線性的D-D 二聚體檢測試劑盒的使用方法，包括以下步驟:步驟一、在試劑一中加入D-D 二聚體試驗品，置于37°C水浴5分鐘，然后加入試劑二，置于37°C水浴，使D-D 二聚體試驗品中的D-D 二聚體與試劑二中的大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒以及小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒發生抗原抗體反應，加入試劑二 10秒后， 通過分光光度計在570nm處讀取吸光度AO，3分鐘后，再次通過分光光度計在570nm處讀取吸光度Al，得出Λ k職=Al-AO ；步驟二、通過已知的D-D 二聚體標準品吸光度ΛD-D 二聚體標準品濃度計算D-D 二聚體試驗品濃度；公式為:D-D 二聚體試驗品濃度=D-D 二聚體標準品濃度X Δ A試驗品/ △ A標準。上述的D-D 二聚體試驗品濃度在Omg/L至20.8mg/L。與現有技術相比，本專利技術試劑二包括有濃度為0.01%(w/v)至0.04%(w/v)的大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒與濃度為0.05(w/v)至0.2%(w/v)的小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒混合液，小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒上的特異性抗體含量為大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒上的特異性抗體含量的0.5%至10%。這兩種乳膠微粒均屬致敏乳膠微粒。運用平均直徑不同的兩種乳膠微粒的可以提高低濃度場合的檢測靈敏度和拓寬高濃度場合的檢測范圍；平均直徑大的乳膠微粒(大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒)偶連一定數量的抗體后進行免疫反應，可以達到或者接近免疫反應的最大速率，而平均直徑小的乳膠微粒(小直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒)偶連少于某個量的抗體后進行免疫反應，可以降低反應速率；通過優化大、小微粒的平均直徑和它們在反應體系中的濃度，可以實現低濃度場合的高靈敏度檢測，也可以使高濃度場合下的檢測范圍得以拓寬，并提升低濃度場合的檢測準確度從而得到準確的臨床判定。檢測D-D 二聚體濃度的方法是通過標本中的D-D 二聚體與鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳增強顆粒發生抗原抗體反應，產生凝集以致濁度上升。在570nm處通過分光光度計測定濁度的變化率，再與標準品對比求出D-D 二聚體的濃度。D-D 二聚體檢測試劑采用先進的納米技術制作的乳膠顆粒非特異性地吸附樣品中的鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體，使其固相化，易于分散。在D-D 二聚體單克隆抗體乳膠顆粒的制備上，將以兩種不同親和力的抗體分別標記不同大小的微球，以高親和力抗體標記大微球，其檢測范圍窄但靈敏度高，適合對低濃度樣本進行檢測，而以低親和力抗體標記小微球，適合定量檢測高濃度標本。如此即克服了血清學中的鉤狀效應，同時也提高了試劑檢測的靈敏度，這是其它檢測方法學所不能具備的。用大微球包被的高親和力的抗體容易和低濃度的抗原發生抗原抗體反應，小微球包被的低親和力的抗體容易和樣本中的高濃度抗原發生反應。可以說該試劑可同時兼顧高低濃度的樣本測定。具體實施例方式以下對本專利技術的實施例作進一步詳細描述。本專利技術的一種高靈敏、高線性的D-D 二聚體檢測試劑盒，其中:包括有試劑一、試劑二、D-D 二聚體標準品以及對照用D-D 二聚體異常血清，試劑一為30mmol/L的三羥甲基氨基甲烷緩沖液。試劑二包括有濃度為0.01%(w/v)至0.04%(w/v)的大直徑鼠抗人D-D 二聚體單克隆抗體膠乳顆粒與濃度為0.05 (w/v)至本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種高靈敏、高線性的D?D二聚體檢測試劑盒，其特征是：包括有試劑一、試劑二、D?D二聚體標準品以及對照用D?D二聚體異常血清，所述的試劑一為三羥甲基氨基甲烷緩沖液，所述的試劑二包括有濃度為0.01%(w/v)至0.04%(w/v)的大直徑鼠抗人D?D二聚體單克隆抗體膠乳顆粒與濃度為0.05(w/v)至0.2%(w/v)的小直徑鼠抗人D?D二聚體單克隆抗體膠乳顆粒混合液，所述的小直徑鼠抗人D?D二聚體單克隆抗體膠乳顆粒上的特異性抗體含量為大直徑鼠抗人D?D二聚體單克隆抗體膠乳顆粒上的特異性抗體含量的0.5%至10%。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：張聞，
申請(專利權)人：寧波瑞源生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：
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