一種基于單層納米金直接檢測阿特拉津的電化學(xué)方法，是在電化學(xué)傳感器的基礎(chǔ)上，將單層納米金組裝在以金電極為工作電極的電極表面，再將阿特拉津的單克隆抗體組裝在其表面，應(yīng)用牛血清白蛋白封閉后，直接對待測樣品進(jìn)行檢測。本方法采用金電極作為工作電極，利用納米金和-SH間的強(qiáng)化學(xué)吸附作用固定納米金，形成的單層納米金能提供一個穩(wěn)定和緊湊的表面，使固定的抗體量增加，從而使制備的免疫傳感器可直接進(jìn)行檢測。本方法簡單，樣品前處理和操作簡單，檢測速度快，成本低廉，且能達(dá)到多層修飾電極的檢測限。此外，本方法具有好的選擇性、重現(xiàn)性和再生性，回收率符合要求，可直接對農(nóng)產(chǎn)品中阿特拉津殘留進(jìn)行檢測，具有重要的實際應(yīng)用價值。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及農(nóng)藥殘留檢測和生物傳感器領(lǐng)域，具體的是涉及一種檢測阿特拉津的電流型電化學(xué)免疫傳感器方法。
技術(shù)介紹
阿特拉津是目前農(nóng)業(yè)上使用范圍最廣、使用量最大的一種旱田除草劑，其化學(xué)性質(zhì)比較穩(wěn)定，在自然環(huán)境中不易被分解，不僅能夠長期存留在土壤和地表水中，污染自然環(huán)境；而且農(nóng)作物的根系及莖中也會有殘留，可間接危害人體健康。近年來一些研究表明，阿特拉津有一定程度的致突變和致癌活性。目前阿特拉津殘留的檢測方法主要有氣相色譜、高效液相色譜、色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)、酶聯(lián)免疫分析等，其中色譜分析法儀器設(shè)備貴重，樣品前處理復(fù)雜，需專業(yè)人員，而酶聯(lián)免疫分析方法相對復(fù)雜，靈敏度較低，耗時，成本較高。與上述檢測方法相比，電化學(xué)免疫傳感器具有低功耗、高靈敏、抗干擾能力強(qiáng)、線性范圍寬和優(yōu)異的重現(xiàn)性、穩(wěn)定性等特性。已報道的阻抗型和電導(dǎo)型免疫傳感器，檢測阿特拉津殘留的方法均為較為復(fù)雜的間接競爭法，不僅傳感器表面修飾過程相對復(fù)雜，且很少涉及農(nóng)產(chǎn)品等實際樣品的檢測。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的是，針對現(xiàn)有農(nóng)產(chǎn)品中阿特拉津殘留的檢測方法，操作和樣品前處理復(fù)雜，成本高的問題，提供一種，一種基于單層納米金直接、簡單、低成本、高靈敏檢測農(nóng)產(chǎn)品中阿特拉津殘留的電流型免疫傳感器的方法。該方法具有良好的特異性，重現(xiàn)性和回收率，可用于實際樣品中阿特拉津殘留的檢測。為了實現(xiàn)上 述目的，本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是:一種，該方法是在電化學(xué)傳感器的基礎(chǔ)上，將單層納米金組裝在以金電極為工作電極的電極表面，再將阿特拉津的單克隆抗體組裝在其表面，應(yīng)用牛血清白蛋白封閉后，直接對待測樣品進(jìn)行檢測。上述單層納米金的組裝過程中，是將表面已被活化的金電極在0.4mg/mLMEA溶液中孵育 30-60min 后，再在 0.5504nmol/L AuNPs 溶液中孵育 30_60min。上述阿特拉津的單克隆抗體組裝時,抗體濃度為100ng/mL。上述免疫傳感器檢測阿特拉津的具體過程如下，可結(jié)合參見附圖說明圖1:1、納米金粒子的制備及表征:取IOOmL0.01%氯金酸水溶液于圓底燒瓶中，用恒溫磁力攪拌器200r/min攪拌加熱至沸,沸騰后立即加入3mLl%的朽1檬酸三鈉溶液,反應(yīng)8min后停止攪拌，顏色由灰色變成酒紅色，直到溶液呈透亮的紅色時停止加熱。待溶液冷卻至室溫后，分裝到離心管中，于4°C冰箱中保存。2、金電極的處理和活化:將金電極分別在1.0,0.3,0.05的拋光粉上打磨成鏡面，用水沖洗掉大部分拋光粉，然后分別用無水乙醇、超純水進(jìn)行超聲清洗3-5min。進(jìn)行修飾前將金電極置于0.5M H2SO4中，在-0.3 1.5v進(jìn)行CV掃描，掃速為50mv/s，當(dāng)圖形穩(wěn)定后停止掃描，然后用蒸餾水沖洗，再用氮?dú)獯蹈蓚溆谩?、傳感器的構(gòu)建:包括納米金和阿特拉津的單克隆抗體(購于美國IL公司)在金電極表面的組裝。納米金的組裝:將打磨干凈的金電極浸泡在lOmmol/L MPA乙醇溶液中l(wèi)_3h，沖洗后再用EDC/NHS活化表面，再在0.4mg/mL MEA溶液中孵育30_60min，然后用0.5504nmol/L納米金孵育30_60min,沖洗,氮?dú)獯蹈伞０⑻乩虻膯慰寺】贵w的組裝:將納米金修飾的金電極浸泡在10mmol/L MPA乙醇溶液中30_60min，PBS沖洗后再用EDC/NHS活化表面lOmin，滴加濃度為100ng/mL的阿特拉津單克隆抗體溶液，在4°C下溫育l_3h，得到抗體修飾的電極；將電極再移入1%的BSA中溫育30-60min，應(yīng)用牛血清白蛋白封閉非特異性吸附的位點(diǎn)。4、將構(gòu)建好的免疫傳感器置于含有5.0mM的鐵氰化鉀和亞鐵氰化鉀、0.1MKCl的5mL 0.1M PBS (PH5.0)的溶液液中，采用循環(huán)伏安法和差分脈沖伏安法對樣品中的阿特拉津農(nóng)藥進(jìn)行直接檢測。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)為:1、本專利技術(shù)利用Au-SH的強(qiáng)化學(xué)吸附作用將納米金組裝在金電極表面，組裝過程簡單快速，利用納米金的強(qiáng)導(dǎo)電性，提高了電流的敏感性，納米金的比表面積使之固定的抗體量增加，使得該傳感器具有很高的靈敏度，最低檢測限為0.005ng/mL。2、本專利技術(shù)通過將納米金和阿特拉津的單克隆抗體組裝在金電極表面構(gòu)建成電流型免疫傳感器，不僅操作簡單，檢測速度快，成本低廉，而且能達(dá)到多層修飾電極的檢測限。此外本傳感器具有良好的特異性、重現(xiàn)性和回收率，可直接對農(nóng)產(chǎn)品中阿特拉津殘留進(jìn)行檢測，具有重要的實際應(yīng)用價值。本專利技術(shù)與傳統(tǒng)的檢測方法及同類傳感器對比，其0.005ng/mL的檢測限比大多數(shù)文獻(xiàn)報道的更低， 見下表I。表I本專利技術(shù)與傳統(tǒng)的檢測方法及同類傳感器的對比權(quán)利要求1.一種，其特征在于，該方法是在電化學(xué)傳感器的基礎(chǔ)上，將單層納米金組裝在以金電極為工作電極的電極表面，再將阿特拉津的單克隆抗體組裝在其表面，應(yīng)用牛血清白蛋白封閉后，直接對待測樣品進(jìn)行檢測。2.如權(quán)利要求1所述的，其特征在于，所述單層納米金的組裝過程中，是將表面已被活化的金電極在0.4mg/mLMEA溶液中孵育 30_60min 后，再在 0.5504nmol/L AuNPs 溶液中鮮育 30_60min。3.如權(quán)利要求2所述的，其特征在于，所述阿特拉津的單克隆 抗體組裝時，抗體濃度為100ng/mL。全文摘要一種，是在電化學(xué)傳感器的基礎(chǔ)上，將單層納米金組裝在以金電極為工作電極的電極表面，再將阿特拉津的單克隆抗體組裝在其表面，應(yīng)用牛血清白蛋白封閉后，直接對待測樣品進(jìn)行檢測。本方法采用金電極作為工作電極，利用納米金和-SH間的強(qiáng)化學(xué)吸附作用固定納米金，形成的單層納米金能提供一個穩(wěn)定和緊湊的表面，使固定的抗體量增加，從而使制備的免疫傳感器可直接進(jìn)行檢測。本方法簡單，樣品前處理和操作簡單，檢測速度快，成本低廉，且能達(dá)到多層修飾電極的檢測限。此外，本方法具有好的選擇性、重現(xiàn)性和再生性，回收率符合要求，可直接對農(nóng)產(chǎn)品中阿特拉津殘留進(jìn)行檢測，具有重要的實際應(yīng)用價值。文檔編號G01N27/26GK103235132SQ201310142539公開日2013年8月7日 申請日期2013年4月23日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月23日專利技術(shù)者劉霞, 李文進(jìn), 李蕾, 楊陽, 毛祿剛 申請人:湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種基于單層納米金直接檢測阿特拉津的電化學(xué)方法，其特征在于，該方法是在電化學(xué)傳感器的基礎(chǔ)上，將單層納米金組裝在以金電極為工作電極的電極表面，再將阿特拉津的單克隆抗體組裝在其表面，應(yīng)用牛血清白蛋白封閉后，直接對待測樣品進(jìn)行檢測。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉霞，李文進(jìn)，李蕾，楊陽，毛祿剛，
申請(專利權(quán))人：湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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