本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種胎兒9號染色體異常疾病的篩查試劑盒，它包括檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑在制備胎兒9號染色體異常篩查試劑中的用途。本發(fā)明專利技術(shù)試劑盒可以對胎兒的9號染色體是否異常進行評估，臨床應(yīng)用前景良好。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種試劑盒，特別涉及一種胎兒9號染色體異常疾病的篩查試劑盒。
技術(shù)介紹
人類的9號染色體是23對染色體中的一對，正常情況下每個體細胞擁有兩條該染色體，此染色體含有約有800到1200個基因，占細胞內(nèi)所有DNA的4%到4.5%。9號染色體中有95個基因與疾病有關(guān)，其中之一可抑制腫瘤形成，還有一個基因與某種類似亨廷頓氏癥的神經(jīng)退化疾病有關(guān)。9號染色體的異常，如9號染色體三體綜合征，主要病理特征是小頭畸形、第4腦室擴大，先天心臟、指趾異常，先天性髖關(guān)節(jié)脫位、馬蹄外翻足、隱睪、陰囊陰莖異常、特殊面容、握拳手、手指重疊等，并且患者出生以后早年死亡的可能性大。因此，在懷孕早期進行檢測，確定胎兒的9號染色體是否異常，對妊娠及時干預(yù)以及胎兒出生后的及時治療具有極為重要指導(dǎo)意義。
技術(shù)實現(xiàn)思路
為了解決上述問題，本專利技術(shù)提供了一種胎兒9號染色體異常疾病的篩查試劑盒，檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑在制備胎兒9號染色體異常疾病篩查試劑中的用途。本專利技術(shù)胎兒9號染色體異常疾病的篩查試劑盒，它包括檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑。其中，所述試劑為ELISA檢測用試劑。所述ELISA檢測用試劑為ELISA直接法、ELISA間接法、ELISA雙抗體夾心法或者ELISA競爭法檢測用試劑。所述ELISA雙抗體夾心法檢測用試劑包括抗人PLGF抗體、人PLGF標準品、ELISA檢測用酶和ELISA檢測用底物。優(yōu)選地，所述抗人PLGF抗體包括抗人PLGF單克隆抗體和生物素標記的抗人PLGF多克隆抗體；所述ELISA檢測用酶是辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素；所述ELISA檢測用底物為TMB。本專利技術(shù)還提供了檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑在制備胎兒9號染色體異常疾病篩查試劑中的用途。其中，所述檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑為ELISA檢測用試劑。所述ELISA檢測用試劑為ELISA直接法、ELISA間接法、ELISA雙抗體夾心法或者ELISA競爭法檢測用試劑。所述ELISA雙抗體夾心法檢測用試劑包括抗人PLGF抗體、人PLGF標準品、ELISA檢測用酶和ELISA檢測用底物。 優(yōu)選地，所述抗人PLGF抗體包括抗人PLGF單克隆抗體和生物素標記的抗人PLGF多克隆抗體；所述ELISA檢測用酶是辣根過氧化物酶標記鏈霉親和素；所述ELISA檢測用底物為TMB。本專利技術(shù)篩查試劑盒和方法能夠有效篩查胎兒的9號染色體是否異常，使胎兒可以得到及時的治療，降低死亡率，并且本專利技術(shù)試劑盒是對孕婦進行血液或尿液進行檢查，使用方便，患者依從性高，具有良好的臨床應(yīng)用前景。以下通過實施例形式的具體實施方式，對本專利技術(shù)的上述內(nèi)容作進一步的詳細說明。但不應(yīng)將此理解為本專利技術(shù)上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本專利技術(shù)上述內(nèi)容所實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本專利技術(shù)的范圍。具體實施例方式實施例1樣本采集1、采集對象:2011年10月-2012年4月在四川大學(xué)華西第二醫(yī)院門診及成都中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院門診就診的孕早期孕婦共36例。2、早期妊娠診斷標準:參考全國高等醫(yī)學(xué)院校教材《婦產(chǎn)科學(xué)》第7版記載的方法(包括①停經(jīng)史；@HCG陽性；③確診為宮內(nèi)妊娠(B型超聲見到宮腔內(nèi)有妊娠囊)。3、納入標準:①符合上述診斷標準者；②孕周:5周-13+6周；③知情同意，志愿受試。4、排除標準:有心血管、肝、腎和造血系統(tǒng)等并發(fā)癥，或其他原發(fā)性疾病及精神病患者。 5、脫落標準:①納入后發(fā)現(xiàn)不符合納入標準或伴有排除標準的病例予以剔除因其他原因失訪的病例患者自行退出；④納入后發(fā)現(xiàn)無法從受試者處獲得真實、全面的臨床資料。6、樣本人口特征:納入孕婦年齡范圍21歲-43歲，平均年齡31.96±6.1歲。7、胎兒9號染色異常檢測方法:羊水穿刺后G顯帶分析。檢測結(jié)果:34例正常，I例為9號染色體三體,I例為9號染色體臂間倒位。8、樣本采集(I)血液樣本:采用含有EDTA的試管采集孕婦靜脈血(空腹)4ml,經(jīng)4°C低溫離心(4000rpm, IOmin)后將其上清液，編號保存于_80°C冰箱冷凍待測。(2)尿液樣本:留取受試者中段尿6ml，經(jīng)4°C低溫離心(4000rpm, IOmin)后將其上清液，編號保存于_80°C冰箱冷凍待測。實施例2PLGF水平的檢測方法1、主要儀器(I)酶標儀:Molecular Devices 公司，Spectra Max5(2)冷凍離心機:BECKMAN 公司，AllegraTMMR(3)_2CTC冰箱:Electrolux 公司(4)超低溫冰箱:Thermo 公司，SK501(5)電熱恒溫培養(yǎng)箱:上海森信實驗儀器有限公司，DRP-91622、實驗試劑及材料(I) Capture Antibody:鼠抗人 PLGF 單克隆抗體 Human PLGF Antibody(Monoclonal Mouse IgGl)，購自 R&D 公司，MAB264 ；(2)Detection Antibody:生物素標記的羊抗人PLGF多克隆抗體Human PLGFBiotinylated Antibody (Ployclonal Goat IgG)，購自 R&D 公司，BAF264 ;(3)PLGF 標準品:重組人 PLGF Recombinant Human PLGF,購自 R&D 公司，264-PG-10 ；(4)辣根過氧化物酶標記的鏈霉親和素Streptavidin-horseradish peroxidase:R&D 公司，DY998 ；(5) TMB:Sigma 公司，T0440-1L ；(6) PBS:自配，ρΗ7.4，137mM NaCl, 2.7mM KC1,8.1mM Na2HPO4, 1.5mMKH2PO4, pH7.2-7.4, 0.2 μ m filtered ；(7) Tween-20:上海生工；(8)包被緩沖液:自配，ρΗ9.6、50mM 碳酸鹽緩沖液，Na2CO3L 59g，NaHC032.93g，加蒸餾水至IL ；(9)洗滌液:自配，PBS-T (PBS，含 0.02%Tween-20)(10)終止液:自 配，2M H2SO4 ；(11)脫脂奶粉:伊利集團；(12)牛血清白蛋白(BSA):羅氏公司；(13)胎牛血清(FBS):GIBC0 公司；(14)可拆式 96 孔 ELISA 板:COSTAR 公司。3、實驗方法(I)將所測樣本放在室溫下復(fù)蘇后，再進行檢測；(2)包被 Capture Antibody, 4 μ g/ml, 100 μ 1/well, 4°C放置過夜(約 16_20h);(3)3%BSA溶液、3%FBS溶液或為5%脫脂奶粉溶液封閉，100 μ 1/well，37 °C孵育2h ；(4)PBS-T洗板三次；分別加入8個不同濃度PLGF標準品(濃度分別為2000pg/ml、1000pg/ml、500pg/ml、250pg/ml、125pg/ml、62.5pg/ml、31.25pg/ml、15.625pg/ml)及待測樣品，100μ 1/well，均設(shè)置兩個復(fù)孔，同時設(shè)置兩個空白孔，37°C孵育2h ；(5)PBS_T 洗板三次；分別加入 Detection Antibody, I μ g/ml, 100 μ本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種胎兒9號染色體異常疾病的篩查試劑盒，其特征在于：它包括檢測孕婦血清或尿液PLGF水平的試劑。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陸華，高小平，劉小章，
申請(專利權(quán))人：成都中醫(yī)藥大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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