一種制備谷氨酸脫羧酶的方法技術

本發明專利技術涉及一種制備谷氨酸脫羧酶的方法，步驟如下：（1）含谷氨酸脫羧酶的微生物細胞培養、離心收集細胞、細胞破碎，調細胞破碎液的pH值和離子強度；（2）配制反膠團萃取體系溶液和反萃取水相溶液；（3）利用反膠團進行萃取；（4）進行反萃取，得到含谷氨酸脫羧酶的水溶液；（5）超濾膜過濾濃縮，截留液冷凍干燥，制得谷氨酸脫羧酶產品。本發明專利技術可實現谷氨酸脫羧酶制備的連續化、規模化，并且酶的制備工藝簡便，生產周期短，酶活力回收率高，萃取劑可循環使用，谷氨酸脫羧酶的生產成本較低。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種利用反膠團萃取體系制備谷氨酸脫羧酶的方法，步驟如下：（1）將含谷氨酸脫羧酶的微生物細胞進行培養，得細胞培養液，離心，制得濕菌體細胞，將濕菌體細胞重懸于去離子水中，制得細胞懸浮液，破碎細胞，得到細胞破碎液；調細胞破碎液的pH值為5.5～7.0，然后加入無機鹽調節溶液的離子強度為0.10～0.20mol/L，制得含有谷氨酸脫羧酶的細胞破碎溶液；（2）將助溶劑加入到有機溶劑中，助溶劑與有機溶劑的體積比為1:（4～10），搖勻，再加入表面活性劑，使表面活性劑在有機溶液中的濃度為100～250mmol/L，混合均勻，制得反膠團體系溶液；將緩沖劑加入到去離子水中配制0.10～0.20mol/L的緩沖溶液，再將反萃取助劑加入到緩沖溶液中，使反萃取助劑在緩沖溶液中的質量濃度為5～30wt%，搖勻，然后加入無機鹽調節溶液的離子強度為1.0～2.0mol/L，制得反萃取水相溶液；（3）將步驟（1）制得的含有谷氨酸脫羧酶的細胞破碎溶液加入到步驟（2）制得的反膠團體系溶液中，反膠團體系溶液與細胞破碎溶液的體積比為1:（1～10），混合均勻，萃取操作溫度為10～25℃，離心分相，取有機相，制得含有谷氨酸脫羧酶的反膠團有機溶液；（4）向步驟（3）制得的含有谷氨酸脫羧酶的反膠團有機溶液中加入步驟（2）制得的反萃取水相溶液，反萃取水相溶液與含有谷氨酸脫羧酶的反膠團有機溶液的體積比為1:（1～10），混合均勻，反萃取操作溫度為30～40℃，離心分相，制得含有谷氨酸脫羧酶的水溶液；（5）將步驟（4）制得的含有谷氨酸脫羧酶的水溶液用超濾膜過濾濃縮，收集截留液，冷凍干燥，制得谷氨酸脫羧酶。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：董永勝，
申請(專利權)人：齊魯工業大學，
類型：發明
國別省市：