牛布魯氏菌間接ELISA檢測試劑盒制造技術

本發明專利技術公開了一種牛布魯氏菌間接ELISA檢測試劑盒，由以下試劑構成：（1）預包被ELISA反應板，由包被液、包被抗原和封閉液構成，包被抗原為Virb8蛋白；（2）PBST洗滌液；（3）酶標二抗；（4）終止液；（5）顯色液。本發明專利技術涉及的Virb8蛋白僅在布魯氏菌感染的早期特異性表達，該蛋白對應產生的抗體處于感染早期，且產生的抗體存在時間較長，因此，克隆表達布魯氏菌Virb8蛋白并建立相應的間接ELISA檢測方法能夠更特異、靈敏地判斷是否存在布魯氏菌感染和定量感染后引起的抗體滴度，可以為布魯氏菌病的血清學早期診斷提供一種快速準確的方法，對解決大批量樣品的布魯氏菌現場檢測技術具有重要的現實意義。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種牛布魯氏菌間接ELISA檢測試劑盒，其特征在于：由以下試劑構成：（1）預包被ELISA反應板：數量為5塊，由包被液、包被抗原和封閉液構成，其中，包被液中，Na2CO3的濃度為1.59g/L，2.93g?NaHCO3的濃度為2.93g/L；包被抗原為Virb8蛋白，工作濃度為1.16μg/mL，工作條件為4℃包被過夜；封閉液為10%馬血清；（2）25倍PBST洗滌液：體積為60ml，體積為1L的25倍PBST洗滌液制備方法為：將準確稱量的200g?NaCl、5.0g?KCl、35.5g?Na2HPO4和6.75g?KH2PO4充分溶解在800mL去離子水中，然后將pH值調節到7.4，然后加去離子水定容至1L，再加入500μL?Tween?20，即得；（3）酶標二抗：體積為60μl，辣根過氧化物酶HRP標記兔抗牛IgG，工作濃度為1:1000，工作條件為：37℃孵育60min；（4）終止液：體積為60ml，2mol/L的硫酸溶液；（5）顯色液：體積為60ml的TMB顯色液。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：楊宏軍，張亮，丁家波，孫濤，張劍，何洪彬，
申請(專利權)人：山東省農業科學院奶牛研究中心，
類型：發明
國別省市：