免疫球蛋白結合性新型多肽制造技術

本發明專利技術提供一種新型多肽，其對免疫球蛋白顯示結合性，且對堿穩定性優異。本發明專利技術涉及包含序列編號1或2中記載的氨基酸序列的蛋白質。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】【專利摘要】本專利技術提供一種新型多肽，其對免疫球蛋白顯示結合性，且對堿穩定性優異。本專利技術涉及包含序列編號1或2中記載的氨基酸序列的蛋白質。【專利說明】免疫球蛋白結合性新型多肽技術區域本專利技術涉及新型多肽，其對免疫球蛋白顯示結合性，且化學穩定性優異。
技術介紹
抗體具有與被稱為抗原的物質進行特異性結合的機能，及具有與其他生物體分子、細胞進行協同作用，將具有抗原的因子進行無毒化?除去的機能。所謂抗體，其為重視與所述抗原進行結合的這種機能而命名的名稱，作為物質被稱為“免疫球蛋白”。與抗體中的恒定區(抗原結合部位以外)進行特異性結合的物質(配體)可以用于抗體的精制、檢測，通過與恒定區進行結合也會擴大其適應范圍，因此具有充分的產業化價值。作為代表性的與抗體中的恒定區進行特異性結合的配體，可以舉例蛋白A、蛋白G。隨著抗體藥物、檢查診斷等抗體關聯產業的發展，對這些配體的化學穩定性的要求方面有所增加。特別是為了病毒等的失活，或者為了清洗固定化有配體的擔體(珠、芯片(Beads, chip)等)而使用堿，因此對于對堿具有高穩定性的配體的需求非常多。由于多肽型配體一般對堿的穩定性弱，因此一直在積極研究既能產生極為優異的結合特異性，同時又提高對堿的耐性的技術(非專利文獻1、2)。作為提高與抗體進行結合的配體的堿耐性的技術，可以列舉通過將蛋白A的29位的Gly進行變異而 賦予堿耐性的技術(專利文獻1、2)，通過將Asn取代為其他的氨基酸而賦予堿耐性的技術(專利文獻3、4)，利用蛋白A的C結構域或者其變異體的技術(專利文獻5、6)。現有技術文獻專利文獻:專利文獻1:特開昭62-190087號公報專利文獻2:國際公開第2010/110288號手冊專利文獻3:特表2002-527107號公報專利文獻4:特表2005-538693號公報專利文獻5:特開2006-304633號公報專利文獻6:特表2010-504754號公報非專利文獻:非專利文獻1:Linhult M?等著，"PROTEINS:Structure, Function, andBioinformatics〃2004 年，第 55 卷，407-416 頁非專利文獻2:Palmer B.等著，"Journal of Biotechnology", 2008 年，第 134卷，222-230 頁
技術實現思路
專利技術要解決的問題本專利技術的目的是提供新型多肽，其對免疫球蛋白顯示結合性，且對堿的穩定性優解決問題的方法本專利技術人等為了解決上述問題進行了深入研究，通過運用計算化學的手法和蛋白質工程學的手法，專利技術了與目前為止的技術開發中所得到的多肽的序列不同、且顯示了更優異的堿耐性的新型多肽，從而完成了本專利技術。S卩，本專利技術涉及多肽，其含有以下氨基酸序列:Rfx1X2EqqnafyE i lhx3pnlteeqrnx4f i Qx5Lx6X7X8PsvsreX9LaeaX10X1: Lndaqapx12(所述氨基酸序列中:X1=D, E, N,或 QX2=E,或，RX3=L, M,或 IX4=A, E，F，R，Y，或 WX5=D, E，H，I，L，Q，R，S，T，或 VX6=H, I，或 RX7=D, I,或 RX8=D,或 EX9=I, L,或 VX10=R,或 QX11=H,或 RX12=R, G,或 K)且能與含有免疫球蛋白的Fe區域的蛋白質結合。另外，本專利技術還涉及多肽，其含有以下氨基酸序列:Z1Z2Z3Rfx1X2Eqqnafyeilhx3Pnlteeqrnx4Fiqx5Lx6X7X8Psvsrex9Laeax10X11LndaqaPX12(所述氨基酸序列中，X1=D, E, N,或 QX2=E,或，RX3=L, M,或 IX4=A, E，F，R，Y，或 WX5=D, E，H，I，L，Q，R，S，T，或 VX6=H, I，或 RX7=D, I，或 RX8=D,或 EX9=I, L,或 VX10=R,或 QX11=H,或 RX12=R, G,或 KZ1 ?Z3=A, D, E, G, H, I, L, N，Q, R, S, T, V,或 Y)且能與含有免疫球蛋白的Fe區域的蛋白質結合。所述多肽優選為與以下氨基酸序列的序列同一性為90%以上:ADNRFNREQQNAFYEILHLPNLTEEQRNAFIQSLRDDPSVSREILAEARRLNDAQAPG (序列編號1)、或ADNRFNREQQNAFYEILHLPNLTEEQRNAFIQSLRDDPSVSREILAEARRLNDAQAPG (序列編號2)。專利技術的效果本專利技術的多肽具有特別是對堿穩定性優異的特征。即使在極為苛酷的堿性條件下，例如在0.1?1.0M氫氧化鈉(NaOH)中，在室溫下暴露數小時，也幾乎不會失去其與免疫球蛋白的結合性。雖然已知有許多保留有與免疫球蛋白的結合性，且堿耐性優異的蛋白A變異體，但是本專利技術提供堿耐性顯示比上述蛋白A變異體顯著提高的新型肽。例如，在用于蛋白質的確認的SDS-PAGE中，在堿條件下長時間暴露了的蛋白質，在一般情況下受到強烈的切斷、修飾，難以維持堿處理前的條帶的狀態(濃度、位置和條數)。但是，本專利技術中所得到的新型肽，即使在嚴酷的堿性條件下進行暴露后，也可以維持處理前的條帶的狀態，其可以承受的條件可以比公知的堿耐性蛋白A變異體更嚴酷。附圖的簡單說明顯示實施例3和比較例I的結果。其為堿處理(0、4、8和24小時)后，序列編號13?15的多肽的SDS-PAGE圖。顯示實施例5和比較例2的結果。其為堿處理(0、4和24小時)后，序列編號38?46的多肽的SDS-PA GE圖。專利技術的實施方式在本說明書中，所謂“多肽”的用語，包含具有多肽結構的一切分子。由于本專利技術的多肽約由50個氨基酸組成，一般情況下，也可以被稱為“蛋白質”或者“(蛋白質的)結構域(Domain)”，基本上不與“多肽”進行區別。就“含有免疫球蛋白的Fe區域的蛋白質”而言，其為包含免疫球蛋白分子、免疫球蛋白片段、和免疫球蛋白衍生物的表述。所謂“免疫球蛋白G衍生物”，其為對下列改變型人工蛋白質的總稱:例如，將人免疫球蛋白G的一部分結構域替換為其他生物種類的免疫球蛋白G的結構域并使其融合的嵌合型免疫球蛋白G、將人免疫球蛋白G的CDR(互不決定區，Complementarity Determining Regions)部分置換為其他生物種類抗體的⑶R部分并使其融合的人型化免疫球蛋白G、在Fe區域的糖鏈中加入了分子修飾的免疫球蛋白G、使人免疫球蛋白G的Fv區域與Fe區域進行了融合的人工免疫球蛋白G等。另外，在保持了 Fe區域的立體結構的基礎上，可以進一步實施修飾(片段化等)。因此，本專利技術中的“含有免疫球蛋白的Fe區域的蛋白質”，并不限定于將一般情況下被稱為Fe區域的區域沒有不足地全部包含在內的免疫球蛋白分子、及其衍生物。本專利技術的新型多肽具有如下特征:含有以下氨基酸序列，能與包含免疫球蛋白的Fe區域的蛋白質結合。Rfx1X2EqqnafyE i lhx3pnlteeqrnx4f i Qx5Lx6X7X8PsvsreX9LaeaX10X1: Lndaqapx12X1=D, E, N,或 QX2=E,或，RX3=L, M,或 IX4=A, E，F，R，本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...

【專利技術屬性】
技術研發人員：吉田慎一，村田大，平良俊一，
申請(專利權)人：株式會社鐘化，
類型：
國別省市：