白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法、白細(xì)胞分類試劑盒及白細(xì)胞分類試劑技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供可分類計(jì)數(shù)正常白細(xì)胞，并且能進(jìn)行母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞的判別的白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法。白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法包括，將活體樣品，染色核酸的第1試劑，用于使紅細(xì)胞溶血，給白細(xì)胞的細(xì)胞膜造成能透過熒光染料的程度的損傷的陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑，以及，含有20mM以上50mM以下的濃度的芳香族的有機(jī)酸的第2試劑混合而制備測(cè)定樣品的步驟；通過給測(cè)定樣品照射光取得發(fā)生的散射光信息及熒光信息的步驟；基于取得到的散射光信息及熒光信息，分類活體樣品中的白細(xì)胞，區(qū)別檢測(cè)母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞的步驟；其中，當(dāng)?shù)?試劑中的芳香族的有機(jī)酸的濃度是20mM以上、不足30mM時(shí)，第2試劑的pH是5.5以上6.4以下，當(dāng)是30mM以上50mM以下時(shí)，pH是5.5以上7.0以下。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來華專利技術(shù)】【專利摘要】本專利技術(shù)提供可分類計(jì)數(shù)正常白細(xì)胞，并且能進(jìn)行母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞的判別的白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法。白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法包括，將活體樣品，染色核酸的第1試劑，用于使紅細(xì)胞溶血，給白細(xì)胞的細(xì)胞膜造成能透過熒光染料的程度的損傷的陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑，以及，含有20mM以上50mM以下的濃度的芳香族的有機(jī)酸的第2試劑混合而制備測(cè)定樣品的步驟；通過給測(cè)定樣品照射光取得發(fā)生的散射光信息及熒光信息的步驟；基于取得到的散射光信息及熒光信息，分類活體樣品中的白細(xì)胞，區(qū)別檢測(cè)母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞的步驟；其中，當(dāng)?shù)?試劑中的芳香族的有機(jī)酸的濃度是20mM以上、不足30mM時(shí)，第2試劑的pH是5.5以上6.4以下，當(dāng)是30mM以上50mM以下時(shí)，pH是5.5以上7.0以下。【專利說明】白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法、白細(xì)胞分類試劑盒及白細(xì)胞分類試劑【
】本專利技術(shù)涉及分類計(jì)數(shù)活體樣品中的白細(xì)胞的方法。本專利技術(shù)還步及用于分類計(jì)數(shù)活體樣品中的白細(xì)胞的白細(xì)胞分類試劑盒及白細(xì)胞分類試劑?！?br>技術(shù)介紹
】正常的白細(xì)胞通常被分類為淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞、嗜中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞及嗜堿性粒細(xì)胞的5種。在正常的末梢血中，這些的血細(xì)胞各自以一定的比例存在。但是，當(dāng)受試者存在疾病時(shí)，特定的血細(xì)胞數(shù)增加或減少。所以，在臨床檢查的領(lǐng)域，通過進(jìn)行白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)，可得對(duì)疾病的診斷極其有用的信息。在造血器腫瘤、病毒感染癥等的疾病中，出現(xiàn)在正常的末梢血液中不存在的細(xì)胞。例如，在急性的白血病中，在末梢血液中出現(xiàn)作為未成熟的白細(xì)胞的“母細(xì)胞(成髓細(xì)胞:myeloblast、成淋巴細(xì)胞:lymphoblast)”。另一方面，在病毒感染癥、藥物過敏等中，由抗原刺激而在末梢血液中出現(xiàn)作為活化的淋巴細(xì)胞的〃非典型淋巴細(xì)胞(atypicallymphocyte) 〃。從末梢血液中區(qū)別檢測(cè)非典型淋巴細(xì)胞和母細(xì)胞，在進(jìn)行疾病的篩選或診斷中極其有用。近年、市售應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)的原理的各種的自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)裝置。由那樣的裝置，可自動(dòng)進(jìn)行樣品中的血細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)。另外，用于由自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)裝置的測(cè)定的血細(xì)胞分類試劑也有市售。使用這樣的試劑用自動(dòng)血細(xì)胞計(jì)數(shù)裝置測(cè)定待測(cè)樣品，在各自散點(diǎn)圖上的指定的區(qū)域出現(xiàn)檢測(cè)的各血細(xì)胞的信號(hào)。 所述技術(shù)中多少知道如上述一樣的血細(xì)胞分類試劑。例如，在專利文獻(xiàn)I中記載了可分類計(jì)數(shù)異常白細(xì)胞和正常白細(xì)胞的兩方的方法。在該方法中，使用將特異性地染色RNA的染色液，和含陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑的溶血?jiǎng)┙M合而成的試劑盒。另外，在專利文獻(xiàn)2記載了分類計(jì)數(shù)正常白細(xì)胞，并且檢測(cè)異常白細(xì)胞的方法。在該方法中，使用包含含有指定的熒光染料的染色液，和含陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑的溶血?jiǎng)┑脑噭！粳F(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)】【專利文獻(xiàn)】專利文獻(xiàn)1:專利第4248017號(hào)公報(bào)專利文獻(xiàn)2:美國(guó)專利申請(qǐng)第2009/0023129號(hào)【
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
】【專利技術(shù)要解決的技術(shù)課題】如上所述，在從受試者得到的待測(cè)樣品中，有除了正常白細(xì)胞之外，還包含母細(xì)胞及非典型淋巴細(xì)胞等異常白細(xì)胞的情況。但是，在使用專利文獻(xiàn)I及專利文獻(xiàn)2的試劑的方法中，作為異常白細(xì)胞的母細(xì)胞及非典型淋巴細(xì)胞的信號(hào)均出現(xiàn)在散點(diǎn)圖上的大致相同的區(qū)域，所以有難以區(qū)別檢測(cè)母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞的情況。本專利技術(shù)以提供可分類計(jì)數(shù)正常白細(xì)胞，并且能區(qū)別檢測(cè)母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞的白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法作為目的。本專利技術(shù)另外，以提供可分類計(jì)數(shù)正常白細(xì)胞，并且能區(qū)別檢測(cè)母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞的白細(xì)胞分類試劑盒及白細(xì)胞分類試劑作為目的?！窘鉀Q課題的技術(shù)方案】在由使用以往的白細(xì)胞分類試劑的流式細(xì)胞儀的測(cè)定中，母細(xì)胞及非典型淋巴細(xì)胞的信號(hào)在散點(diǎn)圖上出現(xiàn)在出現(xiàn)正常淋巴細(xì)胞及正常單核細(xì)胞的信號(hào)的區(qū)域的近邊或與該區(qū)域重復(fù)的區(qū)域。本專利技術(shù)人考慮了，是否通過將出現(xiàn)正常淋巴細(xì)胞的信號(hào)的區(qū)域和出現(xiàn)正常單核細(xì)胞的信號(hào)的區(qū)域隔開，可分離異常白細(xì)胞的信號(hào)和正常白細(xì)胞的信號(hào)，從而可提高異常白細(xì)胞的檢測(cè)靈敏度。從而，本專利技術(shù)人對(duì)于能隔開出現(xiàn)正常淋巴細(xì)胞的信號(hào)的區(qū)域和出現(xiàn)正常單核細(xì)胞的信號(hào)的區(qū)域的白細(xì)胞分類方法進(jìn)行檢查。結(jié)果，令人驚訝地發(fā)現(xiàn)，通過使芳香族的有機(jī)酸的濃度和試劑的PH成為指定的組合，能提高異常白細(xì)胞的檢測(cè)精度，區(qū)別檢測(cè)母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞，從而完成本專利技術(shù)。即，本專利技術(shù)提供白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法，其包括:將活體樣品，染色核酸的第I試劑，用于使紅細(xì)胞溶血，給白細(xì)胞的細(xì)胞膜造成能透過上述熒光染料的程度的損傷的陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑，以及含有20mM以上50mM以下的濃度的芳香族的有機(jī)酸的第2試劑混合而制備測(cè)定樣品的步驟；向制備的測(cè)定樣品照射光，取得這時(shí)發(fā)生的散射光信息及熒光信息的步驟；及基于取得到的散射光信息及熒光信息，將上述活體樣品中的白細(xì)胞分類，同時(shí)區(qū)別檢測(cè)母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞的步驟；其中，當(dāng)上述第2試劑中的芳香族的有機(jī)酸的濃度是20mM以上、不足30mM時(shí)，上述第2試劑的pH是5.5以上6.4以下，當(dāng)上述第2試劑中的芳香族的有機(jī)酸的濃度是30mM以上50mM以下時(shí)，上述第2試劑的pH是5.5以上7.0以下。本專利技術(shù)另外提供白細(xì)胞分類試劑盒，其包含:含有能染色核酸的熒光染料的第I試劑，用于使紅細(xì)胞溶血，給白細(xì)胞的細(xì)胞膜造成能透過上述的熒光染料的程度的損傷的陽離子性表面活性劑及非離子性表面活性劑，以及含有20mM以上50mM以下的濃度的芳香族的有機(jī)酸的第2試劑，其中當(dāng)該第2試劑中的芳香族的有機(jī)酸的濃度是20mM以上、不足30mM時(shí)，該第2試劑的pH是5.5以上6.4以下，當(dāng)該第2試劑中的芳香族的有機(jī)酸的濃度是30mM以上50mM以下時(shí)，該第2試劑的pH是5.5以上7.0以下。本專利技術(shù)再提供白細(xì)胞分類試劑，其特征在于為含能染色核酸的熒光染料，陽離子性表面活性劑，非離子性表面活性劑，和芳香族的有機(jī)酸的白細(xì)胞分類試劑，當(dāng)試劑中含的芳香族的有機(jī)酸的濃度是20mM以上50mM以下，芳香族的有機(jī)酸的濃度是20mM以上、不足30mM時(shí)，pH是5.5以上6.4以下，當(dāng)芳香族的有機(jī)酸的濃度是30mM以上50mM以下時(shí)，pH是5.5以上7.0以下。【專利技術(shù)效果】由本專利技術(shù)的白細(xì)胞的分類計(jì)數(shù)方法、白細(xì)胞分類試劑盒及白細(xì)胞分類試劑，可分類計(jì)數(shù)正常白細(xì)胞，并且可區(qū)別檢測(cè)母細(xì)胞和非典型淋巴細(xì)胞?！尽緦＠綀D】【附圖說明】】【圖1】是使用本專利技術(shù)的白細(xì)胞分類試劑盒測(cè)定正常的血液待測(cè)樣品時(shí)的散點(diǎn)圖及其模式圖。【圖2】是使用實(shí)施例2的各試劑測(cè)定含形態(tài)異常的淋巴細(xì)胞的血液待測(cè)樣品時(shí)的散點(diǎn)圖?！緢D3】是使用實(shí)施例3的各試劑測(cè)定含異常白細(xì)胞的血液待測(cè)樣品時(shí)的散點(diǎn)圖。【圖4】是使用實(shí)施例3的各試劑測(cè)定含異常白細(xì)胞的血液待測(cè)樣品時(shí)的散點(diǎn)圖?！緢D5】是使用實(shí)施例4的各試劑測(cè)定含異常白細(xì)胞的血液待測(cè)樣品時(shí)的散點(diǎn)圖?！緢D6】是使用實(shí)施例5的各試劑測(cè)定正常的血液待測(cè)樣品時(shí)的散點(diǎn)圖?！緦?shí)施方式】在本專利技術(shù)的實(shí)施方式中，活體樣品只要是含白細(xì)胞的體液樣品，就不特別限定。作為活體樣品，可舉出例如，由從哺乳動(dòng)物、優(yōu)選為人采集的血液、骨髓液、尿、及，成分輸血等采集的樣品等。另外，活體樣品是有含異常白細(xì)胞的可能性的樣品也可。在本專利技術(shù)中，白細(xì)胞包括正常的白細(xì)胞和異常白細(xì)胞。正常的白細(xì)胞，通常被分本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：大塚佐緒里，八町和樹，水上利洋，小國(guó)振一郎，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：希森美康株式會(huì)社，
類型：
國(guó)別省市：