本發明專利技術屬于植物生物技術領域。本發明專利技術具體地公開了一種提高紫錐菊外植體再生不定芽的再生培養基及培養方法。所述再生培養基是根據不同倍性和不同來源的紫錐菊外植體對己酸二乙氨基乙醇酯（DA-6）的敏感性的不同，在MS配方中除了添加15～60g/L蔗糖、3～9g/L瓊脂、0.1～1.5mg/LBA和0.01～0.2mg/LNAA之外，還特別地添加相應濃度的DA-6。所述再生培養基通過添加DA-6促使BA誘導不定芽再生的效果得到顯著增強。本發明專利技術可有效克服紫錐菊再生培養中不同基因型限制問題，大幅提高不定芽再生效率，促進紫錐菊生物技術育種相關科研工作的開展。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術屬于植物生物
。本專利技術具體地公開了。所述再生培養基是根據不同倍性和不同來源的紫錐菊外植體對己酸二乙氨基乙醇酯（DA-6）的敏感性的不同，在MS配方中除了添加15～60g/L蔗糖、3～9g/L瓊脂、0.1～1.5mg/LBA和0.01～0.2mg/LNAA之外，還特別地添加相應濃度的DA-6。所述再生培養基通過添加DA-6促使BA誘導不定芽再生的效果得到顯著增強。本專利技術可有效克服紫錐菊再生培養中不同基因型限制問題，大幅提高不定芽再生效率，促進紫錐菊生物技術育種相關科研工作的開展。【專利說明】
本專利技術涉及植物生物
，具體地，涉及。
技術介紹
紫錐菊{Echinacea purpurea L.)為菊科多年生草本植物,具有良好的免疫調節作用，其提取物是近年來在國際上受到普遍重視的一種免疫促進劑和免疫調節劑。由于其確切的功效作用，紫錐菊已經成為一種世界著名的藥用植物。人們為了獲得多種品種的紫錐菊，已經嘗試將多種生物技術手段應用于其上，如轉基因、花藥培養、染色體加倍。這些目的的達成，都必須經過一個共同的步驟，即誘導培養物，產生不定芽。雖然現有技術中已有很多研究針對紫錐菊不定芽再生而展開，但其再生效率并不理想。現有技術中，在紫錐菊外植體誘導不定芽再生時，通常采用是含有15~60 g/L蔗糖，0.1~1.5 mg/L BA及O~0.15 mg/L NAA,以3~9 g/L瓊脂固化的MS培養基，在這種再生培養基的培養條件下，不同基因型紫錐菊外植體的不定芽再生效率差異很大，除了部分基因型能夠獲得較合適再生效率外，其余大量基因型的再生效率很低，芽體的質量也較差，嚴重制約了紫錐菊轉基因、花藥培養、染色體加倍等植物生物技術研究的開展，限制了紫錐菊生物技術育種工作的進行。己酸二乙氨基乙醇酯(DA-6)是一種植物生長調節劑，通常用于田間栽培，很少用于組織培養。而且還沒有人嘗試將其用于紫錐菊組織栽培方面。
技術實現思路
本專利技術為了克服現有技術中紫錐菊外植體再生不定芽時再生率低、再生芽體質量差的缺陷，提供一種提高紫錐菊外植體再生不定芽的再生培養基。本專利技術的另一個目的是提供一種提高紫錐菊外植體再生不定芽的方法。本專利技術通過以下技術方案予以實現上述目的: 一種提高紫錐菊外植體再生不定芽的再生培養基，其特征在于，紫錐菊外植體所需的再生培養基是在MS培養基的中除了添加15~60 g/L蔗糖、3~9 g/L瓊脂、0.1~1.5 mg/L BA和0.01~0.15 mg/L的NAA之外，還特別地添加了己酸二乙氨基乙醇酯(DA-6)。所述紫錐菊外植體根據倍性和來源的不同分為二倍體、三倍體、四倍體或六倍體紫錐菊葉片、葉柄或根外植體。二倍體或三倍體紫錐菊葉片外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01~0.32 mg/L ;四倍體或六倍體紫錐菊葉片外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為 0.01 ~0.16 mg/L ；二倍體或三倍體紫錐菊葉柄外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01~0.16 mg/L ;四倍體紫錐菊葉柄外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01 mg/L ；六倍體紫錐菊葉柄外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.08~0.16 mg/L ；二倍體或三倍體紫錐菊根外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01 mg/L ；四倍體紫錐菊根外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01~0.16 mg/L0優選的，所述二倍體或三倍體紫錐菊葉片外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.08~0.16 mg/L ;更優選地，所述二倍體或三倍體紫錐菊葉片外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.16 mg/L。所述四倍體或六倍體紫錐菊葉片外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.08~0.16 mg/L，更優選地，四倍體或六倍體紫錐菊葉片外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.08 mg/L0優選的，所述二倍體或三倍體紫錐菊葉柄外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01~0.08 mg/L ;更優選地，所述二倍體紫錐菊葉柄外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.08 mg/L ;所述三倍體紫錐菊葉柄外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01 mg/L。優選地，所述六倍體紫錐菊葉柄外植體所需的再生培養基中添加的 DA-6 的量為 0.16 mg/L。 優選地,所述四倍體紫錐菊根外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01~0.08mg/L ;更優選地，所述四倍體紫錐菊根外植體所需的再生培養基中添加的DA-6的量為0.01 mg/Lo一種提高紫錐菊外植體再生不定芽的培養方法，根據如上所述不同倍性和來源的紫錐菊外植體所需的再生培養基的組分的需要，將不同類型的紫錐菊外植體接種在各自適宜的再生培養基中，在培養溫度為25±4 °C，光照強度為1000~2500 lx，光照時間為10~16 h/d,的條件下培養18~60 d0所述接種的方式為橫放方式，即使葉柄外植體的橫切面與培養基的水平表面相垂直。`己酸二乙氨基乙醇酯(DA-6)是一種植物生長調節劑，通常用于田間栽培，很少用于組織培養。而且還沒有人嘗試將其用于紫錐菊組織栽培方面。專利技術人對某些特殊種質材料(各種不同倍性的紫錐菊)進行微繁殖時，發現培養物對DA-6的加入非常敏感，而且在某些濃度下，不定芽的再生效率顯著提升了。所以本專利技術主要研究了 DA-6對紫錐菊不定芽再生的影響相關實驗。本專利技術考察了在培養基中加入己酸二乙氨基乙醇酯(DA-6)對紫錐菊外植體不定芽再生的影響。本專利技術使用了 3種來源的外植體:葉片、葉柄和根外植體。其中葉片外植體所需最佳DA-6濃度最高。根外植體需要的濃度最低。在四種不同倍性的外植體上進行試驗，高倍性的外植體對DA-6更敏感:低倍性的外植體需要的DA-6濃度更高一點。對低倍性的外植體適合的DA-6濃度，可能會抑制高倍性外植體產生不定芽。本專利技術的結果顯示，恰當使用DA-6，紫錐菊不同外植體的不定芽的再生可以顯著提升。本專利技術的有益效果:本專利技術解決了通常紫錐菊不定芽再生培養中再生效率不高和再生芽質量不夠好的突出問題，對于紫錐菊的生物技術研究特別是對于不能夠產生種子但具有更高種植價值的三、四、六倍體的種苗克隆具有重要的可直接應用的價值。說明書附圖 圖1.不同DA-6濃度對二倍體外植體再生不定芽的影響；1~5分別是用0、0.01、0.08、0.16,0.32 mg/L的DA-6處理的二倍體葉片外植體；6~10分別是用0、0.01,0.08,0.16、0.32 mg/L的DA-6處理的二倍體葉柄外植體；11~15分別是用0、0.01,0.08,0.16,0.32mg/L的DA-6處理的二倍體根外植體。圖2.不同DA-6濃度對三倍體外植體再生不定芽的影響；1~5分別是用0、0.01、0.08,0.16,0.32 mg/L的DA-6處理的三倍體葉片外植體；6~10分別是用0、0.01,0.08、0.16,0.32 mg/L的DA-6處理的三倍體葉柄外植體;11~15分別是用0,0.01,0.08,0.16、0.32 mg本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種高效的紫錐菊不定芽再生再生培養基，其特征在于，在MS配方的基礎上除了添加15～60?g/L蔗糖、3～9?g/L瓊脂、0.1～1.5?mg/L?BA和0.01～0.2?mg/L?NAA之外，還特別地添加了己酸二乙氨基乙醇酯，即DA?6。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：陳曉鷺，楊躍生，吳鴻，李棟梁，
申請(專利權)人：華南農業大學，
類型：發明
國別省市：
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