本發(fā)明專(zhuān)利技術(shù)涉及醫(yī)藥和生物技術(shù)領(lǐng)域，具體為miR-375的應(yīng)用。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究miR-375對(duì)腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的影響。在人H295R細(xì)胞系上以瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方式使miR-375過(guò)表達(dá)，結(jié)果顯示，miR-375過(guò)表達(dá)可抑制腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系H295R增殖。因此，miR-375對(duì)于腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞的增殖有調(diào)控作用，可用于制備篩選腎上腺皮質(zhì)癌或腎上腺腫瘤的藥物。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【專(zhuān)利摘要】本專(zhuān)利技術(shù)涉及醫(yī)藥和生物
，具體為miR-375的應(yīng)用。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究miR-375對(duì)腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的影響。在人H295R細(xì)胞系上以瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方式使miR-375過(guò)表達(dá)，結(jié)果顯示，miR-375過(guò)表達(dá)可抑制腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系H295R增殖。因此，miR-375對(duì)于腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞的增殖有調(diào)控作用，可用于制備篩選腎上腺皮質(zhì)癌或腎上腺腫瘤的藥物。【專(zhuān)利說(shuō)明】miR-375的應(yīng)用
本專(zhuān)利技術(shù)涉及醫(yī)藥和生物
，具體為用miRNA制備和篩選治療腎上腺腫瘤的藥物及診斷試劑。
技術(shù)介紹
近年來(lái)，隨著表觀遺傳學(xué)的興起，越來(lái)越多的研究開(kāi)始關(guān)注非編碼核糖核酸(noncoding RNA, ncRNA),其中的microRNA (miRNA)更成為發(fā)育、代謝、腫瘤等各個(gè)領(lǐng)域的新興研究熱點(diǎn)。microRNAs (miRNAs)是一類(lèi)長(zhǎng)約19-25個(gè)核苷酸大小的在進(jìn)化上非常保守的內(nèi)源性非編碼RNA，通過(guò)轉(zhuǎn)錄后調(diào)控對(duì)靶基因的表達(dá)水平產(chǎn)生影響；micr0RNAS在動(dòng)植物和微生物中廣泛存在，由DNA經(jīng)RNA聚合酶II或III轉(zhuǎn)錄生成前體miRNA(pr1-miRNA)，之后pr1-miRNA被Drosha酶切割形成長(zhǎng)度大約70-100堿基的、具發(fā)夾結(jié)構(gòu)的pre_miRNA。這些發(fā)夾結(jié)構(gòu)的RNA被核輸出蛋白exportin5轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì),再被胞衆(zhòng)中的Dicer酶切割形成成熟的miRNAs產(chǎn)物，同Ago2、TRBP等蛋白一起形成RNA誘導(dǎo)的沉默復(fù)合體(RNA-1nducedsilencing complex, RISC)。它們通過(guò)同祀基因 mRNA 的 3’ 端非翻譯區(qū)(3，untranslatedregion, 3’ UTR)的堿基完全或不完全配對(duì)，引起靶基因mRNA的降解和/或抑制該mRNA的翻譯，從而直接抑制蛋白質(zhì)的表達(dá)。近幾年來(lái)通過(guò)高通量測(cè)序等研究方法，已發(fā)現(xiàn)了上千種可編碼miRNA的基因，而超過(guò)30%的編碼蛋白質(zhì)基因受到這些miRNA的調(diào)控。自2002年Calin等人首次報(bào)道了在慢性淋巴細(xì)胞白血病中存在miR-15及miR-16的表達(dá)缺失及下調(diào)，miRNA在腫瘤發(fā)生、發(fā)展中的作用及對(duì)腫瘤治療療效、預(yù)后判斷的影響逐漸為人們所認(rèn)識(shí)。現(xiàn)已有大量文獻(xiàn)報(bào)道了在乳腺癌、胃癌、肺癌、前列腺癌、肝癌等多種腫瘤性疾病中miRNA表達(dá)的異常及其調(diào)控機(jī)制，其或扮演了原癌基因或抑癌基因的角色。而miRNA在內(nèi)分泌相關(guān)代謝和腫瘤發(fā)生過(guò)程中的功能也已成為了研究熱點(diǎn)，如在胰腺癌，甲狀腺、垂體、卵巢腫瘤中均可見(jiàn)miRNAs表達(dá)異常的相關(guān)報(bào)道。在腎上腺疾病中，對(duì)于基因表達(dá)差異及其與疾病和預(yù)后的相關(guān)性`也有一些研究報(bào)道近期有研究報(bào)道了嗜鉻細(xì)胞瘤、庫(kù)欣綜合征、腎上腺皮質(zhì)癌等腎上腺腫瘤組織中miRNA的表達(dá)差異，而對(duì)于原醛癥，尚未見(jiàn)任何報(bào)道研究非編碼RNA的表達(dá)和功能，其中對(duì)于腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞增生的機(jī)制研究更加缺少。相較其他腫瘤的研究情況，這在很大程度上制約了人們對(duì)原醛癥的認(rèn)識(shí)，限制了診斷和治療技術(shù)手段的發(fā)展。越來(lái)越多證據(jù)顯示，miRNA參與了腫瘤生物學(xué)行為的多個(gè)環(huán)節(jié)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專(zhuān)利技術(shù)旨在將miR-375應(yīng)用于制備或篩選治療腎上腺腫瘤的藥物。本專(zhuān)利技術(shù)還將miR-375應(yīng)用于制備或篩選治療腎上腺皮質(zhì)癌的藥物。本專(zhuān)利技術(shù)還將miR-375應(yīng)用于制備或篩選調(diào)控或腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的藥物。通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)研究miRNA-375 (miR-375)對(duì)腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的影響。在人H295R細(xì)胞系上以mimics瞬時(shí)轉(zhuǎn)染，使miR-375過(guò)表達(dá)，利用CCK-8，EDU染色觀察miRNA過(guò)表達(dá)導(dǎo)致的細(xì)胞增殖變化。結(jié)果顯示，miR-375過(guò)表達(dá)可抑制腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞系H295R增殖。因此，miR-375對(duì)于腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞的增殖有調(diào)控作用，可用于制備篩選腎上腺皮質(zhì)癌或腎上腺腫瘤的藥物。本專(zhuān)利技術(shù)確定了 miR-375與腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的關(guān)系，可將miR-375作為篩選的指標(biāo)，通過(guò)檢測(cè)m1-375的表達(dá)水平，來(lái)篩選制備治療腎上腺腫瘤尤其是治療腎上腺皮質(zhì)癌的藥物、或者是調(diào)控腎上腺皮質(zhì)癌細(xì)胞增殖的藥物。【專(zhuān)利附圖】【附圖說(shuō)明】圖1的A-E為實(shí)施例3中，原發(fā)性醛固酮增多癥中腺瘤、結(jié)節(jié)樣增生組織及正常對(duì)照組織中 miRNA-375、miRNA-7、miRNA-29a、miRNA-29b 和 miRNA_29c 的表達(dá)差異。圖2為實(shí)施例5中，在H295R瞬時(shí)轉(zhuǎn)染mimic時(shí)miR-375表達(dá)情況圖3為實(shí)施例5中，在H295R細(xì)胞系中過(guò)量表達(dá)miR-375時(shí)抑制細(xì)胞增殖的結(jié)果，A為CCK8檢測(cè)結(jié)果，B為EDU染色情況。【具體實(shí)施方式】實(shí)施例1確診為原發(fā)性醛固酮增多癥并行手術(shù)治療的患者128例1.篩查對(duì)象選擇標(biāo)準(zhǔn):(I)JNC (Joint National Committee on the Prevention, Evaluation, andTreetment of High BLood Pressu re)高血壓分級(jí) 2 級(jí)(BP > 160 ~179/100 ~109mmHg)、3級(jí)(BP > 180/1IOmmHg)；(2)難治性高血壓(聯(lián)合使用3種降壓藥物治療，其中必須包括利尿劑，且每種降壓藥物均達(dá)常規(guī)治療劑量，血壓仍大于140/90mmHg)；(3)自發(fā)性或利尿劑所致的低鉀血癥；(4)腎上腺意外瘤；(5)早發(fā)性高血壓家族史或早發(fā)(小于40歲)腦血管意外家族史；(6)原醛患者中存在高血壓的一級(jí)親屬。I1.選擇對(duì)象的診斷醛固酮/腎素(ARR):所有研究對(duì)象停用對(duì)RASS系統(tǒng)有影響藥物，包括利尿劑、甘草及其制劑4周以上，停用血管緊張素轉(zhuǎn)換酶抑制劑、血管緊張素受體拮抗劑、二氫吡啶類(lèi)鈣離子拮抗劑、β受體阻滯劑、非留體類(lèi)抗炎藥2周以上，降壓可改用非二氫吡啶類(lèi)鈣離子拮抗劑或α受體阻滯劑控制血壓。清晨起床保持非臥位狀態(tài)2h (可以站立、走動(dòng)、座位)，休息15min后于10: 00前坐位抽取血醛固酮及腎素，并計(jì)算ARR。ARR>300需進(jìn)一步行生理鹽水試驗(yàn)。同時(shí)完善其他激素水平及生化檢測(cè)，包括血、尿電解質(zhì)，同時(shí)完善血ACTH、血皮質(zhì)醇、尿游離皮質(zhì)醇、血漿甲氧基腎上腺素(麗)、血漿甲氧基去甲腎上腺素(NMN)檢測(cè)。確診:參照2008年國(guó)際內(nèi)分泌學(xué)會(huì)發(fā)表的《原發(fā)性醛固酮增多癥診斷及治療指 南》(Case Detection, Diagnosis, and Treatment of Patients with PrimaryAldosteronism:An Endocrine Society Clinical Practice Guideline)推薦的石角診原醒的試驗(yàn)方法，我們采用了其中的生理鹽水抑制試驗(yàn)生理鹽水試驗(yàn):試驗(yàn)前須臥床休息lh，8: OO開(kāi)始，在4h內(nèi)靜脈滴注生理鹽水2000ml (500ml/h，滴速恒定)，在整個(gè)過(guò)程中需要密切監(jiān)測(cè)血壓和心率變化。在靜滴前和靜滴后分別測(cè)定血醛固酮及血鉀。生理鹽水后醛固酮水平>100pg/mL原醒診斷成立。分型診斷(I)腎上腺CT掃描:為定位診斷首選檢查方式，患者常規(guī)行雙側(cè)腎上腺平掃加增強(qiáng)CT掃描，層厚3.75mm。CT掃描可提示腎上腺形態(tài)正常，單側(cè)腎上腺肢增厚，雙側(cè)腎上腺結(jié)節(jié)樣增生，本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
MiR?375用于制備或篩選治療腎上腺腫瘤的藥物。
【技術(shù)特征摘要】
【專(zhuān)利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：寧光，何娟，王衛(wèi)慶，李小英，曹亞南，
申請(qǐng)(專(zhuān)利權(quán))人：上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬瑞金醫(yī)院，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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