觀賞海棠花色苷的測定方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開一種觀賞海棠花色苷的測定方法，屬花卉測定領(lǐng)域。包括：步驟1，將經(jīng)液氮速凍后的觀賞海棠花葉片放入研缽中，加入石英砂和非溶性PVPP，加入液氮研磨成粉末；步驟2，將粉末轉(zhuǎn)入試管中，加入花色苷提取液，之后在45℃超聲提取60min得到提取的花色苷提取液；步驟3，將提取的花色苷提取液純化處理，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min，得上清液裝于安捷倫上樣瓶中用于HPLC檢測；步驟4，上樣，對安捷倫上樣瓶進行HPLC-DAD檢測，檢測后得到觀賞海棠花色苷的測定結(jié)果。該方法提取時間短，不足2h，不會出現(xiàn)將提取液過夜長時間放置影響測定結(jié)果的問題，從上機操作來看，大大節(jié)約了時間以及減少了試劑不必要的浪費。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術(shù)公開一種，屬花卉測定領(lǐng)域。包括：步驟1，將經(jīng)液氮速凍后的觀賞海棠花葉片放入研缽中，加入石英砂和非溶性PVPP，加入液氮研磨成粉末；步驟2，將粉末轉(zhuǎn)入試管中，加入花色苷提取液，之后在45℃超聲提取60min得到提取的花色苷提取液；步驟3，將提取的花色苷提取液純化處理，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min，得上清液裝于安捷倫上樣瓶中用于HPLC檢測；步驟4，上樣，對安捷倫上樣瓶進行HPLC-DAD檢測，檢測后得到觀賞海棠花色苷的測定結(jié)果。該方法提取時間短，不足2h，不會出現(xiàn)將提取液過夜長時間放置影響測定結(jié)果的問題，從上機操作來看，大大節(jié)約了時間以及減少了試劑不必要的浪費。【專利說明】
本專利技術(shù)涉及針對花卉的檢測方法，特別是涉及ー種用于測定觀賞海棠花的色苷的檢測方法。
技術(shù)介紹
花青素是廣泛存在于被子植物中的ー類重要的類黃酮化合物，它是植物花朵，葉片和果實色澤形成的重要的物質(zhì)基礎(chǔ)之一。在自然界中，花青素常與不同種類的糖苷相結(jié)合，以花色苷的形式存在于植物中。關(guān)于植物體內(nèi)成色物質(zhì)的研究開始于19世紀中葉，至今已發(fā)現(xiàn)了很多種色素，但都可以歸成下述三大類色素:類胡蘿卜素(carotenoid)、生物堿類色素(alkaloid)和類黃酮(flavonoid)。類胡蘿卜素是胡蘿卜素(carotenes)和葉黃素(carotol)的統(tǒng)稱，類胡蘿卜素中所含的共軛雙鍵構(gòu)成生色團，表現(xiàn)出黃、橙、紅、紫等彥頁色(參考:Goodwin T ff, Britton C.Dostribution and analysis of carotenoids.1n:Goodwin T W ed.Plant Pigments, 1988，61-132.Academic Press, London.)。生物喊類色素(alkaloid)是含負氧化態(tài)氮原子的環(huán)狀有機物，生物堿色素包括甜菜堿(betaine)、嬰粟堿(papaverine)、小巢堿(berberine)等；嬰粟堿使嬰粟屬(Papaver)和綠絨篙屬(Meconopssi)的花表現(xiàn)黃色；小聚堿即黃連素,使小璧屬(Berberis)的花表現(xiàn)深橙色或黃色。(參考文獻:鄭志亮.1994.花卉作物的花色基因工程.北方園藝，(3)，37 — 38.))類黃酮(flavonoid)是ー類具有黃烷核基本骨架(C6-C3-C6)的低分子量多酚化合物的總稱，是色原酮(011'01110116)或色原燒(0111'01]^116)的衍生物。根據(jù)類黃酮物質(zhì)單體化學(xué)結(jié)構(gòu)可以分為四大類:黃酮(flavone)、黃燒酮(flavanone)、黃酮醇(flavonol)和花色苷(anthocyanin)。其中，花色苷(anthocyanins)是最重要的類黃酮類色素,也是植物呈現(xiàn)紅、粉、紫、藍等不同顔色的主要決定因素。大約88%的被子科植物花的顔色改變是由花色苷所決定的。1978年，隨著Wulf和Nagel第一次使用液相色譜對葡萄品種“赤霞珠”果皮中的花青素種類進行分離和鑒定，開創(chuàng)了花青素色譜研究的新紀元。高效液相色譜法檢測植物中花青素的含量，具有進樣量少，分析效率較高，分析時間短，靈敏度較高，檢測完流出的組分可回收利用等系列有點。近年來，隨著各種不同類型檢測器的進ー步應(yīng)用，植物中各種類黃酮物質(zhì)被成功地鑒定出來(參考文獻:Jia N，Shu QY, Wang LS, et al.2008.Analysisof petal anthocyanins to investigate coloration mechanism in heroaceous peonycultivars.Sc1.Hortic (Amsterdam).117:167-173.)。例如:根據(jù)不同的類黃酮具有不同吸收光譜這ー原理，可以采用帶有光電二極管陣列檢測器(DAD)的HPLC對分離的類黃酮成分進行全波長掃描，然后用獲得的吸收光譜與標準品對照來鑒定類黃酮的化學(xué)結(jié)構(gòu)。但現(xiàn)有的花色苷提取方法中，得到葉片制成的粉末，并加入花色苷提取液后形成的樣品，要將樣品于4°C冰箱內(nèi)避光浸提72小時；期間每六小時震蕩一次，于24小吋，48小時處收集上清液，并再向樣品中加入等量花色苷提取液；72小時后，將3次收集的上清液進行合井，這樣提取液必須長時間(過夜)浸泡植物材料而影響測定結(jié)果不準確的問題。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)要解決的技術(shù)問題是提供一種觀賞海棠花色苷的測定方法，能在一天之內(nèi)準確測定觀賞海棠花色苷的含量，從而解決目前對觀賞海棠花色苷含量測定吋，解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下:本專利技術(shù)提供一種觀賞海棠花色苷的測定方法，包括:步驟1，將經(jīng)液氮速凍后的觀賞海棠花葉片放入研缽中，加入石英砂和非溶性交聯(lián)聚こ烯吡咯烷酮，加入液氮研磨成粉末；步驟2，將所述粉末轉(zhuǎn)入試管中，加入花色苷提取液，之后在45°C超聲提取60min得到；步驟3，將提取的所述花色苷提取液進行純化處理，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min，得到上清液裝于安捷倫上樣瓶中用于HPLC檢測；步驟4，上樣，對所述安捷倫上樣瓶進行HPLC-DAD檢測，檢測后得到觀賞海棠花色苷的測定結(jié)果；所述HPLC-DAD檢測的檢測條件如下:柱溫30°C ;流速lmL/min ;進樣量20 u L ;流動相梯度，其中A為采用體積濃度為0.5%的甲酸水的流動相A ；B為采用色譜純こ臆的流動相 B:0minl0%B, 40minl9%B, 50min40%B ;柱子平衡時間 IOmin ;平衡:50.0lmin,10%, B，60min，10%B ;檢測波長:520nm ；350nm ;280nm。本專利技術(shù)的有益效果為:該方法提取時間短，不足2h，不會出現(xiàn)現(xiàn)有方法中的將提取液過夜長時間放置影響測定結(jié)果的問題，從上機操作來看，大大節(jié)約了時間以及減少了試劑不必要的浪費，HPLC中涉及到的方法設(shè)置來看:梯度洗脫是為了將多種物質(zhì)分離開來，并且用最短的時間，并且建立提取的類黃酮種類較多，且分離出來的物質(zhì)含量很高，各個色譜峰之間的分離效果很好，且省時省力。【專利附圖】【附圖說明】為了更清楚地說明本專利技術(shù)實施例的技術(shù)方案，下面將對實施例描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹，顯而易見地，下面描述中的附圖僅僅是本專利技術(shù)的一些實施例，對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來講，在不付出創(chuàng)造性勞動的前提下，還可以根據(jù)這些附圖獲得其他附圖。圖1為本專利技術(shù)實施例提供的測定方法測定觀賞海棠花王族葉片的花色苷含量示意圖；圖2為現(xiàn)有技術(shù)的測定方法測定觀賞海棠花王族葉片的花色苷含量示意圖；圖3為本專利技術(shù)實施例提供的測定方法測定觀賞海棠花王族果皮的花色苷含量示意圖；圖4為現(xiàn)有技術(shù)的測定方法測定觀賞海棠花王族果皮的花色苷含量示意圖；圖5為本專利技術(shù)實施例提供的測定方法HPLC-MS檢測測定觀賞海棠花色苷的花色苷含量示意圖；圖6為現(xiàn)有技術(shù)提供的測定方法HPLC-MS檢測測定觀賞海棠花色苷的含量示意圖。【具體實施方式】下面對本專利技術(shù)實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本專利技術(shù)一部分實施例，而不是全部的實施例。基于本專利技術(shù)的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本專利技術(shù)的保護范圍。本專利技術(shù)實施例提供一種觀賞海棠花色苷的測定方本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護點】
一種觀賞海棠花色苷的測定方法，其特征在于，包括：步驟1，將經(jīng)液氮速凍后的觀賞海棠花葉片放入研缽中，加入石英砂和非溶性交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮，加入液氮研磨成粉末；步驟2，將所述粉末轉(zhuǎn)入試管中，加入花色苷提取液，之后在45℃超聲提取60min得到提取的花色苷提取液；步驟3，將提取的所述花色苷提取液進行純化處理，12000轉(zhuǎn)/分鐘離心3min，得到上清液裝于安捷倫上樣瓶中用于HPLC檢測；步驟4，上樣，對所述安捷倫上樣瓶進行HPLC?DAD檢測，檢測后得到觀賞海棠花色苷的測定結(jié)果；所述HPLC?DAD檢測的檢測條件如下：柱溫30℃；流速1mL/min；進樣量20μL；流動相梯度，其中A為采用體積濃度為0.5%的甲酸水的流動相A；B為采用色譜純乙腈的流動相B：0min10%B，40min19%B，50min40%B；柱子平衡時間10min；平衡：50.01min，10%，B，60min，10%B；檢測波長：520nm；350nm；280nm。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：姚允聰，宋婷婷，張杰，田佶，秦曉曉，
申請(專利權(quán))人：北京農(nóng)學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：