一種富含阿霍烯的組合物的制備方法技術

本發明專利技術公開了一種富含阿霍烯的組合物的制備方法，它是以蒜酶為催化劑，將從大蒜中提取的天然蒜氨酸轉化成二烯丙基硫代亞磺酸酯，通過膜濃縮，萃取分離富集后，再經反應、純化得到高含量的阿霍烯產品。本發明專利技術產品工藝原料易得，生產工藝條件容易控制，產品純度高。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了，它是以蒜酶為催化劑，將從大蒜中提取的天然蒜氨酸轉化成二烯丙基硫代亞磺酸酯，通過膜濃縮，萃取分離富集后，再經反應、純化得到高含量的阿霍烯產品。本專利技術產品工藝原料易得，生產工藝條件容易控制，產品純度高。【專利說明】
本專利技術涉及，尤其是一種涉及高含量反式阿霍烯的制備方法。
技術介紹
阿霍烯(Ajoene),又名大蒜烯,有順式(Z-ajoene)和反式(E_ajoene)兩種結構，是從植物油浸泡破碎的大蒜鱗莖得到的浸出物中分離的一種生物活性成分，為二烯丙基硫代亞磺酸酯(dialIyl thiosulfinate)在溫和條件下緩慢分解得到的產物。阿霍烯作為源自大蒜的天然穩定的有效活性成分已越來越受到科技界的重視，對其藥理、生理功能的研究報道也不斷涌現，已有研究表明阿霍烯在抗凝血、降血壓、解毒、抗癌、抗氧化、抗衰老及有機體的細胞介導免疫、體液免疫調節等過程中都可起到重要的作用。大蒜中主要活性物質為二烯丙基硫代亞磺酸酯，而大蒜鱗莖中本身不含二烯丙基硫代亞磺酸酯，只有在大蒜被破碎時，其前體物質一蒜氨酸在蒜酶(alliinase，EC4.4.1.4)的催化下與氧反應生成二烯丙基硫代亞磺酸酯。二烯丙基硫代亞磺酸酯在常溫條件下極不穩定，在不同的條件下分解成不同的物質，一方面在溫和條件下，二烯丙基硫代亞磺酸酯生產阿霍烯類(ajoenes)或發生環化反應生成乙烯基二硫雜苯類(vinyldithiins);另一方面,在劇烈條件下,如蒸懼生成二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚和其它硫醚化合物(sulfides),活性大大降低。美國專利5612077公開了一種使用植物浸泡搗碎大蒜或蒜汁制備阿霍烯的工藝，產品中阿霍烯含量僅為500-700 μ g/g，產品為植物油復合物。美國專利20080102142公開了一種將大蒜經乙醇提取、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析、葡聚糖凝膠柱層析分離阿霍烯的工藝。符小靜報道了一種酶解轉化制備阿霍烯的工藝，將新鮮大蒜粉碎后經酶解轉化、甲醇提取、萃取分離制得含阿霍烯的大蒜提取物，進一步使用柱層析等多種分離方法得到純度大于90%阿霍烯產品的方法。上述方法都存在純化工藝復雜、產品收率低的問題。
技術實現思路
現有阿霍烯生產工藝收率低，產品成分復雜，包含順式阿霍烯、反式阿霍烯、乙烯基二硫雜苯類，二烯丙基二硫醚、二烯丙基三硫醚和其它硫醚且主要以活性較低的順式阿霍烯為主。要從反應產物中分離高純度的反式阿霍烯，需采用柱層析，高速逆流色譜等分離手段，工藝復雜。本專利技術針對現有工藝存在的上述問題，提供了一種高含量的阿霍烯，尤其是高純度反式阿霍烯的制備方法。本專利技術是通過將純化后的蒜氨酸溶液經固定化蒜酶催化生成二烯丙基硫代亞磺酸酯，反應液通過膜濃縮、萃取工藝富集生成的二烯丙基硫代亞磺酸酯，再將富集的二烯丙基硫代亞磺酸酯反應制得阿霍烯。 為實現本專利技術的技術方案概述如下。高純度阿霍烯的制備方法包括以下步驟。(a)溶解在緩沖液中的蒜氨酸，在蒜酶的催化下發生反應，得到含有二烯丙基硫代亞磺酸酯的反應液。(b)將含有二稀丙基硫代亞磺酸酯的反應液濃縮。(c)濃縮后的溶液，使用有機溶劑萃取富集二烯丙基硫代亞磺酸酯。(d)將萃取得到的含二烯丙基硫代亞磺酸酯的溶液減壓蒸餾回收溶劑，向回收溶劑得到的殘留物中加入極性溶劑，控制反應溫度25°C _70°C，攪拌反應6~120小時。(e)反應結束后，減壓蒸餾回收溶劑。(f)反應物用甲醇水溶液溶解后，先用異戊烷萃取，分離得到的甲醇水溶液再用二氯甲烷萃取。(g)步驟(f)中分離得到的二氯甲烷溶液經無水硫酸鈉脫水后，減壓蒸餾回收溶劑得阿霍烯組合物。阿霍烯的含量測定方法 HPLC條件色譜柱:Si 60 250 mmX 4.mmX 5 u m ; 流動相:正己烷:異丙醇=85:15 (V/V)； 流速:1 mL/min ； 進樣量:10 U L ; 檢測波長:240 nm 具體實施方法。實施例1制備二烯丙基硫代亞磺酸酯。稱取質量百分含量為50%的蒜氨酸100g，溶于IOL pH=6.5的緩沖液中，加入蒜酶溶液0.1L(蒜酶活性640U/mL)，于37°C攪拌反應60分鐘，反應后測定溶液中二烯丙基硫代亞磺酸酯濃度為1.6g/L，收率為72.1%。實施例2制備二烯丙基硫代亞磺酸酯。將純化的蒜酶包埋在殼聚糖中用戊二醛交聯成型，測定其蒜酶活力為83U/g。取2kg固定化酶珠于裝入夾套玻璃柱中(0 50*1000cm)，夾套用37°C熱水循環；取質量百分含量為50%的蒜氨酸2kg溶于120L pH=6.5的緩沖液中，該反應液以3L/h的流速通過酶柱，完成后用水洗至流出液無蒜味。收集反應液153L，測得二烯丙基硫代亞磺酸酯濃度為5.26g/L,收率為84.48%。實施例3純化二烯丙基硫代亞磺酸酯。取實施例2中反應液50L，用截流分子量(MWCO)為200D的納濾膜濃縮至5L，用5L乙醚萃取4次，收集乙醚溶液，經無水硫酸鈉脫水后真空濃縮得純化的二烯丙基硫代亞磺酸酯168.4g，純度為64.2%。實施例4純化二烯丙基硫代亞磺酸酯。取實施例2中反應液50L，用反滲透膜濃縮至5L，用5L乙酸乙酯萃取5次，收集乙酸乙酯溶液，經無水硫酸鈉脫水后減壓回收溶劑，濃縮過程控制溫度50°C~55°C得純化的二烯丙基硫代亞磺酸酯182.6g，純度為72.4%。實施例5制備阿霍烯。取實施例4中純化二烯丙基硫代亞磺酸酯10g，溶于IL體積分數為80%的甲醇水溶液中，于37°C攪拌反應96小時，反應結束減壓蒸餾回收溶劑至體積IOOmL,蒸餾過程控制溫度50°C~55°C，蒸餾剩余溶液中加入IOOmL甲醇，用200mL異戊烷萃取3次，萃取后的甲醇水溶液再用200mL二氯甲烷萃取5次，萃取得到的二氯甲烷溶液減壓回收溶劑，濃縮過程控制溫度50°C~55°C，得阿霍烯產品6.87g，E-阿霍烯質量分數為77.24%，Z-阿霍烯質量分數為6.01%, E-阿霍烯與Z-阿霍烯質量分數之和為84.25%，E-阿霍烯占阿霍烯質量分數為 91.68%ο實施例6制備阿霍烯。取實施例3中純化二烯丙基硫代亞磺酸酯10g，溶于IL體積分數為30%的丙酮水溶液中，于60°C攪拌反應8小時，反應結束減壓蒸餾回收溶劑，蒸餾過程控制溫度500C~55°C，加入200mL體積分數為60%的甲醇水溶液，用200mL異戊烷萃取3次，萃取后的甲醇水溶液再用200mL二氯甲烷萃取5次，萃取得到的二氯甲烷溶液減壓蒸餾回收溶劑，蒸餾過程控制溫度50°C~55°C，得阿霍烯產品6.61g，E-阿霍烯質量分數為76.12%，Z-阿霍烯質量分數為6.72%，E-阿霍烯與Z-阿霍烯質量分數之和為82.24%，E-阿霍烯占阿霍烯質量分數為92.56%。實施例7制備阿霍烯。取實施例4中純化二烯丙基硫代亞磺酸酯10g，溶于IL體積分數為60%的丙酮水溶液中，于52°C攪拌回流反應10小時，反應結束減壓蒸餾回收溶劑，蒸餾過程控制溫度500C~55°C，加入200mL體積分數為40%的甲醇水溶液，用200mL異戊烷萃取3次，萃取后的甲醇水溶液再用200mL二氯甲烷萃取5次，萃取得到的二氯甲烷溶液減壓回收溶劑，濃縮過程控制溫度50°C~55°C，得阿霍烯產品6.37g，本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種阿霍烯組合物的制備方法，特征在于采用該方法制備的阿霍烯組合物由順式阿霍烯和反式阿霍烯組成，該阿霍烯組合物中順式阿霍烯和反式阿霍烯質量分數之和不低于80%，其中反式阿霍烯在總的阿霍烯中的質量分數不低于90%，該方法包括以下步驟：(a)?溶解在緩沖液中的蒜氨酸，在蒜酶的催化下發生反應，得到含有二烯丙基硫代亞磺酸酯的反應液；(b)?將含有二烯丙基硫代亞磺酸酯的反應液濃縮；(c)?濃縮后的溶液，使用有機溶劑萃取富集二烯丙基硫代亞磺酸酯；(d)?將萃取得到的含二烯丙基硫代亞磺酸酯的溶液減壓蒸餾回收溶劑，向回收溶劑得到的殘留物中加入極性溶劑，控制反應溫度25℃?70℃，攪拌反應6~120小時；(e)?反應結束后，減壓蒸餾回收溶劑；(f)?反應物用甲醇水溶液溶解后，先用異戊烷萃取，分離得到的甲醇水溶液再用二氯甲烷萃取；(g)?步驟(f)中分離得到的二氯甲烷溶液經無水硫酸鈉脫水后，減壓蒸餾回收溶劑得阿霍烯組合物。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：劉福錦，孫波，黃穩，包塔娜，曾艷麗，任建波，
申請(專利權)人：四川省榮桓科技有限責任公司，
類型：發明
國別省市：