本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種檢測蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶的方法，其主要技術(shù)流程包括：分別測定蜂蜜淀粉酶、黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶在不同pH條件下的淀粉酶活力，根據(jù)待測蜂蜜樣品的淀粉酶活性隨pH值變化情況判斷其中是否含有黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶，并進一步運用酶活力在不同pH條件下的比例關(guān)系及導(dǎo)數(shù)方法確定不同淀粉酶的含量。本發(fā)明專利技術(shù)可以用簡單的方法確定蜂蜜中摻入了多少黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶，從而客觀評價蜂蜜質(zhì)量。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術(shù)公開了一種，其主要技術(shù)流程包括：分別測定蜂蜜淀粉酶、黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶在不同pH條件下的淀粉酶活力，根據(jù)待測蜂蜜樣品的淀粉酶活性隨pH值變化情況判斷其中是否含有黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶，并進一步運用酶活力在不同pH條件下的比例關(guān)系及導(dǎo)數(shù)方法確定不同淀粉酶的含量。本專利技術(shù)可以用簡單的方法確定蜂蜜中摻入了多少黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶，從而客觀評價蜂蜜質(zhì)量。【專利說明】
本專利技術(shù)涉及一種蜂蜜檢測技術(shù)，尤其涉及。本專利技術(shù)的主要目的是檢測蜂蜜中是否摻入或人為添加了黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶，其
屬于食品檢測領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
蜂蜜是蜜蜂采集植物的花蜜與分泌物，經(jīng)過充分釀造而儲存在蜂巢內(nèi)的一種甜而粘稠、透明或半透明的膠狀物質(zhì)，其營養(yǎng)豐富，含有葡萄糖、果糖、維生素、酶、礦物質(zhì)和氨基酸等成分。此外，蜂蜜具有多種保健功能，《本草綱目》記載蜂蜜具有清熱、補中、解毒、潤燥、止痛之效，現(xiàn)代研究表明蜜蜂具有治療潰瘍、保護肝臟、治療凍瘡的作用。因此，蜂蜜是各國人民都喜歡的一種天然保健食品。淀粉酶活性是評價蜂蜜質(zhì)量的重要指標(biāo)，也是判斷蜂蜜新鮮程度、成熟度以及是否摻假的一項重要指標(biāo)。在蜂蜜中摻入淀粉轉(zhuǎn)化糖、蔗糖及對蜂蜜進行加熱或經(jīng)過發(fā)酵處理等都會引起蜂蜜淀粉酶值顯著降低，各國都通過檢測蜂蜜淀粉酶值而將這些蜂蜜和正常蜂蜜相區(qū)別。然而，在這類蜂蜜中人為添加商品淀粉酶可以使它們的淀粉酶檢測值達(dá)到正常或優(yōu)質(zhì)蜂蜜的水平，且目前缺乏測定蜂蜜中商品淀粉酶的方法。因此，用蜂蜜淀粉酶值作為評價蜂蜜品質(zhì)的指標(biāo)具有很大的局限性，很容易被摻假企業(yè)鉆漏洞。相關(guān)研究表明，不同來源的淀粉酶具有不同的酶學(xué)性質(zhì)，來源于蜜蜂消化液的蜂蜜淀粉酶與商品淀粉酶的性質(zhì)可能具有較大的差異。通過研究不同條件下的酶活性變化從而發(fā)現(xiàn)蜂蜜中的天然淀粉酶及商品淀粉酶的性質(zhì)差異，并有針對性地設(shè)計測定蜂蜜天然淀粉酶和商品淀粉酶的方法，就可克服現(xiàn)有蜂蜜品質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)的技術(shù)缺陷，區(qū)分蜂蜜樣品中淀粉酶的來源，從而更客觀地評價蜂蜜品質(zhì)。目前，商品淀粉酶主要來源于黑曲霉和枯草芽孢桿菌，因此，針對蜂蜜中是否摻入黑曲霉和枯草芽孢桿菌淀粉酶進行檢測技術(shù)研究具有重要意義。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種操作簡便、快速、結(jié)果靈敏度高、成本低的，從而測定蜂蜜產(chǎn)品中蜂蜜淀粉酶、黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶的含量。為實現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采取的實驗方案如下: 1、獲取待測淀粉酶的最適pH值:參照國標(biāo)GB/T18932.16-2003的方法測定蜂蜜天然淀粉酶、黑曲霉淀粉酶以及枯草芽孢桿菌淀粉酶的最適PH值，其中酶活力參照GB/T18932.16-2003，以淀粉酶值表示，其單位為mL/(g.h)。2、測定待測蜂蜜樣品的淀粉酶活力并初步判斷其中淀粉酶的構(gòu)成:先參照國標(biāo)GB/T18932.16-2003測定待測蜂蜜 樣品在不同pH值時的淀粉酶活力，對比待測蜂蜜樣品淀粉酶的最適PH值與蜂蜜天然淀粉酶最適pH值的差異，初步判斷該樣品中是否含有黑曲霉淀粉酶或枯草芽孢桿菌淀粉酶。3、確定待測蜂蜜樣品是否含有黑曲霉淀粉酶并計算含量:根據(jù)黑曲霉的淀粉酶在PH值低于3.5時仍然具有較強的活性，而蜂蜜天然淀粉酶和枯草芽孢桿菌的淀粉酶在pH值低于3.5時都沒有活性來判斷蜂蜜樣品中是否含有黑曲霉淀粉酶并計算得到含量；如果發(fā)現(xiàn)蜂蜜樣品在PH值低于3.5時仍有較強活性，則判斷其中含有黑曲霉淀粉酶；在此情況下，可進一步根據(jù)待測蜂蜜樣品在PH值3.5的酶活性以及黑曲霉淀粉酶在pH 3.5和5.0時的酶活性比值計算出待測蜂蜜樣品中黑曲霉淀粉酶的含量。4、確定待測蜂蜜樣品是否含有枯草芽孢桿菌淀粉酶并計算含量:若在pH值大于3.5時蜂蜜樣品的最適pH偏離了該蜂蜜天然淀粉酶的最適pH，尤其是發(fā)現(xiàn)最適pH值增大的情況，則可判斷其中添加了枯草芽孢桿菌淀粉酶；在該情況下，通過計算比導(dǎo)數(shù)值并擬合比導(dǎo)數(shù)值和枯草芽孢桿菌淀粉酶含量的量化模型(標(biāo)準(zhǔn)曲線)，就可定量分析待測樣品中中枯草芽孢桿菌淀粉酶的含量。比導(dǎo)數(shù)值的計算及其標(biāo)準(zhǔn)曲線模型如公式I所示: 其中，An為待測樣品在pH值為i處的淀粉酶值；ε a1、ε bi分別為一摩爾蜂蜜淀粉酶和一摩爾枯草芽孢桿菌淀粉酶在pH值為i時的酶值；Cb為枯草芽孢桿菌淀粉酶的含量，以pH值5時的酶活性表示。有益.效果 采用上述方案后，通過測定待測蜂蜜樣品在不同PH值條件下的淀粉酶活性而判斷蜂蜜中是否摻入黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶，并估算它們的含量，從而評價蜂蜜的質(zhì)量。與目前蜂蜜摻假檢測技術(shù)相比，本專利技術(shù)的創(chuàng)新點及先進性主要體現(xiàn)在:①利用酶學(xué)性質(zhì)差異區(qū)分蜂蜜天然淀粉酶和人為添加入蜂蜜的商品淀粉酶；②利用黑曲霉淀粉酶在PH 3.5和pH 5時酶活性的比例關(guān)系定量待測樣品中黑曲霉淀粉酶的活性；?運用比導(dǎo)數(shù)的方法準(zhǔn)確定量待測樣品中枯草芽孢桿菌淀粉酶和蜂蜜天然淀粉酶的含量。因此，本專利技術(shù)具有操作簡便、快速，結(jié)果靈敏度高，成本低等的優(yōu)點。下面結(jié)合附圖和具體實施例對本專利技術(shù)作進一步的說明。【專利附圖】【附圖說明】圖1油菜蜜淀粉酶的最適pH值圖； 圖2黑曲霉淀粉酶的最適pH值圖； 圖3枯草芽孢桿菌淀粉酶的最適pH值圖； 圖4油菜蜜和黑曲霉淀粉酶混合樣品淀粉酶的最適pH值圖； 圖5油菜蜜和枯草芽孢桿菌淀粉酶混合樣品的淀粉酶最適pH值圖； 圖6蜂蜜混合樣品的枯草芽 孢桿菌淀粉酶比導(dǎo)數(shù)值隨pH值變化圖 圖7油菜蜜和枯草芽孢桿菌淀粉酶混合樣品的比導(dǎo)數(shù)分析標(biāo)準(zhǔn)曲線圖； 圖8百花蜜淀粉酶的最適pH值圖； 圖9含有黑曲霉淀粉酶的百花蜜樣品的淀粉酶活性隨pH變化圖；圖10含有枯草芽孢桿菌淀粉酶的百花蜜樣品的淀粉酶活性隨pH變化圖； 圖11八葉五加蜜淀粉酶的最適pH值圖。【具體實施方式】 本專利技術(shù)是一種，它包括以下步驟:1、獲取待測淀粉酶的最適PH值；2、初步判斷待測蜂蜜樣品是否含有黑曲霉淀粉酶或枯草芽孢桿菌淀粉酶；3、確定待測蜂蜜樣品是否含有黑曲霉淀粉酶并計算含量；4、確定待測蜂蜜樣品是否含有枯草芽孢桿菌淀粉酶并計算含量。以下列實施例僅用于說明本專利技術(shù)，而不應(yīng)視為限定本專利技術(shù)的范圍。實施例中未注明具體技術(shù)或條件，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過市購獲得的常規(guī)產(chǎn)品。實施例1:油菜蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶的檢測 (I)步驟1:獲取待測淀粉酶的最適PH 純油菜蜜淀粉酶活力隨PH值變化的結(jié)果如圖1所示，其最適pH為5.0，在pH 3.5及以下沒有酶活性，但pH 5.0以上隨pH上升酶活性下降。黑曲霉淀粉酶活力隨pH值變化的結(jié)果如圖2所示，其最適pH為5.5，比天然蜂蜜淀粉酶的最適PH稍大，但與天然淀粉酶最顯著的區(qū)別是其在pH 3.5和3.0時仍然具有較強的酶活性。枯草芽孢桿菌淀粉酶活力隨pH值變化的結(jié)果如圖3所示，其酶活在pH 5.0-7.0條件下基本穩(wěn)定，沒有特別明顯的最適pH峰出現(xiàn)，顯著區(qū)別于蜂蜜天然淀粉酶；此外，該淀粉酶在pH 4.0時就降低至0，可以此與黑曲霉淀粉酶相區(qū)別。(2)步驟2:初步判斷待測油菜蜜樣品是否含有黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶 含一定量黑曲霉淀粉酶液的油菜蜜淀粉本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種檢測蜂蜜中黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶的方法，其特征在于：它包括以下步驟：（1）參照國標(biāo)方法分別測定純蜂蜜淀粉酶、黑曲霉淀粉酶和枯草芽孢桿菌淀粉酶的最適pH值；（2）測定待測蜂蜜樣品在不同pH條件下的淀粉酶活力；（3）判斷蜂蜜樣品中是否摻入了黑曲霉淀粉酶并運用酶活力在各pH條件下的比例關(guān)系計算其含量；（4）判斷蜂蜜樣品中是否摻入了枯草芽孢桿菌淀粉酶并運用比導(dǎo)數(shù)方法分析其含量。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：倪輝，黃姝玲，蔡慧農(nóng)，楊遠(yuǎn)帆，黃高凌，肖安風(fēng)，伍菱，
申請(專利權(quán))人：集美大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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