本發明專利技術涉及2型糖尿病易感基因位點及檢測方法和試劑盒。具體地，本發明專利技術公開了基于全基因組關聯分析研究而發現的2型糖尿病易感基因位點。本發明專利技術還提供了一種檢測2型糖尿病易感性的方法，它包括檢測個體的GRK5基因和RASGRP1基因、轉錄本和/或蛋白與正常相比是否存在變異，存在變異就表明該個體患2型糖尿病的可能性大于正常人群。本發明專利技術還公開了相應的檢測試劑盒。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術涉及2型糖尿病易感基因位點及檢測方法和試劑盒。具體地，本專利技術公開了基于全基因組關聯分析研究而發現的2型糖尿病易感基因位點。本專利技術還提供了一種檢測2型糖尿病易感性的方法，它包括檢測個體的GRK5基因和RASGRP1基因、轉錄本和/或蛋白與正常相比是否存在變異，存在變異就表明該個體患2型糖尿病的可能性大于正常人群。本專利技術還公開了相應的檢測試劑盒。【專利說明】2型糖尿病易感基因位點及檢測方法和試劑盒
本專利技術涉及分子生物學和醫學領域。更具體地涉及GRK5基因和RASGRP1基因的單核苷酸多態性(single nucleotide polymorphism, SNP)及其與2型糖尿病的相關性。本專利技術還涉及檢測這些SNP的方法和試劑盒。
技術介紹
糖尿病是一組以 糖代謝異常為特征的由不同病理生理改變組成的綜合征，不同患者之間具有較大的異質性，而其主要的兩種病理生理改變為胰島素分泌不足和胰島素抵抗。現在約有九千兩百萬成年人患有2型糖尿病。雖然營養狀況和生活方式的改變、 肥胖發病率的增加等是導致2型糖尿病發病率增加的重要因素，遺傳因素同樣有著不可或缺的作用。在過去幾十年里，中國的2型糖尿病發病率顯著升高。研究表明，包括中國漢族人群在內的東亞人群，其2型糖尿病的遺傳易感性高于西方人群。雖然已開展了一些2型糖尿病相關基因及多態性的研究，過去幾年對2型糖尿病的相關風險位點已經有很多重要的研究發現，但是對于不同種族人群的2型糖尿病發病的遺傳背景了解尚淺。近年來，單核苷酸多態性(SNP)和單倍型(haplotype)在多基因疾病研究中的廣泛運用，為在分子水平上研究2型糖尿病的發生和發展的機制開辟了全新的思路。同時，高通量、低成本的SNP檢測手段的不斷出現也為SNP大規模快速分型提供了可能。SNP的存在與否以及等位基因頻率存在人種及地域的差異，這就提示多基因疾病遺傳異質性的存在，即同一疾病或性狀在不同的人群中可能是不同的遺傳因素造成的。在歐美人群和部分亞洲人群中開展的2型糖尿病全基因組關聯分析研究(GWAS) 已經發現50多個2型糖尿病易感基因位點。然而這些易感基因的危險等位基因的效應值均很小，其總體效應值僅僅解釋2型糖尿病遺傳力的10~15%。雖然已有許多關于各種基因多態性與2型糖尿病的研究，但沒有證實GRK5基因或 RASGRPI基因與2型糖尿病相關性的報道，更沒有證實本專利技術所述的GRK5基因或RASGRP1 基因SNP與2型糖尿病相關性的報道。綜上所述，鑒于糖尿病嚴重影響人們身體健康的疾病，為了盡早診斷和治療2型糖尿病，本領域迫切需要尋找2型糖尿病易感基因(尤其是與中國漢族人群相關的2型糖尿病易感基因位點)，并開發檢測2型糖尿病的方法、試劑盒，或相關的治療藥物。
技術實現思路
本專利技術的目的就是提供一種輔助診斷(尤其是早期輔助診斷)2型糖尿病的方法及檢測試劑盒。本專利技術的另一目的是提供一種新的治療2型糖尿病的方法。在本專利技術的第一方面，提供了一種體外非診斷性檢測樣品是否存在GRK5基因或RASGRPI基因的單核苷酸多態性的方法，包括步驟:(a)用特異性引物擴增樣品的GRK5基因或RASGRP1基因，得到擴增產物；和(b)檢測擴增產物中是否存在選自下組的單核苷酸多態性:GRK5 基因的 rsl0886471:即 SEQ ID N0.:1 中第 134 位 C — T;RASGRP1 基因的 rs7403531:即 SEQ ID N0.: 2 中第 164 位 C — T。在另一優選例中，所述的GRK5基因的rsl0886471對應于人第10號染色體的第 121，139，393 位(NCBI36/hgl8)。在另一優選例中，所述的RASGRP1基因的rs7403531對應于人第15號染色體的 36，610，197 位(NCBI36/hgl8)。在另一優選例中，所述的基因特異性引物具有SEQ ID N0:3和4所示序列、或SEQ ID N0:5和6所示序列。在另一優選例中，所述的擴增產物的長度為100_2000bp且含有SEQ ID NO:1中第 134 位或 SEQ ID NO: 2 中第 164 位。在本專利技術的第二方面，提供了一種檢測2型糖尿病的試劑盒，它包括特異性擴增 GRK5基因或RASGRPI基因或轉錄本的引物，所述的引物擴增出長度為100_2000bp且含有 SEQ ID NO:1中第134位或SEQ ID NO: 2中第164位的擴增產物。在另一優選例中，所述試劑盒還含有選自下組的試劑:(a)與SEQ ID NO:1中第134位或SEQ ID NO: 2中第164位的突變結合的探針；(b)識別SEQ ID NO:1中第134位或SEQ ID NO:2中第164位的突變限制性內切酶。`在另一優選例中，所述的突變是選自下組的單核苷酸多態性:GRK5 基因的 rsl0886471:即 SEQ ID N0.:1 中第 134 位 C —T;RASGRP1 基因的 rs7403531:BP SEQ ID N0.:2 中第 164 位 C —T。在另一優選例中，所述的引物具有SEQ ID N0:3和4所示序列、或SEQ ID N0:5和 6所示序列。在本專利技術的第三方面，提供了一種GRK5基因或RASGRP1基因的用途，用于制備對 2型糖尿病易感性進行診斷的試劑或試劑盒。在另一優選例中，所述的試劑或試劑盒用于檢測選自下組的單核苷酸多態性:GRK5 基因的 rsl0886471:即 SEQ ID N0.:1 中第 134 位 C — T;RASGRP1 基因的 rs7403531:即 SEQ ID N0.:2 中第 164 位 C —T。在另一優選例中，所述的試劑包括特異性擴增GRK5基因或RASGRP1基因或轉錄本的引物、含有所述SNP位點的擴增產物、與所述SNP位點特異性結合的探針、特異性檢測所述SNP位點的核酸芯片。在另一優選例中，所述的試劑盒包括使用說明書以及一種或多種以下試劑:容器(a)以及位于所述容器內的特異性擴增GRK5基因或RASGRP1基因或轉錄本的引物；容器(b)以及位于所述容器內的與所述SNP位點特異性結合的探針；容器(c)以及位于所述容器內的特異性檢測所述SNP位點的核酸芯片。在另一優選例中，所述的核酸芯片還包括用于檢測額外的糖尿病(尤其是2型糖尿病)易感性位點的檢測點。在另一優選例中，所述的額外的糖尿病(尤其是2型糖尿病)易感性位點選自下組:rs2206734 位點:位于第 6 號染色體第 20，802，863 位 CDKALl 中 A — G ;rsl0814916位點:位于第9號染色體第4，283，150位GLIS3基因中C — A ;rs2383208位點:位于第9號染色體第22，122，076位CDKN2B基因中A — G ;rsl 1257655位點:位于第10號染色體第12，347，900位CDC123基因中T — C ;rs2299620位點:位于第11號染色體第2，814，871位KCNQl基因中G — A ;rs4430796位點:位于第17號染色體第33，172，153位HNFlB基因中G — A ;rsl2010175 位點:位于 X 染色體第 15本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種體外非診斷性檢測樣品是否存在GRK5基因或RASGRP1基因的單核苷酸多態性的方法，其特征在于，包括步驟：(a)用特異性引物擴增樣品的GRK5基因或RASGRP1基因，得到擴增產物；和(b)檢測擴增產物中是否存在選自下組的單核苷酸多態性：GRK5基因的rs10886471：即SEQ?ID?NO.:1中第134位C→T;RASGRP1基因的rs7403531：即SEQ?ID?NO.:2中第164位C→T。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：林旭，黎懷星，甘蔚，王一欽，魯玲，
申請(專利權)人：中國科學院上海生命科學研究院，
類型：發明
國別省市：
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