一種豬圓環病毒2型的生產方法技術

本發明專利技術公開了一種應用生物反應器培養pK-15A1#細胞生產豬圓環病毒2型的生產工藝，包括如下技術步驟：（1）選擇pK-15A1#細胞作為增殖圓環病毒2型用細胞；（2）采用生物反應器為細胞培養的工具；（3）同步接毒的病毒培養工藝；（4）pK-15A1#細胞在生物反應器中微載體上的培養；（5）豬圓環病毒2型病毒在生物反應器微載體上細胞內的增殖培養；（6）豬圓環病毒2型病毒培養物的收獲。本發明專利技術能降低生產成本，投入產出比較傳統轉瓶生產工藝提高5-10倍。生產周期短，占用場地小，易于快速擴大生產規模，環境污染少且易于處理，自動化程度高，用人少，質量穩定，可顯著降低成本、提高疫苗產量和質量。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種豬圓環病毒2型的生產方法，其特征在于：選擇生物反應器作為培養工具；選擇微載體作為細胞貼附的生長載體；選擇pK?15A1#細胞作為制苗用細胞；(1)、制苗用細胞的傳代與接種將致密單層的pK?15A1#細胞經消化液消化分散后取樣計數，用含10%NBCS的MEM生長液將pK?15A1#細胞調整為2?3×105個/ml，再接種到生物反應器上進行培養；所述培養條件為：溫度為37.0℃±0.2℃，pH值為7.40，DO為40%?80%，轉速為40rpm?80rpm；(2)、制苗用細胞的接毒將在生物反應器中培養的pK?15A1#細胞按照體積比1%?5%接種PCV2病毒，接毒后按照所述培養條件繼續培養；(3)、接毒后的培養接毒后在細胞培養12h時補加200μmol/L的必需氨基酸；在細胞培養約24h時更換含10%NBCS的MEM生長液一次；在細胞培養48h時，細胞長滿微載體50%?60%，吸出MEM生長液后，用預熱的無菌PBS洗滌兩次，再加入含2%NBCS和1%D?氨基葡萄糖的MEM維持液繼續培養；（4）、病毒的收獲與效價檢測維持液培養后約54h后停止攪拌，靜置5min后吸出上清作為一收，此后加入MEM維持液繼續培養48h，靜置后吸出上清，收獲為二收，此后加入MEM維持液繼續培養48h，此時將微載體和培養液一起全部收獲，凍融三次后作為抗原保存。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：徐宏軍，丁光星，任麗，趙英杰，胡來根，劉玉才，
申請(專利權)人：成都天邦生物制品有限公司，
類型：發明
國別省市：