一種海帶配子體的固相保存方法技術

本發明專利技術公開了一種海帶配子體的固相保存方法，其步驟是：孢子囊海帶塊的獲取及擦拭；孢子囊海帶塊的無菌處理；海帶孢子的放散、附著及萌發；海帶單個配子體的分離與接種；海帶配子體在固體培養基中的培養及后期保存。本發明專利技術將海帶配子體的無菌采集和固相保存結合起來，本發明專利技術從源頭就抑制細菌的污染，降低了海帶配子體污染細菌的機會，也大大簡化了海帶配子體固相保存前期的無菌處理流程，降低固相培養處理海帶配子體所附帶細菌的難度，容易得到污染較輕甚至無污染的海帶配子體，降低了液相保存海帶配子體后期更換培養液的工作量并節省有限的保存空間，同時便于固相保存方法的推廣應用。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種海帶配子體的固相保存方法，其步驟是：（1）?孢子囊海帶塊的獲取及擦拭：在海區選取性狀優良的種海帶，在海帶孢子囊區剪取孢子囊海帶塊，用滅菌脫脂棉蘸取冷卻后的煮沸海水反復擦拭孢子囊海帶塊，以去除孢子囊海帶塊表面附著物；（2）?孢子囊海帶塊的無菌處理：在移入無菌室前，利用滅菌脫脂棉蘸取高壓滅菌的冷卻海水再次擦拭孢子囊海帶塊，將擦拭后的孢子囊海帶塊移入無菌室超凈工作臺，首先用濃度為100?ppm的阿奇霉素和濃度為100?ppm的環丙沙星的雙抗無菌海水浸泡孢子囊海帶塊20分鐘，再用濃度為1.5%?碘化鉀無菌海水浸泡孢子囊海帶塊10分鐘，最后用抽濾海水浸泡孢子囊海帶塊5分鐘，重復一次用抽濾海水浸泡孢子囊海帶塊5分鐘；（3）?海帶孢子的放散、附著及萌發：將無菌處理后的孢子囊海帶塊放入血清瓶，加抽濾的高壓滅菌冷卻海水進行海帶孢子放散，海帶孢子放散到抽濾的高壓滅菌冷卻海水成為海帶孢子水，使用滅菌的篩絹過濾海帶孢子水中的粘液及雜質，最后將海帶孢子水倒入裝有載玻片的立式染色缸中，海帶孢子在載玻片上進行附著和萌發，發育為海帶配子體；?（4）海帶單個配子體的分離與接種：在超凈工作臺內，在顯微鏡下，在附有海帶配子體的載玻片上選取狀態優良、特征明顯的海帶配子體，利用毛細玻璃管將選取的海帶配子體先轉移到蓋玻片上，鏡檢確保是一個海帶配子體，再利用毛細玻璃管重新吸入，植入培養皿中的固體培養基中，以完成海帶配子體接種，接種后的培養皿合上皿蓋并用封口膜密封；?（5）?海帶配子體在固體培養基中的培養及后期保存：將接種海帶配子體的培養皿放入光照培養箱中固相培養4個月，培養條件是持續24小時光照，光照強度1300～2000?lux?，溫度4～10?℃，然后將固相培養后的培養皿轉入暗光低溫保存，使海帶配子體進入休眠狀態即可實現長期保存，根據培養基表面干燥程度添加培養液。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：李言，羅世菊，王娜，王利芹，趙聚萍，賽珊，錢瑞，武瑞娜，陳書秀，崔翠菊，
申請(專利權)人：山東東方海洋科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：