本發明專利技術專利公開了一種適用于高密度發酵生產重組豬干擾素α1（recombinant?porcine?interferon?α1，rPoIFNα1）的培養基，屬于發酵工程技術領域。所述的每升培養基中含有甘油20mL，蛋白胨10g，酵母粉5g，Nacl10g。本發明專利技術的培養基與傳統的培養基相比，重組大腸埃希菌BL21/pET-32a-rPoIFNα1工程菌總蛋白含量增加了3~4倍，rPoIFNα1目的蛋白表達量提高了1~2倍，rPoIFNα1的效價提高了2~3倍，從而大幅度降低了生產成本。
【技術實現步驟摘要】
一種適用于高密度發酵生產重組豬干擾素α1的培養基
本專利技術屬于發酵工程
，具體涉及一種適用于高密度發酵生產重組豬干擾素α I的培養基。
技術介紹
干擾素(Interferon, IFN)是由英國科學家Isaacs于1957年利用雞胚絨毛尿囊膜研究流感病毒干擾現象時首先發現的。它是一種細胞因子，具有抑制細胞分裂、調節免疫、抗病毒、抗腫瘤等多種作用。其本質是蛋白質，類型可分為α、β、Υ、ω等幾種。其中α干擾素具有較強的抗病毒作用，其有20余種亞型,分為α 1、a 2a、a 2b、α 3......等。基因工程重組豬干擾素制劑的出現極大促進了干擾素在獸醫領域應用，是干擾素研究工作的一項重大突破。基因工程重組豬干擾素制劑的品質與發酵時所用培養基的成分關系巨大。培養基對工程菌高密度發酵至關重要，直接決定生產成本。之前通過大量的實驗摸索發現傳統的LB培養基能夠滿足我們的重組豬干擾素α I工程菌的生長，且能夠表達出我們所需要的重組豬干擾素 aI (recombinant porcine interferon α I,rPoIFNa I)蛋白(重組豬a干擾素的制備方法，專利號2008100201804)。但由于LB培養基是一種基礎培養基，并不是最合適rPoIFNa I高密度發酵生產的培養基。為了建立更優化的rPoIFN a I高密度發酵工藝，我們在傳統LB培養基的基礎上有針對性的添加了多種小分子物質進行高密度發酵，通過工程菌總蛋白的表達量、rPoIFNa I目的蛋白表達量以及rPoIFNa I的效價三方面的比較發現:高密度發酵時，傳統LB培養基中間添加甘油對rPoIFNa I的表達有明顯的改善，且添加量為20mL/L時效果最好，與傳統LB培養基相比，重組大腸埃希菌BL2 1/pET-32a-rPoIFNa I工程菌總蛋白含量增加了 3~4倍，rPoIFNa I目的蛋白表達量提高了 I~2倍，rPoIFNa I的效價提高了 2~3倍，從而大幅度降低了生產成本。
技術實現思路
本專利技術目的就是提供一種適用于高密度發酵生產重組豬干擾素a I的培養基。本專利技術是通過以下技術方案實現的:一種適用于高密度發酵生產重組豬干擾素a I的培養基，每升所述的培養基中含有甘油18~20ml,蛋白胨9~12g,酵母粉4~6g, Nacl9~12g,剩余的為去離子水。本專利技術的目的是通過以下技術方案來實現的:1.通過以下方法對LB培養基進行優化:在LB培養基(蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaC110g/L，加去離子水定容至1000ml)的基礎上分別添加了以下候選物質進行高密度發酵:乙醇、甘油、D-甘露醇、β-環糊精、甜菜堿、山梨醇、蔗糖、TritonX-100、甘氨酸，試驗重復5次，從工程菌總蛋白含量，rPoIFNa I目的蛋白表達量以及rPoIFNa I的效價三方面進行檢測，發現LB培養基中間添加甘油可明顯提高rPoIFNa I產量；2.在大量候選物質中篩選出添加甘油可明顯提高rPoIFNa I產量后，優化甘油最適添加濃度:試驗共設了 6個濃度梯度，分別為:lml/L，5ml/L，10ml/L，20ml/L，40ml/L，80ml/L，試驗重復5次，從工程菌總蛋白含量，rPoIFNa I目的蛋白表達量以及rPoIFNa I的效價三方面進行檢測，發現甘油添加量為20ml/L時效果最好:重組大腸埃希菌BL21/pET-32a_rPoIFNa I工程菌總蛋白含量增加了 3~4倍，rPoIFNa I目的蛋白表達量提高了I~2倍，rPoIFNa I的效價提高了 2~3倍。本專利技術的優點是:在常規的LB培養基中加入適量的甘油，與優化以前的LB培養基發酵工藝相比，可以大幅度提高rPoIFNa I產量，工程菌總蛋白含量、rPoIFNa I目的蛋白表達量以及rPoIFNa I的效價均得到了較大提高，從而降低了生產成本。【具體實施方式】分別配置以下培養基表1:培 養基配方本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種適用于高密度發酵生產重組豬干擾素α1的培養基，其特征在于，每升所述的培養基中含有甘油18~20ml，蛋白胨9~12g，酵母粉4~6g，Nacl?9~12g，剩余的為去離子水。
【技術特征摘要】
1.一種適用于高密度發酵生產重組豬干擾素α I的培養基，其特征在于，每升所述的培養基中含有甘油18~20ml，蛋白胨擴12g，酵母粉r6g，Nacl擴12g，剩余的為去離子水。2.根據權利要求1所述一種適用于高...
【專利技術屬性】
技術研發人員：趙俊，王明麗，周濤，
申請(專利權)人：趙俊，王明麗，
類型：發明
國別省市：
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