一種木瓜蛋白酶的提純方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種木瓜蛋白酶的提純方法,包括如下步驟：1）往木瓜漿中加入水，得到木瓜漿溶液;2）添加復(fù)合酶Extyme-A;3）板框過濾：將經(jīng)過步驟2）處理后的木瓜漿溶液進(jìn)行板框過濾；4）離心：濾液進(jìn)行沉降離心，收集離心液；5）添加復(fù)合酶Extyme-B;6）粗濾:將離心液采用聚偏氟乙烯濾膜進(jìn)行過濾；7）精濾:將粗濾后的料液采用聚砜超濾膜進(jìn)行過濾濃縮得到木瓜蛋白酶濃縮液；8）真空干燥，得到木瓜蛋白酶。本發(fā)明專利技術(shù)能夠明顯改善過濾效果，使得粗濾和超濾變得流暢，縮短過濾時(shí)間，提高工作效率和提高酶活收率。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
ー種木瓜蛋白酶的提純方法
本專利技術(shù)涉及生物
，具體涉及ー種木瓜蛋白酶的提純方法。
技術(shù)介紹
木瓜蛋白酶是ー類巰基蛋白酶。未成熟青木瓜果實(shí)內(nèi)含量豐富，該酶活力高，熱穩(wěn)定性好，具有天然、衛(wèi)生、安全等特點(diǎn)，在食品、醫(yī)藥、化妝品、皮革和紡織等領(lǐng)域廣泛運(yùn)用，需求量和價(jià)格逐年上升。目前，生產(chǎn)木瓜蛋白酶常用提取方法包括:1、烘干或噴霧干燥法，2、絮凝法、3、鹽析法、4、超濾精制法。方法I所述的エ藝較為簡(jiǎn)單和原始，缺點(diǎn)是溫度高對(duì)酶活性破壞大，酶活收率低，雜質(zhì)多，得到酶活約100萬(wàn)/克左右。方法2所述的絮凝法一般采用丹寧和多糖類物質(zhì)等將蛋白酶等物質(zhì)沉淀下來，該方法對(duì)蛋白酶沉淀專一性不強(qiáng)，沉淀物含雜質(zhì)多，酶活收率也只有70%，酶活カ為100-150萬(wàn)/克。方法3是用50%以上硫酸銨鹽析，得到的酶純度較高，但高濃度的鹽對(duì)酶活破壞也較大，產(chǎn)品酶活為200萬(wàn)U/左右，由于產(chǎn)品含鹽分較多，灰分増加，生產(chǎn)中脫鹽需要較大量水，對(duì)環(huán)境保護(hù)不利。 方法4是ー種較先進(jìn)的提取技術(shù)，國(guó)內(nèi)生產(chǎn)精制木瓜酶主要采用超濾精制法。該方法提取木瓜蛋白酶純度高，酶活達(dá)250萬(wàn)以上，收率達(dá)到90%以上，得到酶活較高，是木瓜蛋白酶精制提取方向。該方法存在問題是，由于木瓜漿含有膠質(zhì)、脂質(zhì)、淀粉類物質(zhì)較多，攪拌提取エ序木瓜酶溶解釋放不完全，后續(xù)板框過濾渣較多，濾液不清；膜分離過濾階段由于濾膜孔徑非常小，易造成過濾膜堵塞，過濾速度慢，影響木瓜蛋白酶的濾過和分離，生產(chǎn)過程要停機(jī)對(duì)濾膜進(jìn)行清洗，導(dǎo)致一定數(shù)量的木瓜酶損失，降低酶活收率。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)的目的在于提供ー種木瓜蛋白酶的提純方法，能夠明顯改善過濾效果，使得粗濾和超濾變得流暢，縮短過濾時(shí)間，提高工作效率和提高酶活收率。實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的目的可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到:ー種木瓜蛋白酶的提純方法，其特征在于包括如下步驟:I)往木瓜漿中加入水，攪拌均勻，得到木瓜漿溶液，然后調(diào)節(jié)木瓜漿溶液的PH值為 6-7;2)添加復(fù)合酶Extyme-A:按木瓜漿重量的0.2-0.6%添加復(fù)合酶Extyme-A到木瓜衆(zhòng)溶液中，攪拌反應(yīng)5小時(shí)；所述復(fù)合酶Extyme-A由按酶活力計(jì)的以下原料混合制備而成:果膠酶8000U/g、a -淀粉酶2000U/g、^ -葡聚糖酶25000U/g;3)板框過濾:將經(jīng)過步驟2)處理后的木瓜漿溶液進(jìn)行板框過濾，過濾壓力控制在0.6-0.8MPa，收集濾液；所述的板框過濾采用市售產(chǎn)品，佛山金凱地過濾設(shè)備有限公司生產(chǎn)的820型板框壓濾機(jī)。4)離心:將步驟3)收集到的濾液進(jìn)行沉降離心，收集離心液；5)添加復(fù)合酶Extyme-B:按離心液重量的0.1%_0.2%添加復(fù)合酶Extyme-B到離心液中；攪拌至酶完全溶解，混合均勻；所述復(fù)合酶Extyme-B由按酶活力計(jì)的以下原料混合制備而成:堿性蛋白酶50000U/g、果膠酶6000U/g;6)粗濾:將經(jīng)過步驟5)處理后的離心液采用聚偏氟乙烯濾膜進(jìn)行過濾(天津愛生膜過濾技術(shù)有限公司生產(chǎn)，型號(hào)MFOc)，聚偏氟乙烯濾膜的孔徑為0.22um，操作壓カ0.1MPa ；7)精濾:將經(jīng)過步驟6)粗濾后的料液采用聚砜超濾膜進(jìn)行過濾濃縮(天津愛生膜過濾技術(shù)有限公司生產(chǎn)，型號(hào)USIbl)，聚砜超濾膜的截留分子量為10K，操作壓カ0.1MPa ；得到木瓜蛋白酶濃縮液；8)真空干燥:將步驟7)得到的木瓜蛋白酶濃縮液進(jìn)行抽真空干燥，得到木瓜蛋白酶。實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的目的還可以通過采取如下技術(shù)方案達(dá)到:實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式是:在步驟I)中，所述木瓜漿與水的重量比為1:5，水溫控制在25-35で。實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的一`種實(shí)施方式是:在步驟2)中，按木瓜漿重量的0.4-0.6%添加復(fù)合酶Extyme-A到木瓜衆(zhòng)溶液中。實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式是:在步驟2)中，按木瓜漿重量的0.5%添加復(fù)合酶Extyme-A到木瓜衆(zhòng)溶液中。實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的一種實(shí)施方式是:在步驟4)中，控制轉(zhuǎn)速為1500rpm，離心時(shí)間為25-30分鐘。本專利技術(shù)的有益效果在于:本專利技術(shù)生產(chǎn)エ藝操作，與現(xiàn)有技術(shù)中的超濾精制法生產(chǎn)エ藝比較，具有以下優(yōu)勢(shì):縮短生產(chǎn)時(shí)間，工作效率提高，生產(chǎn)過程操作エ藝穩(wěn)定、易控制，沉降離心液清澈透明，木瓜酶純度高，成品酶活最高達(dá)到350萬(wàn)U/g，提取總收率平均達(dá)95%。具體的比較結(jié)果可參照表1。表1現(xiàn)有常規(guī)生產(chǎn)エ藝與實(shí)施例1所述的生產(chǎn)エ藝比較本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種木瓜蛋白酶的提純方法,?其特征在于包括如下步驟：1）往木瓜漿中加入水，攪拌均勻，得到木瓜漿溶液，然后調(diào)節(jié)木瓜漿溶液的pH值為6?7;2）添加復(fù)合酶Extyme?A：按木瓜漿重量的0.2?0.6%添加復(fù)合酶Extyme?A到木瓜漿溶液中，攪拌反應(yīng)5小時(shí)；所述復(fù)合酶Extyme?A由按酶活力計(jì)的以下原料混合制備而成：果膠酶8000U/g、α?淀粉酶2000U/g、β?葡聚糖酶25000U/g;3）板框過濾：將經(jīng)過步驟2）處理后的木瓜漿溶液進(jìn)行板框過濾，過濾壓力控制在0.6?0.8MPa，收集濾液；?4）離心：將步驟3）收集到的濾液進(jìn)行沉降離心，收集離心液；5）添加復(fù)合酶Extyme?B：按離心液重量的0.1%?0.2%添加復(fù)合酶Extyme?B到離心液中;攪拌至酶完全溶解，混合均勻;所述復(fù)合酶Extyme?B由按酶活力計(jì)的以下原料混合制備而成：堿性蛋白酶50000U/g、果膠酶6000U/g;6）粗濾:?將經(jīng)過步驟5）處理后的離心液采用聚偏氟乙烯濾膜進(jìn)行過濾，聚偏氟乙烯濾膜的孔徑為0.22um，操作壓力0.1MPa；?7）精濾:?將經(jīng)過步驟6）粗濾后的料液采用聚砜超濾膜進(jìn)行過濾濃縮，聚砜超濾膜的截留分子量為10K，操作壓力0.1MPa；得到木瓜蛋白酶濃縮液；?8）真空干燥：將步驟7）得到的木瓜蛋白酶濃縮液進(jìn)行抽真空干燥，得到木瓜蛋白酶。...

【技術(shù)特征摘要】
1.ー種木瓜蛋白酶的提純方法，其特征在于包括如下步驟: 1)往木瓜漿中加入水，攪拌均勻，得到木瓜漿溶液，然后調(diào)節(jié)木瓜漿溶液的PH值為6-7; 2)添加復(fù)合酶Extyme-A:按木瓜衆(zhòng)重量的0.2-0.6%添加復(fù)合酶Extyme-A到木瓜衆(zhòng)溶液中，攪拌反應(yīng)5小時(shí)；所述復(fù)合酶Extyme-A由按酶活力計(jì)的以下原料混合制備而成:果膠酶 8000U/g、a -淀粉酶 2000U/g、β -葡聚糖酶 25000U/g; 3)板框過濾:將經(jīng)過步驟2)處理后的木瓜漿溶液進(jìn)行板框過濾，過濾壓力控制在0.6-0.8MPa，收集濾液； 4)離心:將步驟3)收集到的濾液進(jìn)行沉降離心，收集離心液； 5)添加復(fù)合酶Extyme-B:按離心液重量的0.1%-0.2%添加復(fù)合酶Extyme-B到離心液中；攪拌至酶完全溶解，混合均勻；所述復(fù)合酶Extyme-B由按酶活力計(jì)的以下原料混合制備而成:堿性蛋白酶50000U/g、果膠酶6000U/g; 6)粗濾:將經(jīng)過步...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陸祥，陸超雄，何維，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：陸祥，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：