重組載體的雙酶切鑒定方法技術

本發明專利技術公開了重組載體的雙酶切鑒定方法。首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振蕩后36攝氏度培養過夜；將過夜后的菌液做質粒提取；反復提取2次；酶切鑒定：在試管中加入12ulddH2O;35攝氏度條件下反應2-2.5小時；瓊脂電泳觀察結果；觀察結果前，需要取感受態細胞與冰上解凍35分鐘；第一次質粒提取前需9000rpm離心。本發明專利技術的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丟失，且穩定性好，表達量高，具有成本低，操作簡單的優點。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及一種實驗方法，具體來說，。
技術介紹
質粒是真核細胞細胞核外或原核生物擬核區外能夠進行自主復制的遺傳單位，包括真核生物的細胞器(主要指線粒體和葉綠體)中和細菌細胞擬核區以外的環狀脫氧核糖核酸(DNA)分子。現在習慣上用來專指細菌(大腸桿菌)、酵母菌和放線菌等生物中細胞核或擬核中的DNA以外的DNA分子。在基因工程中質粒常被用做基因的載體(Vector)。許多細菌除了擬核中的DNA外，還有大量很小的環狀DNA分子，這就是質粒(plasmid)(補充:部分質粒為RNA)。質粒上常有抗生素的抗性基因，例如，四環素抗性基因或卡那霉素抗性基因等。有些質粒稱為附加體(episome)，這類質粒能夠整合進真菌的染色體，也能從整合位置上切離下來成為游離于染色體外的DNA分子。質粒在宿主細胞體內外都可復制，通過個些特性，人們可以把ー些目的DNA片斷構建在質粒中，通過轉化入大腸桿菌中，不斷的復制，來得到目的產物。這就是轉化的目的。
技術實現思路
為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案: ，首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振蕩后36攝氏度培養過夜；將過夜后的菌液做質粒提取；反復提取2次；酶切鑒定:在試管中加入12ulddH20;35攝氏度條件下反 應2-2.5小時；瓊脂電泳觀察結果。本專利技術中，觀察結果前，需要取感受態細胞與冰上解凍35分鐘。本專利技術中，第一次質粒提取前需9000rpm離心。 本專利技術的有益效果是，可以有效避免蛋白氨基酸丟失，且穩定性好，表達量高，具有成本低，操作簡單的優點。【具體實施方式】，首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振蕩后36攝氏度培養過夜；將過夜后的菌液做質粒提取；反復提取2次；酶切鑒定:在試管中加入12ul ddH20; 35攝氏度條件下反應2.5小吋；瓊脂電泳觀察結果。觀察結果前，需要取感受態細胞與冰上解凍35分鐘。第一次質粒提取前需9000rpm離心 以上所述，僅為本專利技術較佳的【具體實施方式】，但本專利技術的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本
的技術人員在本專利技術披露的技術范圍內，根據本專利技術的技術方案及其專利技術構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本專利技術的保護范圍之內。本文檔來自技高網...

【技術保護點】
重組載體的雙酶切鑒定方法，其特征在于，首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振蕩后36攝氏度培養過夜；將過夜后的菌液做質粒提取；反復提取2次；酶切鑒定：在試管中加入12ul?ddH2O;35攝氏度條件下反應2?2.5小時；瓊脂電泳觀察結果。

【技術特征摘要】
1.重組載體的雙酶切鑒定方法，其特征在于，首先挑選單菌落，使其分別接種于平板上；振湯后36攝氏度培養過夜；將過夜后的囷液做質粒提取；反復提取2次；酶切鑒定:在試管中加入12ul ddH20;35攝氏度條件下反應2-2.5小時...

【專利技術屬性】
技術研發人員：徐麗，
申請(專利權)人：徐麗，
類型：發明
國別省市：