本發(fā)明專利技術(shù)提供了一株產(chǎn)水解酶的黑曲霉（Aspergullus?niger）MJ及其在制備香菇酶解物中的應(yīng)用。該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編：430072，保藏編號：CCTCC?NO：M2013329，保藏日期：2013年7月11日。本發(fā)明專利技術(shù)的有益效果主要體現(xiàn)在：（1）黑曲霉是食品工業(yè)中常用菌種，不產(chǎn)有害物質(zhì)，使用安全；（2）水解酶的發(fā)酵工藝簡單，酶的生產(chǎn)成本低；（3）黑曲霉MJ發(fā)酵制備的復(fù)合水解酶，對香菇中的蛋白質(zhì)、核酸和多糖的水解效率高；（4）生產(chǎn)工藝不使用有毒有害原料，環(huán)保無污染；（5）產(chǎn)品天然綠色，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，保健價值高，應(yīng)用領(lǐng)域廣。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
產(chǎn)水解酶的黑曲霉及其在制備香菇酶解物中的應(yīng)用(-)
本專利技術(shù)涉及一株產(chǎn)水解酶的黑曲霉(Aspergullis niger)MJ及其在制備香菇酶解物中的應(yīng)用。(二)
技術(shù)介紹
香菇，又名香蕈、香菌、冬菇、厚菇或花菇等，為擔(dān)子菌綱傘菌目側(cè)耳科香菇屬的香蕈(Lentinula edodes)的子實體。香燕是世界第二大食用菌,也是我國特產(chǎn)之一,在民間素有“山珍”之稱。香菇肉質(zhì)肥厚細(xì)嫩、味道鮮美、香氣沁人、營養(yǎng)豐富，是我國人民餐桌上傳統(tǒng)的美味菜肴，具有低脂肪、富含維生素和礦物元素等特點，是一種可增強(qiáng)人體免疫力的健康食品。香菇不僅是人們理想的美味佳肴，而且具有良好的保健功能和較高的藥用價值。經(jīng)常食用香菇可預(yù)防缺乏維生素D而引起的血磷、血鈣代謝障礙導(dǎo)致的佝僂病，可預(yù)防人體各種粘膜及皮膚炎類疾病。從香菇中提取的多糖，具有健胃保肝、降血糖、降血脂、提高免疫力、抗腫瘤、抗病毒和抗感染等活性，臨床應(yīng)用于治療慢性病毒性肝炎和癌癥的輔助治療等，藥品有香菇多糖片和膠囊、香菇多糖注射液等。香菇作為中國傳統(tǒng)的食用菌，味道鮮營養(yǎng)高，深受人們喜愛。目前各種香菇深加工產(chǎn)品品種已有很多，如香菇罐頭、香菇片、香菇精、香菇飲料和香菇米酒等,這些產(chǎn)品主要針對的是香菇的風(fēng)味和營養(yǎng)價值，但針對香菇的藥用和保健功效，仍有進(jìn)一步開發(fā)的余地，以更好地滿足市場的需求。已有研究表明，香菇酶解物可以提高小鼠的免疫功能，改善腸道菌群環(huán)境，對腸道功能有一定的調(diào)節(jié)作用，具有較高的藥用和保健功效。已有文獻(xiàn)和專利報道采用蛋白酶、纖維素酶和5'-磷酸二酯酶等酶復(fù)合水解`香菇制備酶解物的報道，這些方法雖然具有水解度高的優(yōu)點，但是水解需要3種商品酶制劑，生產(chǎn)的成本較高，實際應(yīng)用難度大。(三)
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)目的是提供一株水解酶產(chǎn)生菌-黑曲霉(Aspergullis niger) MJ,及其在制備香菇酶解物中的應(yīng)用。利用該菌株發(fā)酵制備含蛋白酶、5'-磷酸二酯酶和多糖水解酶等酶的復(fù)合水解酶系，直接用于酶解香菇得到酶解物，水解率高達(dá)35%以上，酶解物中的氨基酸含量達(dá)5.36%, 5;-核苷酸含量達(dá)0.86%，多糖含量達(dá)74.2%。產(chǎn)品味道鮮美，營養(yǎng)豐富，保健功效聞，可進(jìn)一步深加工為香燕調(diào)味品或保健食品。本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案是:一株黑曲霉(Aspergullus niger) MJ，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編:430072，保藏編號=CCTCC NO:M2013329，保藏日期:2013年7月11日。本專利技術(shù)所述黑曲霉MJ由土壤中分離和篩選，并經(jīng)過誘變選育得到的優(yōu)良菌株。所述黑曲霉MJ的生長特征如下:在馬鈴薯固體培養(yǎng)基上，30°C條件下，培養(yǎng)3天，菌絲即可長滿，并產(chǎn)生大量孢子。菌絲初期為白色絨毛狀，之后逐漸呈黑褐色，菌落背面呈淺黃色。菌絲表層有大量黑褐色分生孢子。顯微鏡下觀察到分生孢子頭呈黑褐色放射狀，分生孢子梗長短不一，頂囊球形，雙層小梗，分生孢子黑褐色球形。[0011 ] 本專利技術(shù)還涉及所述的黑曲霉MJ在微生物發(fā)酵制備水解酶中的應(yīng)用。具體的，所述應(yīng)用為:將黑曲霉MJ菌種接種至產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，25~32°C培養(yǎng)2~4天，獲得含有蛋白酶、5'-磷酸二脂酶和多糖水解酶的發(fā)酵液。所得發(fā)酵液經(jīng)離心或過濾除去菌體的清液為水解酶的粗酶液，可以直接應(yīng)用于酶解制備香菇酶解物；也可以保藏于4°C冰箱15天內(nèi)使用；也可以經(jīng)過冷凍干燥，制成干酶粉保藏于4°C冰箱長期使用。所述產(chǎn)酶培養(yǎng)基按如下組成配制:馬鈴薯100~300g (煮沸20min過濾留汁液)，鹿糖20~60g,水補(bǔ)足至1000mL, pH4~6。本專利技術(shù)還涉及所述的黑曲霉MJ在微生物酶解香菇制備香菇酶解物中的應(yīng)用。具體的，所述應(yīng)用為:將黑曲霉MJ菌種接種至產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，25~32°C培養(yǎng)2~4天，發(fā)酵液經(jīng)固液分離獲得水解酶的粗酶液。粗酶液經(jīng)過I~2倍體積的水稀釋或不經(jīng)稀釋，加入足量干香菇粉(過量也可)，于25~35°C、100~300r/min條件下酶解8~16h，之后，過濾去除未被酶解的香菇殘渣，濾液經(jīng)濃縮、干燥和粉碎，即得香菇酶解物。所述產(chǎn)酶培養(yǎng)基按如下組成配制:馬鈴薯100~300g (煮沸20min過濾留汁液)，鹿糖20~60g,水補(bǔ)足至1000mL, pH4~6。 所述菌株在產(chǎn)酶培養(yǎng)前，通常需要先經(jīng)斜面培養(yǎng)基活化培養(yǎng)，或再經(jīng)過種子擴(kuò)大培養(yǎng)，然后用孢子或種子液接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基進(jìn)行產(chǎn)酶發(fā)酵。具體的，所述活化及種子培養(yǎng)和產(chǎn)酶發(fā)酵方法如下:(I)將黑曲霉MJ菌種孢子接種于斜面培養(yǎng)基，于25~32°C培養(yǎng)2~3天，得到活化后的黑曲霉MJ菌種；所述的斜面培養(yǎng)基組成為:馬鈴薯100~200g/L(馬鈴薯洗凈去皮，切成小塊，加5倍質(zhì)量水煮沸20~30min，4層紗布過濾去除馬鈴薯塊)、葡萄糖10~20g/L、NaCl5~10g/L、瓊脂15~20g/L，溶劑為自來水，pH4~6 ;(2)將步驟(1)活化培養(yǎng)后黑曲霉MJ孢子接種至種子培養(yǎng)基中，于25~32°C、150~250r/min振蕩條件下培養(yǎng)I~2天，得種子液；所述種子培養(yǎng)基不含瓊脂，其他成分以及配制方法同斜面培養(yǎng)基；(3)將步驟(2)種子液以2%~10%的體積比的接種量，移種到產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，或?qū)⒉襟E(1)的黑曲霉MJ孢子直接接入產(chǎn)酶培養(yǎng)基中，產(chǎn)酶培養(yǎng)基于25~32°C、150~250r/min振蕩條件下培養(yǎng)2~4天，得到黑曲霉MJ的發(fā)酵液；所述產(chǎn)酶培養(yǎng)基按如下組成配制:馬鈴薯100~300g (煮沸20min過濾留汁液),鹿糖20~60g, NaC15~IOg,水補(bǔ)足至1000mL, pH4 ~6。本專利技術(shù)將香菇去柄烘干粉碎后直接為原料，利用水解活性較高的微生物產(chǎn)生的粗酶液直接進(jìn)行處理香菇粉，香菇中的蛋白質(zhì)被部分水解成氨基酸，核酸被部分水解成核苷酸、多糖被部分水解為低聚糖，酶解產(chǎn)物富含氨基酸、核苷酸、香菇低聚糖和多糖，具有較高的營養(yǎng)價值和保健功效，可以作為食品調(diào)味劑、營養(yǎng)補(bǔ)充劑和保健食品的原料。本專利技術(shù)的有益效果主要體現(xiàn)在:(1)黑曲霉是食品工業(yè)中常用菌種，不產(chǎn)有害物質(zhì)，使用安全；(2)水解酶的發(fā)酵工藝簡單，酶的生產(chǎn)成本低；(3)黑曲霉MJ發(fā)酵制備的復(fù)合水解酶，對香菇中的蛋白質(zhì)、核酸和多糖的水解效率高；(4)生產(chǎn)工藝不使用有毒有害原料，環(huán)保無污染；(5)產(chǎn)品天然綠色，味道鮮美，營養(yǎng)豐富，保健價值高，應(yīng)用領(lǐng)域廣。(四)【具體實施方式】下面結(jié)合具體實施例對本專利技術(shù)進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本專利技術(shù)的保護(hù)范圍并不僅限于此:實施例1:產(chǎn)酶微生物的富集、分離、篩選和誘變育種市售新鮮香菇切碎，稱取25g到250mL三角瓶中，加入剛采集的菜地土壤5g，加少量水?dāng)嚢杈鶆颍糜?0°C的恒溫箱培養(yǎng)5天，進(jìn)行產(chǎn)酶微生物的富集。將長滿霉菌的上述富集物用無菌水稀釋后涂布于平板培養(yǎng)基上，于30°C的生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3天至大量菌落形成。挑取顏色和形態(tài)不同的霉菌菌落孢子接種于斜面培養(yǎng)基上，斜面培養(yǎng)基于30°C恒溫培養(yǎng)3天，得長滿孢子的斜面菌種。用接種環(huán)分別挑取上述菌株斜面菌種的孢子，接入50mL產(chǎn)酶培養(yǎng)基中(250mL三角瓶裝)，于30°C、200r/min振蕩條件下培養(yǎng)4天后，將發(fā)酵液用4層紗布過濾，取IOmL濾液到一只50mL的三角瓶中，加入Ig香菇粉。三角瓶用保鮮膜封口后于30°C本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點】
一株黑曲霉（Aspergullus?niger）MJ，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編：430072，保藏編號：CCTCC?NO：M2013329，保藏日期：2013年7月11日。
【技術(shù)特征摘要】
1.一株黑曲霉(Aspergullus niger) MJ，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:中國，武漢，武漢大學(xué)，郵編:430072，保藏編號=CCTCC NO:M2013...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：梅建鳳，陳虹，金航，應(yīng)國清，王鴻，易喻，陳建澍，
申請(專利權(quán))人：浙江工業(yè)大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：
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