本發(fā)明專利技術(shù)屬于免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種玉米赤酶烯酮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒。所述試劑盒由發(fā)光板、辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤霉烯酮多克隆抗體、玉米赤酶烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光底物液和包被抗原組成。采用本發(fā)明專利技術(shù)進(jìn)行檢測(cè)的靈敏度高，本發(fā)明專利技術(shù)的靈敏度可達(dá)5-500ng/mL，能夠檢出放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無(wú)法檢出的物質(zhì)，對(duì)抗生素殘留的檢測(cè)具有十分重要的意義。本發(fā)明專利技術(shù)發(fā)光強(qiáng)度在4-6個(gè)量級(jí)之間與測(cè)定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。本發(fā)明專利技術(shù)的光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，分析方法簡(jiǎn)便快速。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種玉米赤酶烯酮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒
本專利技術(shù)屬于免疫學(xué)檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種玉米赤霉烯酮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒。
技術(shù)介紹
目前檢測(cè)谷物中真菌毒素殘留的技術(shù)主要有以下幾種方法: (I)理化檢測(cè)法:20世紀(jì)90年代以后，絕大多數(shù)測(cè)定谷物中真菌毒素殘留的理化檢測(cè)法主要依靠液相色譜技術(shù)進(jìn)行分離，其次是色/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)，氣相色譜法、高效薄層色譜法等檢測(cè)法，因其各自特有的性能，在真菌毒素檢測(cè)方面稍有應(yīng)用。色譜法檢測(cè)谷物中真菌毒素殘留要經(jīng)過(guò)樣品處理(包括樣品的提取、脫蛋白、離心、層析柱凈化、衍生化等步驟)、殘留藥物的分離和殘留藥物的檢測(cè)。理化檢測(cè)法利用毒素分子中的基團(tuán)所具有的特殊反應(yīng)或性質(zhì)來(lái)測(cè)定其含量，能進(jìn)行定性、定量分析和藥物鑒定，可作為谷物中真菌毒素殘留檢測(cè)的確證方法。該法檢測(cè)敏感性較高，但儀器及檢測(cè)費(fèi)用高、檢測(cè)程序復(fù)雜、較耗時(shí)間等。(2)免疫學(xué)分析法:免疫學(xué)分析法是以抗原與抗體的特異性、可逆性結(jié)合反應(yīng)為基礎(chǔ)的分析方法，目前真菌毒素殘留免疫分析技術(shù)主要分三大類(lèi):相對(duì)獨(dú)立的分析方法、免疫分析技術(shù)與常規(guī)理化分析技術(shù)聯(lián)用的方法、免疫受體法。1973年荷蘭van weeman、schurrs及瑞典Engvall、Perlmann分別提出酶聯(lián)免疫吸附法，30多年來(lái)國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)免疫學(xué)方法檢測(cè)谷物中真菌毒素殘留進(jìn)行了大量研究。但由于毒素是半抗原，抗原構(gòu)建技術(shù)難度大、免疫特異性強(qiáng)、檢測(cè)成本高，目前IDEXX實(shí)驗(yàn)室公司等在免疫分析法方面的研究較為成熟，國(guó)內(nèi)該技術(shù)仍處于研究發(fā)展中。但是酶聯(lián)免疫吸附法與發(fā)光法相比，酶聯(lián)免疫吸附法靈敏度較低，檢測(cè)結(jié)果不精確，影響進(jìn)一步研究。【專利
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
】本專利技術(shù)的目的是提供一種玉米赤酶烯酮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，不僅靈敏度高、檢測(cè)范圍寬、操作簡(jiǎn)便快速、無(wú)毒無(wú)污染，而且所用器材、價(jià)格低廉，易于普及使用。本專利技術(shù)所采用的技術(shù)方案是，一種玉米赤酶烯酮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，由發(fā)光板、試劑和盒體構(gòu)成，試劑放置在盒體中，所述試劑由辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體、玉米赤酶烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光底物液和包被抗原組成，所述辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體為以玉米赤酶烯酮與卵清蛋白偶聯(lián)作為免疫原的大白兔抗體； 所述玉米赤酶烯酮與卵清蛋白偶聯(lián)的免疫原制備方法，包括以下步驟: (1)稱取IOmg的對(duì)氨基苯甲酸加入到體積為1.1mL的氯化銨溶液中，制得對(duì)氨基苯甲酸溶液；之后稱取6mg的NaNO2加入到體積為0.35mL的蒸餾水中，在溫度為0_4°C的條件下攪拌均勻，制得NaNO2溶液；將NaNO2溶液逐滴加入到對(duì)氨基苯甲酸溶液中，避光反應(yīng)I小時(shí)，得溶液A ; (2)量取2.4μ L玉米赤酶烯酮溶液加入到體積為IOmL的硼砂緩沖液中，并在溫度為0-4°C下攪拌均勻，之后向該溶液中逐滴加入0.9mL的溶液A，避光反應(yīng)2小時(shí)，得到桔黃色溶液B ;所述硼砂緩沖液的濃度為0.05mol/L, pH值為8.5，硼砂緩沖液中含有濃度為0.15mol/L 的 NaCl ； (3)向溶液B中加入H3BO3晶體直至溶液B的pH值為7.4，之后向調(diào)過(guò)pH值的溶液B中加入94mgBSA，80mgEDC, 24mgNHS,在室溫條件下攪拌2小時(shí)，得桔黃色溶液C ； (4)將溶液C轉(zhuǎn)移到透析袋中，之后用PBS緩沖液在溫度為0-4°C的條件下透析五天，每12小時(shí)更換一次PBS緩沖液，將透析后的溶液凍干，得到淡黃色固體粉末即為免疫原，將免疫原放置在溫度為_(kāi)20°C的條件下保存，備用；所述PBS緩沖液的pH值為7.4，濃度為0.01mol/L ； 所述包被抗原的制備方法，包括以下步驟: (1)稱取9mg的NaNO2加入到體積為3mL的蒸餾水中，制得NaN02溶液，然后稱取IOmg的玉米赤酶烯酮加入到體積為1.6mL、濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液中，在溫度為0_4°C的條件下攪拌均勻，制得赤酶烯酮溶液，將NaNO2溶液逐滴加入赤酶烯酮溶液中，避光反應(yīng)0.5小時(shí)，之后向該溶液中加入25mg硫酸銨直至無(wú)氮?dú)夥懦觯频萌芤篋 ； (2)稱取70mg卵清蛋白加入到4mL的PBS緩沖溶液中，所述PBS緩沖溶液的濃度為0.lmol/L, pH值為7.5，然后將溶液D逐滴加入到該溶液中，制得混合液，然后用濃度為lmol/L的氫氧化鈉溶液將混合 液的pH值調(diào)至7.5，并在溫度為0_4°C的條件下避光反應(yīng)18小時(shí)，制得溶液E ; (3)將溶液E轉(zhuǎn)移到透析袋中，并在溫度為0-4°C的條件下，用濃度為0.01mol/L, pH值為7.4的PBS緩沖液透析五天,每12小時(shí)更換一次PBS緩沖液,之后將透析液置于轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心15分鐘，提取上清液并凍干，得到淡黃色固體粉末即為包被抗原，之后將包被抗原置于溫度為-20°C的條件下保存，備用。所述化學(xué)發(fā)光底物液，包括A液和B液，所述A液的制備方法是:將濃度為0.01mol/L的魯米諾溶解到濃度為0.01M、pH為8.8的Tris緩沖液中制得；所述B液的制備方法是:先將濃度為0.001mol/L的對(duì)碘苯酚溶解到濃度為0.01mol/L、pH為8.8的Tris緩沖液中，之后再向緩沖液中加入雙氧水與水比例為3:10000的無(wú)菌水。所述玉米赤酶烯酮標(biāo)準(zhǔn)液的濃度分別為30ng/ml、60ng/ml、200ng/ml、500ng/ml。所述的濃縮洗滌液由NaCl 80g,KH2PO4 2.0g^Na2HPO4.12H20 229.0g,KCl 2.0g 和吐溫-20溶于1000mL蒸餾水中攪拌均勻后制得，制得的濃縮洗滌液中吐溫-20質(zhì)量百分比濃度為0.5%。所述的濃縮洗滌液:在使用前，將試劑盒中提供的濃縮洗滌液用蒸餾水稀釋10倍。本專利技術(shù)的有益效果有以下五個(gè)方面: 一、本專利技術(shù)的試劑中通過(guò)采用多克隆抗體，不僅利于檢測(cè)結(jié)果的沉淀和凝集，而且檢測(cè)時(shí)反應(yīng)強(qiáng)度大、易于觀察。且本專利技術(shù)由于采用多克隆抗體，不僅制備方法簡(jiǎn)單，而且價(jià)格低廉,大大降低了生產(chǎn)成本。二、本專利技術(shù)的靈敏度高，靈敏度是化學(xué)發(fā)光免疫分析的關(guān)鍵，本專利技術(shù)通過(guò)采用玉米赤酶烯酮與卵清蛋白的偶聯(lián)物作為包被抗原、辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體作為抗體，靈敏度可達(dá)5-500 ng/mL，能夠檢出放射免疫分析和酶聯(lián)免疫分析等方法無(wú)法檢出的物質(zhì)，對(duì)抗生素殘留的檢測(cè)具有重要意義。三、寬的線性動(dòng)力學(xué)范圍，本專利技術(shù)的發(fā)光強(qiáng)度在4-6個(gè)量級(jí)之間，且與測(cè)定物質(zhì)濃度間呈線性關(guān)系。與顯色的酶免疫分析吸光度(0D值)為2.0的范圍相比，優(yōu)勢(shì)明顯。四、本產(chǎn)品發(fā)光底物穩(wěn)定好，光信號(hào)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。五、安全性好、保存期長(zhǎng)，本專利技術(shù)避免了放射性物質(zhì)的使用，未發(fā)現(xiàn)危害性，且本專利技術(shù)的試劑穩(wěn)定，保存期可達(dá)一年。【具體實(shí)施方式】一種玉米赤酶烯酮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，由發(fā)光板、試劑和盒體構(gòu)成，試劑放置在盒體中，所述試劑由辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體、玉米赤酶烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光底物液和包被抗原組成，所述辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體為以玉米赤酶烯酮與卵清蛋白偶聯(lián)作為免疫原的大白兔抗體； 所述玉米赤酶烯酮與卵清蛋白偶聯(lián)的免疫原制備方法，包括以下步驟: (1)稱取IOmg的對(duì)氨基苯甲酸加入到體積為1本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種玉米赤酶烯酮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，由發(fā)光板、試劑和盒體構(gòu)成，試劑放置在盒體中，其特征在于：所述試劑由辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體、玉米赤酶烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光底物液和包被抗原組成，所述辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體為以玉米赤酶烯酮與卵清蛋白偶聯(lián)作為免疫原的大白兔抗體；所述玉米赤酶烯酮與卵清蛋白偶聯(lián)的免疫原制備方法，包括以下步驟：?(1)稱取10mg的對(duì)氨基苯甲酸加入到體積為1.1mL?的氯化銨溶液中，制得對(duì)氨基苯甲酸溶液；之后稱取6mg的NaNO2加入到體積為0.35mL的蒸餾水中，在溫度為0?4℃的條件下攪拌均勻，制得NaNO2溶液；將NaNO2溶液逐滴加入到對(duì)氨基苯甲酸溶液中，避光反應(yīng)1小時(shí)，得溶液A；?(2)量取2.4μL玉米赤酶烯酮溶液加入到體積為10mL的硼砂緩沖液中，并在溫度為0?4℃下攪拌均勻，之后向該溶液中逐滴加入0.9mL?的溶液A，避光反應(yīng)2小時(shí)，得到桔黃色溶液B；所述硼砂緩沖液的濃度為0.05mol/L，pH值為8.5，硼砂緩沖液中含有濃度為0.15mol/L的NaCl；(3)向溶液B中加入H3BO3晶體直至溶液B的pH值為7.4，之后向調(diào)過(guò)pH值的溶液B中加入94mgBSA，80mgEDC，24mgNHS，在室溫條件下攪拌2小時(shí)，得桔黃色溶液C；?(4)將溶液C轉(zhuǎn)移到透析袋中，之后用PBS緩沖液在溫度為0?4℃的條件下透析五天，每12小時(shí)更換一次PBS緩沖液，將透析后的溶液凍干，得到淡黃色固體粉末即為免疫原，將免疫原放置在溫度為?20℃的條件下保存，備用；所述PBS緩沖液的pH值為7.4，濃度為0.01mol/L；?所述包被抗原的制備方法，包括以下步驟：(1)稱取9mg的NaNO2加入到體積為3mL的蒸餾水中，制得NaNO2溶液，然后稱取10mg的玉米赤酶烯酮加入到體積為1.6mL、濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液中，在溫度為0?4℃的條件下攪拌均勻，制得赤酶烯酮溶液，將NaNO2溶液逐滴加入赤酶烯酮溶液中，避光反應(yīng)0.5小時(shí)，之后向該溶液中加入25mg硫酸銨直至無(wú)氮?dú)夥懦觯频萌芤篋；(2)稱取70mg卵清蛋白加入到4mL的PBS緩沖溶液中，所述PBS緩沖溶液的濃度為0.1mol/L，pH值為7.5，然后將溶液D逐滴加入到該溶液中，制得混合液,然后用濃度為1mol/L的氫氧化鈉溶液將混合液的pH值調(diào)至7.5，并在溫度為0?4℃的條件下避光反應(yīng)18小時(shí)，制得溶液E；?(3)將溶液E轉(zhuǎn)移到透析袋中，并在溫度為0?4℃的條件下，用濃度為0.01mol/L，pH值為7.4的PBS緩沖液透析五天，每12小時(shí)更換一次PBS緩沖液，之后將透析液置于轉(zhuǎn)速為3000r/min的離心機(jī)中離心15分鐘，提取上清液并凍干，得到淡黃色固體粉末即為包被抗原，之后將包被抗原置于溫度為?20℃的條件下保存，備用。...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種玉米赤酶烯酮化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑盒，由發(fā)光板、試劑和盒體構(gòu)成，試劑放置在盒體中，其特征在于:所述試劑由辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體、玉米赤酶烯酮標(biāo)準(zhǔn)溶液、濃縮磷酸鹽緩沖液、濃縮洗滌液、化學(xué)發(fā)光底物液和包被抗原組成，所述辣根過(guò)氧化酶標(biāo)記的玉米赤酶烯酮多克隆抗體為以玉米赤酶烯酮與卵清蛋白偶聯(lián)作為免疫原的大白兔抗體； 所述玉米赤酶烯酮與卵清蛋白偶聯(lián)的免疫原制備方法，包括以下步驟: (1)稱取IOmg的對(duì)氨基苯甲酸加入到體積為1.1mL的氯化銨溶液中，制得對(duì)氨基苯甲酸溶液；之后稱取6mg的NaNO2加入到體積為0.35mL的蒸餾水中，在溫度為0_4°C的條件下攪拌均勻，制得NaNO2溶液；將NaNO2溶液逐滴加入到對(duì)氨基苯甲酸溶液中，避光反應(yīng)I小時(shí)，得溶液A ; (2)量取2.4μ L玉米赤酶烯酮溶液加入到體積為IOmL的硼砂緩沖液中，并在溫度為0-4°C下攪拌均勻，之后向該溶液中逐滴加入0.9mL的溶液A，避光反應(yīng)2小時(shí)，得到桔黃色溶液B ;所述硼砂緩沖液的濃度為0.05mol/L, pH值為8.5，硼砂緩沖液中含有濃度為0.15mol/L 的 NaCl ； (3)向溶液B中加入H3BO3晶體直至溶液B的pH值為7.4，之后向調(diào)過(guò)pH值的溶液B中加入94mgBSA，80mgEDC, 24mgNHS,在室溫條件下攪拌2小時(shí)，得桔黃色溶液C ； (4)將溶液C轉(zhuǎn)移到透析袋中，之后用PBS緩沖液在溫度為0-4°C的條件下透析五天，每12小時(shí)更換一次PBS緩沖液，將透析后的溶液凍干，得到淡黃色固體粉末即為免疫原，將免疫原放置在溫度為_(kāi)20°C的條件下保存，備用；所述PBS緩沖液的pH值為7.4，濃度為0.01mol/L ； 所述包被抗原的制備方法，包括以下步驟: (1)稱取9mg的NaNO2加入到體積為3mL的蒸餾水中，制得NaN02溶液，然后稱取IOmg的玉米赤酶烯酮加入到體積為1.6mL、濃度為0.2mol/L的鹽酸溶液中，在溫度為...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王善普，張江宏，智雪玲，王慶利，張興偉，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：洛陽(yáng)萊普生信息科技有限公司，
類(lèi)型：發(fā)明
國(guó)別省市：
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