【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】核酸的分離本專利技術(shù)要求美國臨時(shí)專利申請序列號61/485，214,61/485, 338,61/485, 386、和61/485，448的權(quán)益，其每一項(xiàng)均于2011年5月12日提交，并且其每一項(xiàng)通過引用整體并入本文。領(lǐng)域本文提供了與分離核酸相關(guān)的技術(shù)。具體地，本技術(shù)涉及從成問題的樣品例如糞便提取核酸的方法和試劑盒。專利技術(shù)背景從樣品分離特定的靶核酸是許多醫(yī)學(xué)診斷測定中的重要步驟。例如，已知基因中的某些突變和甲基化狀態(tài)是與疾病相關(guān)、伴隨或預(yù)兆性的。可從樣品中回收包含這些基因的DNA并且測試具體突變和甲基化狀態(tài)的存在。實(shí)際上，這些測定需要從樣品分離并測定若干基因靶。對于許多檢測方法來說，檢測單個(gè)基因中的罕有突變或甲基化狀態(tài)需要分離并且測試大量的DNA。這一問題在測定一組基因時(shí)被加劇，所述基因中的每一個(gè)必須大量存在以用于穩(wěn)健的診斷測試。因此，為了檢測多個(gè)基因中的罕見突變和甲基化事件，所分離的DNA必須被高度濃縮并且組成檢測測定的很大部分。然而，這一需求帶來了許多問題。例如，制備這樣的量和濃度的DNA需要大的樣品作為投入物(例如具有幾克例如大約2-4克的質(zhì)量)以提供足夠核酸用于檢測并且因此需要可從大的樣品制備DNA的方法。`此外，測定抑制劑常常隨著DNA制品一起被分離和濃縮。因此，通過常規(guī)方法生產(chǎn)的濃縮的DNA制品同樣常常保留不可接受的濃度的抑制劑，其之后被引入隨后的測定中。而且，如果在大批的非選擇性的DNA制品中同時(shí)提取組中的所有靶，那么測定的敏感度受損，因?yàn)楫?dāng)制品被分為等份用于測試時(shí)測定中存在是較少的從組中任一種基因提取的DNA。如果另一方面，組中的所有成員被...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種旋轉(zhuǎn)過濾器，其包括：a)中空主體；b)底部末端；和c)與所述底部末端相對的開放的頂部末端，其中所述中空主體由多孔的過濾材料制得。
【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2011.05.12 US 61/485,214;2011.05.12 US 61/485,3381.一種旋轉(zhuǎn)過濾器，其包括: a)中空主體； b)底部末端；和 c)與所述底部末端相對的開放的頂部末端， 其中所述中空主體由多孔的過濾材料制得。2.如權(quán)利要求1所述的旋轉(zhuǎn)過濾器，其中所述底部末端由多孔的過濾材料制得。3.如權(quán)利要求1所述的旋轉(zhuǎn)過濾器，其中所述多孔的過濾材料是聚乙烯。4.如權(quán)利要求1所述的旋轉(zhuǎn)過濾器，其中所述多孔的過濾材料具有20微米的標(biāo)稱孔徑。5.如權(quán)利要求1所述的旋轉(zhuǎn)過濾器，其中所述底部末端具有選自由半球形、盤形、錐形或橢圓體的一部分組成的組的形狀。6.一種旋轉(zhuǎn)過濾器組件，其包含如權(quán)利要求1所述的旋轉(zhuǎn)過濾器和適合容納所述旋轉(zhuǎn)過濾器的收集容器。7.一種從樣品產(chǎn)生濾液的方法，所述方法包括: a)將有待過濾的樣品放置在根據(jù)權(quán)利要求1所述的旋轉(zhuǎn)過濾器中；并且 b)離心所述旋轉(zhuǎn) 過濾器， 其中在所述過濾期間，所述樣品的一部分經(jīng)過所述旋轉(zhuǎn)過濾器的多孔的過濾材料以產(chǎn)生濾液。8.—種從包含核酸的粗制樣品制品除去測定抑制劑的方法，所述方法包括: a)在分離所述核酸之前將不溶的聚乙烯吡咯烷酮在所述測定抑制劑與所述聚乙烯吡咯烷酮結(jié)合產(chǎn)生復(fù)合物的條件下加至所述粗制的樣品制品； b)將所述復(fù)合物從所述粗制樣品制品分離以產(chǎn)生含有所述核酸的澄清的樣品制品。9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述粗制樣品制品是從糞便樣品制備的上清液。10.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述糞便樣品具有至少4克的質(zhì)量。11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中所述糞便樣品具有至少8克的質(zhì)量。12.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述聚乙烯吡咯烷酮是聚乙烯聚吡咯烷酮。13.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述分離包括離心。14.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述澄清的樣品制品是根據(jù)權(quán)利要求7生產(chǎn)的。15.如權(quán)利要求8所述的方法，其中所述聚乙烯吡咯烷酮包含具有約100微米至約130微米的平均直徑的顆粒。16.一種用于從包含核酸的粗制樣品制品除去測定抑制劑的系統(tǒng)，所述系統(tǒng)包括: a)用于結(jié)合所述測定抑制劑并且產(chǎn)生復(fù)合物的不溶的聚乙烯吡咯烷酮； b)將所述復(fù)合物從所述粗制樣品制品分離以產(chǎn)生包含所述核酸的澄清的樣品制品的功能性；和 c)保留包含所述核酸的澄清的樣品制品的功能性。17.如權(quán)利要求16所述的系統(tǒng)，其中所述聚乙烯吡咯烷酮是聚乙烯聚吡咯烷酮。18.如權(quán)利要求16所述的系統(tǒng)，其中所述聚乙烯吡咯烷酮是預(yù)量形式的。19.如權(quán)利要求16所述的系統(tǒng)，其中所述聚乙烯吡咯烷酮作為片劑提供。20.如權(quán)利要求16所述的系統(tǒng)，其中所述分離所述復(fù)合物的功能性包括根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一項(xiàng)所述的旋轉(zhuǎn)過濾器。21.如權(quán)利要求16所述的系統(tǒng)，其中所述保留包含所述核酸的澄清的樣品制品的功能性是根據(jù)權(quán)利要求6所述的收集容器。22.—種從糞便樣品分離許多不同靶核酸的方法，所述方法包括: a)將包含多個(gè)不同靶核酸的糞便樣品制品與第一靶特異性捕獲試劑在第一靶核酸與所述第一靶特異性捕獲試劑結(jié)合形成第一復(fù)合物的條件下接觸； b)將所述第一復(fù)合物從所述糞便樣品分離以產(chǎn)生第一殘留糞便樣品制品； c)將所述第一殘留糞便樣品制品與第二靶特異性捕獲試劑在第二靶核酸與所述第二靶特異性捕獲試劑結(jié)合形成第二復(fù)合物的條件下接觸； d)將所述第二復(fù)合物從所述第一殘留糞便樣品分離以產(chǎn)生第二殘留糞便樣品制品； e)將所述第一靶核酸從所述第一復(fù)合物洗脫以產(chǎn)生第一靶核酸溶液；和 f)將所述第二靶核酸從所述第二復(fù)合物洗脫以產(chǎn)生第二靶核酸溶液。23.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述糞便樣品制品是根據(jù)權(quán)利要求8、9、10、11、12、13、14或15生產(chǎn)的澄清的樣品制品。24.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述第一靶核酸和/或第二核酸是人類核酸。25.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述第一靶核酸和/或第二靶核酸是DNA。26.如權(quán)利要求22所述的方法，其還包括下列步驟: g)將所述第二殘留糞便樣品制品與第三靶特異性捕獲試劑在第三靶核酸與所述第三靶特異性捕獲試劑結(jié)合形成第三復(fù)合物的條件下接觸； h)將所述第三復(fù)合物從所述第二殘留糞便樣品分離以產(chǎn)生第三殘留糞便樣品制品；和 i)將所述第三靶核酸從所述第三復(fù)合物洗脫以產(chǎn)生第三靶核酸溶液；27.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述第一靶特異性捕獲試劑和/或所述第二靶特異性捕獲試劑包含寡核苷酸。28.如權(quán)利要求27所述的方法，其中所述寡核苷酸與表面共價(jià)連接。29.如權(quán)利要求28所述的方法，其中所述表面是磁性顆?；蝽槾判灶w粒。30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中所述分離所述第一復(fù)合物和/或所述分離所述第二復(fù)合物包括將所述第一復(fù)合物和/或所述第二復(fù)合物暴露于磁體。31.如權(quán)利要求22所述的方法，其中所述糞便樣品制品包含異硫氰酸胍。32.如權(quán)利要求31所述的方法，其還包括在所述接觸步驟a和c之前將所述糞便樣品制品暴露于將核酸變性的條件下的步驟。33.如權(quán)利要求32所述的方法，其中所述將核酸變性的條件包括在90°C加熱至少10分鐘。34.如權(quán)利要求26所述的方法，其還包括下列步驟: j)將第n殘留糞便樣品制品與第n+1靶特異性捕獲試劑在第n+1靶核酸與所述第n+1靶特異性捕獲試劑結(jié)合形成第n+1復(fù)合物的條件下接觸； k)將所述第n+1復(fù)合物從所述第n殘留糞便樣品分離以產(chǎn)生第n+1殘留糞便樣品制品; 1)將所述第n+1靶核酸從所述第n+1復(fù)合物洗脫以產(chǎn)生第n+1靶核酸溶液，其中η大于或等于3。35.如權(quán)利要求22、26或34中任一項(xiàng)所述的方法，其中所述接觸步驟a、c和/或j包括將與所述第一靶特異性捕獲試劑、所述第二靶特異性捕獲試劑和/或所述第n+1靶特異性捕獲試劑接觸的所述糞便樣品制品、所述第一殘留糞便樣品制品和/或所述第η殘留糞便樣品制品于室溫孵育I小時(shí)。36.一種從人類糞便樣品分離靶人類DNA的方法，所述方法包括: a)從人類受試者獲得具有至少4克質(zhì)量的糞便樣品； b)將所述糞便樣品在勻漿緩沖液中勻漿化以產(chǎn)生勻漿化的糞便樣品； c)從所述勻漿化的糞便樣品制備糞便上清液； d)用PVP處理所述糞便上清液以產(chǎn)生澄清的糞便上清液； e)將異硫氰酸胍加至10毫升的澄清的糞便上清液以產(chǎn)生含有2-3M異硫氰酸胍的樣品溶液； f)將所述樣品溶液加熱至90°C持續(xù)10分鐘； g)向所述樣品溶液加入含有與磁性顆粒共價(jià)連接的寡核苷酸的靶特異性捕獲試劑，其中所述寡核苷酸與所述靶人類DNA的至少一部分互補(bǔ)； h)將所述樣品溶液與所述靶特異性捕獲試劑于室溫孵育約I小時(shí)以產(chǎn)生包含所述靶特異性捕獲試劑和所述靶人類DNA的復(fù)合物； i)將包含所述復(fù)合物的所述樣品溶液暴露于磁場以將所述復(fù)合物與所述樣品溶液分離并且保留所述樣品溶液； j)將所述靶人類DNA從所述復(fù)合物洗脫以產(chǎn)生包含所述靶核酸，當(dāng)存在時(shí)，的靶核酸溶液； k)在每一步驟g中使用不同的靶特異性捕獲試劑來重復(fù)所述方法的步驟f_j以在每一步驟j中產(chǎn)生不同的靶核酸溶液；和 I)在每個(gè)不同的靶核酸溶液上進(jìn)行核酸檢測反應(yīng)，其中每個(gè)所述核酸檢測反應(yīng)的體積的至少三分之一來自所述靶核酸溶液。37.如權(quán)利要求36所述的方法，其中所述靶人類DNA來自與選自由結(jié)腸直腸癌和結(jié)腸直腸腺瘤組成的組的疾病狀態(tài)相關(guān)的基因。38.如權(quán)利要求36所述的方法，其中進(jìn)行所述重復(fù)步驟k)n次以產(chǎn)生n+1種不同的靶核酸溶液。39.如權(quán)利要求38所述的方法，其中η至少為3。40.一種從樣品分離靶核酸的方法，所述方法包括: a)從所述樣品除去測定抑制劑以產(chǎn)生澄清的樣品制品； b)靶特異性捕獲試劑從所述澄清的樣品制品捕獲所述靶核酸以形成捕獲復(fù)合物； c)從所述澄清的樣品制品分離所述捕獲復(fù)合物；和 d)從核酸溶液中的所述捕獲復(fù)合物回收所述靶核酸。41.如權(quán)利要求40所述的方法，其還包括: e)在所述分離步驟之后保留殘留的澄清樣品制品； f)使用所述殘留的澄清樣品和第二捕獲試劑重復(fù)所述捕獲、分離和回收步驟。42.如權(quán)利要求40所述的方法，其中從所述樣品除去所述測定抑制劑包括:al)將所述樣品勻漿化以產(chǎn)生勻漿； a2)離心所述勻漿以產(chǎn)生上清液； a3)用抑制劑吸收組合物處理所述上清液以結(jié)合抑制劑復(fù)合物中的抑制劑，如果存在的話；和 a4)從所述上清液分離所述抑制劑復(fù)合物以產(chǎn)生澄清的樣品制品。43.如權(quán)利要求42所述的方法，其中所述抑制劑吸收組合物是聚乙烯吡咯烷酮。44.如權(quán)利要求43所述的方法，其中所述聚乙烯吡咯烷酮是不溶的。45.如權(quán)利要求43所述的方法，其中所述聚乙烯吡咯烷酮是聚乙烯聚吡咯烷酮。46.如權(quán)利要求43所述的方法，其中所述聚乙烯吡咯烷酮以預(yù)量的形式提供。47.如權(quán)利要求43所述的方法，其...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：JJ布魯因斯馬，MJ多瑪尼科，GP里德加德，鄒鴻志，WG維斯伯格，HD舍諾伊，JP萊特二世，
申請(專利權(quán))人：精密科學(xué)公司，
類型：
國別省市：
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