本發明專利技術公開了一種檢測個體葉酸代謝障礙的試劑盒。包括同時檢測5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rs1801133號SNP位點、5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rs1801131號SNP和甲硫氨酸合成酶還原酶基因上rs1801394號SNP位點的特異性引物對及SYBRGreenⅠ熒光染料、用于實時定量PCR檢測的常規組件等。本發明專利技術的試劑盒通過同時檢測與葉酸代謝的5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因和甲硫氨酸合成酶還原酶基因的單核苷酸多態性位點基因型來評估個體葉酸代謝能力。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了一種檢測個體葉酸代謝障礙的試劑盒。包括同時檢測5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rs1801133號SNP位點、5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rs1801131號SNP和甲硫氨酸合成酶還原酶基因上rs1801394號SNP位點的特異性引物對及SYBRGreenⅠ熒光染料、用于實時定量PCR檢測的常規組件等。本專利技術的試劑盒通過同時檢測與葉酸代謝的5,10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因和甲硫氨酸合成酶還原酶基因的單核苷酸多態性位點基因型來評估個體葉酸代謝能力。【專利說明】一種檢測個體葉酸代謝障礙的試劑盒
本專利技術涉及分子生物學和醫學領域，更具體的，本專利技術涉及一種檢測個體葉酸代謝障礙的試劑盒，通過同時檢測與葉酸代謝能力密切相關的5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶還原酶基因(MTRR)上的單核苷酸多態性位點基因型來評估個體葉酸代謝能力。
技術介紹
葉酸是人體在利用糖分和氨基酸時的必要物質，是機體細胞生長和繁殖所必須的物質。在體內葉酸以四氫葉酸的形式起作用，四氫葉酸在體內參與嘌呤核酸和嘧啶核苷酸的合成和轉化。葉酸在制造核酸(核糖核酸、脫氧核糖核酸)上扮演重要的角色。葉酸幫助蛋白質的代謝，并與維生素B12共同促進紅細胞的生成和成熟，是制造紅血球不可缺少的物質。葉酸也作為干酪乳桿菌(Lactobacillus casei)及其它微生物的促進增殖因子而起作用。葉酸對細胞的分裂生長及核酸、氨基酸、蛋白質的合成起著重要的作用。人體缺少葉酸可導致紅血球的異常，未成熟細胞的增加，貧血以及白血球減少。葉酸是胎兒生長發育不可缺少的營養素。孕婦缺乏葉酸有可能導致胎兒出生時出現低體重、唇腭裂、心臟缺陷等。如果在懷孕頭3個月內缺乏葉酸，可引起胎兒神經管發育缺陷，而導致畸形。因此，準備懷孕的女性，可在懷孕前就開始每天服用400微克葉酸。但目前已知育齡婦女服用葉酸增補劑時由于個人的遺傳體質不同，存在葉酸代謝能力的差異，不同人群所需葉酸劑量不能一概而論。如服用劑量不足實際需求，達不到補充葉酸的效果；而盲目過量服用高濃度葉酸，會干擾孕婦的營養元素代謝，同樣會影響胎兒發育，超量服用葉酸也會引起藥品不良反應，反而會對孕婦和胎兒造成嚴重不良后果。所以不同遺傳體質的育齡婦女必須根據自身對葉酸代謝情況，有的放矢地補充所需要的葉酸。因此，選取與育齡婦女孕`前/孕期以及胎兒發育所需的葉酸代謝密切相關且研究明確的一些重要基因位點，綜合利用現代科學研究成果，開發一項基于分子遺傳基礎的檢測個體葉酸代謝障礙的試劑盒，通過此檢測報告還可以幫助醫師針對不同體質的育齡婦女指導她們補充適量的葉酸，具有很強的社會意義和廣闊的市場前景。目前，經證實并且機理研究清楚的與葉酸代謝密切相關的基因有:5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶還原酶基因(MTRR)。MTHFR 為 5,10 — methylenetetrahydrofolate reductase (NADPH)(亞甲基四氫葉酸還原酶)蛋白編碼基因，主要作用是在葉酸代謝通路中將5，10-亞甲基四氫葉酸轉化為具有生物學功能的5-甲基四氫葉酸鹽。5-甲基四氫葉酸鹽可以進一步進入甲基傳遞通路，通過同型半胱氨酸的重新甲基化過程間接的為DNA甲基化和蛋白質甲基化提供甲基并且使血液中的同型半胱氨酸量保持在一個較低的水平。研究發現，MTHFR基因存在多種多態型，影響MTHFR活性和熱穩定性。常見的變異包括:(1)677 C-T =MTHFR基因第677位密碼子胞嘧啶(C)被胸腺嘧啶(T)替代，編碼后酶分子中丙氨酸被纈氨酸替代，引起MTHFR熱穩定性和活性降低，相對于正常的C/C基因型，純合子T/T基因型MTHFR活性在37攝氏度降低50%~60%，在46攝氏度降低65% ；(2) 1298 A-C:編碼后酶分子中谷氨酸被丙氨酸替代，引起MTHFR活性降低。1298 A-C與677 C-T不同的是，純合子和雜合子血漿同型半胱氨酸升高和葉酸降低均不明顯。然而，如果同時存在1298 A-C和677 C-T復合變異的雜合子，則MTHFR活性低于野生型40%。甲硫氨酸是蛋白質合成和一碳代謝的必需氨基酸，它的合成是由甲硫氨酸合酶(MTR編碼)催化的，而甲硫氨酸合酶因為輔助因子維生素B12被氧化而最終失活。MTRR編碼的甲硫氨酸合成酶還原酶能夠通過還原型甲基化作用重新生成具有功能活性的甲硫氨酸合酶。MTRR能夠保持甲基鈷銨III在一定水平，而甲基鈷銨III是激活蛋氨酸合成酶的輔助因子，它可催化同型半胱氨酸再甲基化生成蛋氨酸。MTRR變異是造成葉酸/甲基維生素缺乏癥E型的主要原因。MTRR 66A — G多態性，導致蛋氨酸被異亮氨酸替代，使該酶活性降低。該基因型對同型半胱氨酸水平有顯著影響。有研究指出，MTRR基因A66G多態，血漿同型半胱氨酸增高，基因型為MTRR 66GG，MTRR 66AG的孕婦或胎兒發生神經管畸形的危險性較正常對照組增加。
技術實現思路
基于5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因(MTHFR)、甲硫氨酸合成酶還原酶基因(MTRR)上的3個SNP位點多態性可用來評估葉酸代謝遺傳能力的基礎，本專利技術提供一種檢測個體葉酸代謝障礙的試劑盒。該試劑盒包括: 檢測5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rsl801133號SNP多態性基因型的特異性引物對；` 檢測5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rsl801131號SNP多態性基因型的特異性引物對；檢測甲硫氨酸合成酶還原酶基因上rsl801394號SNP多態性基因型的特異性引物對；實時定量PCR反應組件(包括ddH20、Buffer、MgCl2溶液、dNTPs、Taq酶、SYBR染料等)本試劑盒中所述的特異性引物對是指針對5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rsl801133號和rsl801131號SNP位點、甲硫氨酸合成酶還原酶基因上rsl801394號SNP位點而設計，能使用SYBR Green熒光 PCR技術特異性檢測出這三個SNP位點基因型的引物對。設計這類引物是本領域技術人員能夠輕易完成的，并可用常規的引物合成技術進行合成。優選的，檢測5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rsl801133號SNP多態性基因型的特異性引物對為:有義引物 1-1:GAGGAGCTGACCAGTGAGGA (SEQ ID NO:1)有義引物 1-2:GAGGAGCTGACCAGTGAGGC (SEQ ID NO:2) 反義引物 1:CITTGTGACCAITCCGGITT (SEQ ID NO:3) 優選的，檢測5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rsl801131號SNP多態性基因型的特異性引物對為: 有義引物 2-1:AGCTGCGTGATGATGAAATAGA (SEQ ID N0:4)有義引物 2-2:AGCTGCGTGATGATGAAATAGG (SEQ ID NO:5)反義引物 2:TATTGGCAGGTTACCCCAAA (SEQ ID NO:6)優選的，檢測甲硫氨酸合成酶還原酶基因上rsl801394號SNP多態性基因型的特異性引物對為:有義引物 3-1:CATGTACCACA本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種檢測個體葉酸代謝障礙的試劑盒，其特征在于：包括同時檢測5,10?亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rs1801133號SNP位點、5,10?亞甲基四氫葉酸還原酶基因上rs1801131號SNP和甲硫氨酸合成酶還原酶基因上rs1801394號SNP位點的特異性引物對及SYBR?GreenⅠ熒光染料、ddH2O、Buffer、MgCl2溶液、dNTPs、Taq酶。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：楊玉華，
申請(專利權)人：浙江愛易生物醫學科技有限公司，
類型：發明
國別省市：浙江;33
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