人源化免疫調(diào)節(jié)單克隆抗體的變體制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及人源化單克隆抗體，包含該人源化單克隆抗體的藥物組合物，和其用于治療多種適應(yīng)癥、特別是癌癥和免疫缺陷疾患的用途。特別地，本發(fā)明專利技術(shù)提供了與被稱為hBAT-1的人源化單克隆免疫調(diào)節(jié)抗體相比，具有特定氨基酸修飾的經(jīng)修飾的抗體或其片段。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】人源化免疫調(diào)節(jié)單克隆抗體的變體專利
本專利技術(shù)涉及免疫治療領(lǐng)域且更具體地涉及用于多種適應(yīng)癥的治療、特別是在癌癥和免疫缺陷疾患的治療中有用的人源化單克隆抗體。專利技術(shù)背景最近幾年中，關(guān)于免疫調(diào)節(jié)、特別是在T細(xì)胞應(yīng)答水平的分子和細(xì)胞基礎(chǔ)的快速增長的了解，提供了包括抗腫瘤疫苗的研發(fā)的免疫治療方法的新的武器(arsenal)。某些單克隆抗體顯示具有免疫調(diào)節(jié)活性，包括結(jié)合T細(xì)胞的表面的決定簇和誘導(dǎo)這些細(xì)胞的增殖、活化、成熟或分化的能力。BAT(也稱為mBAT-1或BAT-1)是針對Burkitt淋巴瘤細(xì)胞系(Daudi)的膜制備物產(chǎn)生的顯示呈現(xiàn)針對多種類型的腫瘤的抗腫瘤和免疫刺激效果的鼠(murine)單克隆抗體(Hardy等人，2001,Int.J.Oncol.19:897)。該單克隆抗體最初在Hardy等人的美國專利號5,897,862中被公開。BAT-1由具有CNCM登錄號I-1397的雜交瘤細(xì)胞系分泌。還體外研究了鼠BAT的免疫調(diào)節(jié)作用。鼠BAT活化CD4+T細(xì)胞并誘導(dǎo)IFN-γ從這些細(xì)胞的分泌(Hardy等人，2000,Int.Immunol.12:1623和QuaglinoE.等人，2005,Vaccine9:23(25):3280-7)。另外，發(fā)現(xiàn)BAT觸發(fā)T細(xì)胞的增殖并增加它們的細(xì)胞溶解活性(Hardy,B.等人，1997,Hum.Antibodies,8:95)。在Hardy等人的WO00/58363和美國專利號7,695,715中公開了鼠BAT的多核苷酸和氨基酸序列。基于鼠BAT的一些人源化單克隆抗體(mAb)在美國專利號7,332,582中被公開，其內(nèi)容通過引用并入本文。在美國7,332,582的特定實(shí)施方案中，人源化單克隆抗體包含選自SEQIDNO:1-4的輕鏈可變區(qū)(分別表示為BATRKD、BATRKA、BATRKB和BATRKC)和選自SEQIDNO:5-9的重鏈可變區(qū)(分別表示為BATRHC、BATRHA、BATRHB、BATRHD和BATRHE)。在本文以下的表1中描繪輕鏈和重鏈抗體變體的氨基酸序列。用灰色背景描繪所述可變區(qū)中不同的殘基(輕鏈區(qū)的位置2、30、69、77、97和98和重鏈的位置35、69、70和71)。根據(jù)美國7,332,582，人源化單克隆BAT抗體呈現(xiàn)誘導(dǎo)大于由親本鼠BAT抗體誘導(dǎo)的抗腫瘤作用的抗腫瘤作用。在檢測的多種模式系統(tǒng)中，在SCID(嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷型疾病)小鼠、NK細(xì)胞缺陷的淺褐色小鼠和T細(xì)胞缺陷的裸鼠(nudemice)中研究了BAT抗腫瘤活性(Hardy,B.,1997,Proc.Natl.Acad.Sci.USA94:5756)。用隨后在肺中形成腫瘤的鼠B16黑色素瘤細(xì)胞靜脈注射所有小鼠。BAT抗體僅在用鼠或人淋巴細(xì)胞移植的SCID小鼠中發(fā)揮抗腫瘤作用。在無胸腺裸鼠和淺褐色小鼠中BAT抗體發(fā)揮抗腫瘤活性，盡管與BAT抗體在野生型小鼠中的抗腫瘤活性相比，該活性的效果更低。應(yīng)該牢牢記住的是BAT抗體不是預(yù)期靶向腫瘤細(xì)胞本身而是靶向受試者或患者的免疫功能細(xì)胞，以便以有益的方式調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。Berger等人(2008)公開了向患有晚期血液系統(tǒng)惡性腫瘤的患者施用基于mBAT-1的人源化單克隆抗體CT-011和相關(guān)的藥代動力學(xué)(Berger等人，Clin.CancerRes.2008；14(10)2008年5月15日)。WO09/101611涉及用于抑制腫瘤生長、增加患有腫瘤的受試者的存活并針對哺乳動物中腫瘤復(fù)發(fā)誘導(dǎo)保護(hù)的方法，包括施用包含源自指定為mBAT-1的鼠單克隆抗體的CDR區(qū)的人源化單克隆抗體與至少一種化療劑的組合。在任何地方的
技術(shù)介紹
中都沒有教導(dǎo)或表明，使用包含至少一個(gè)位點(diǎn)特異性的氨基酸修飾的人源化mBAT-1單克隆抗體將對多種適應(yīng)癥的治療、特別是在癌癥和免疫缺陷相關(guān)的疾病和疾患的治療中是有益的。專利技術(shù)概述本專利技術(shù)提供了突變的人源化單克隆抗體或其片段，與已知的人源化單克隆抗體hBAT-1相比，其具有位點(diǎn)特異性氨基酸修飾，包括但不限于，氨基酸取代和缺失。本專利技術(shù)還提供了包含經(jīng)修飾的抗體或其片段的藥物組合物，和其用于癌癥和免疫缺陷疾患的治療的用途。在一些實(shí)施方案中，本專利技術(shù)的經(jīng)修飾的抗體保持hBAT-1的免疫調(diào)節(jié)活性，結(jié)合B淋巴母細(xì)胞并誘導(dǎo)外周血淋巴細(xì)胞的增殖和活化。本專利技術(shù)的抗體憑借hBAT-1抗體變體的至少一個(gè)氨基酸的特定修飾，如本文以下的詳細(xì)說明，顯示優(yōu)越的特征，例如，增強(qiáng)的生物活性和穩(wěn)定性和/或減少的免疫原性。表1-已知的hBAT-1輕鏈和重鏈的可變區(qū)和恒定區(qū)表1列出hBAT-1抗體變體的輕鏈和重鏈的可變區(qū)和恒定區(qū)的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，被取代以制備本專利技術(shù)的抗體的至少一個(gè)氨基酸呈粗體描繪。在特定實(shí)施方案中，至少一個(gè)氨基酸選自由以下組成的組：SEQIDNO:1的位置5、20、71、75、76、93和97處的氨基酸；SEQIDNO:5的位置54、55和107處的氨基酸；SEQIDNO:11的位置157、158、169、170處的氨基酸；和SEQIDNO:13的位置120、124、159、160、203、204、221、222、225、252、270、271、280、281、297、298、315、316、384、385、399、400、401、402、434、435、447和428處的氨基酸。根據(jù)一個(gè)方面，本專利技術(shù)提供了包含選自由SEQIDNO:1、2、3和4組成的組的輕鏈可變區(qū)和選自由SEQIDNO:5、6、7、8和9組成的組的重鏈可變區(qū)的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中該抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自輕鏈可變區(qū)的Phe97和Phe93位置處到Ala、Leu或Val的至少一個(gè)氨基酸取代，或重鏈可變區(qū)的Trp107到Ala、Leu、Val或Tyr的取代。在本專利技術(shù)的一些實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)的Phe97的氨基酸取代和重鏈可變區(qū)的Trp107的氨基酸取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段包含輕鏈可變區(qū)的Phe93的氨基酸取代和重鏈可變區(qū)的Trp107的氨基酸取代。在另一個(gè)實(shí)施方案中，輕鏈可變區(qū)包含選自由以下組成的組的氨基酸序列：SEQIDNO:14、15、16、17、18、19、20和21。在一個(gè)實(shí)施方案中，輕鏈可變區(qū)包含如在SEQIDNO:14中展示的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，輕鏈可變區(qū)包含如在SEQIDNO:15中展示的氨基酸序列。在特定實(shí)施方案中，輕鏈可變區(qū)包含如在SEQIDNO:29中展示的氨基酸序列。在又另一個(gè)特定實(shí)施方案中，輕鏈可變區(qū)包含如在SEQIDNO:30中展示的氨基酸序列。在另一個(gè)實(shí)施方案中，重鏈可變區(qū)包含選自由以下組成的組的氨基酸序列：SEQIDNO:24、25、26、27和28。在特定實(shí)施方案中，重鏈可變區(qū)包含如在SEQIDNO:24中展示的氨基酸序列。在又另一個(gè)特定實(shí)施方案中，重鏈可變區(qū)包含如在SEQIDNO:31中展示的氨基酸序列。在又另一個(gè)實(shí)施方案中，抗體或其抗原結(jié)合片段還包含選自由以下組成的組的位置處的至少一個(gè)氨基酸取代：輕鏈可變區(qū)的Thr5、Thr20、Cys71、Asn75、Ser76和重鏈可變區(qū)的Asp54和Ser55。根據(jù)另一個(gè)方面，本專利技術(shù)提供了包含選自由SEQIDNO:1本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自由SEQ?ID?NO:1、2、3和4組成的組的輕鏈可變區(qū)和選自由SEQ?ID?NO:5、6、7、8和9組成的組的重鏈可變區(qū)，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含選自以下位置處的至少一個(gè)氨基酸取代：所述輕鏈可變區(qū)的Phe97和Phe93到Ala、Leu或Val，或所述重鏈可變區(qū)的Trp107到Ala、Leu、Val或Tyr的取代。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】2011.07.24 US 61/511,0551.一種抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含SEQIDNO:1所列的輕鏈可變區(qū)，其中Phe97被Ala取代；和SEQIDNO:5所列的重鏈可變區(qū)，其中Trp107被Ala取代。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有與mBAT-1相似的、或大于mBAT-1的抗腫瘤活性。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段具有與hBAT-1相似的、或大于hBAT-1的抗腫瘤活性。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗原結(jié)合片段選自由以下組成的組：Fv、F(ab')、F(ab')2和單鏈抗體。5.一種編碼根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段的多核苷酸序列。6.一種包含根據(jù)權(quán)利要求5所述的多核苷酸序列的載體。7.一種含有包含根據(jù)權(quán)利要求5所述的多核苷酸序列的載體的宿主細(xì)胞。8.一種藥物組合物，所述藥物組合物包含根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的抗體或其抗原結(jié)合片段作為活性成分、和藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或穩(wěn)定劑。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物組合物，所述藥物組合物用于治療有相應(yīng)需要的受試者的癌癥或免疫缺陷疾患。10.根...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：R·羅泰姆耶胡達(dá)，邁克爾·席克勒爾，
申請(專利權(quán))人：治療科技公司，
類型：發(fā)明
國別省市：以色列;IL