黃瑞香種子生活力的測定方法技術

本發明專利技術公開了屬于中藥材種子質量鑒定及栽培領域的一種黃瑞香種子生活力的測定方法。該方法包括：扦種、凈度處理、種子消毒、種子預浸泡、硬實破除、種皮處理、染色、生活力測定。本發明專利技術的方法能快速有效的對黃瑞香種子進行生活力測定，減少其他測定方法對黃瑞香種子的損傷及致死，減少操作過程中的作業危險，簡便易行，原理可靠，工作效率高，重復性好。本發明專利技術中黃瑞香種子的生活力為94.5%。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了屬于中藥材種子質量鑒定及栽培領域的一種。該方法包括：扦種、凈度處理、種子消毒、種子預浸泡、硬實破除、種皮處理、染色、生活力測定。本專利技術的方法能快速有效的對黃瑞香種子進行生活力測定，減少其他測定方法對黃瑞香種子的損傷及致死，減少操作過程中的作業危險，簡便易行，原理可靠，工作效率高，重復性好。本專利技術中黃瑞香種子的生活力為94.5%。【專利說明】
本專利技術屬于中藥材種子質量鑒定及栽培領域，特別涉及一種。技術背景黃瑞香(Daphne giraldii Nitsche)屬瑞香科瑞香屬植物,別名打結花、結香。分布在我國陜西、甘肅、青海、河南等省份，甘肅省主要分布在祁連山等海拔2000~2600m的山坡灌叢、林緣、溝谷地帶。黃瑞香的根皮和莖皮，為民間治療風濕和止痛的常用中藥，俗稱祖師麻，具有降血脂、抗溶血活性、抗腫瘤活性和強鎮痛等作用，也可用于治療關節炎、鎮痛、消炎、手術麻醉等。植物黃瑞香目前為野生資源，是中藥材祖師麻的原植物，使用部位是根皮和莖皮，過度的不合理連根采挖方式，使植物資源受到嚴重破壞，導致祖師麻原植物極度緊缺；又由于黃瑞香種子具有硬實性和休眠性，發芽率非常低，很難滿足生產需求；而種子生活力是種子的重要特性，種子生活力對預測休眠種子的發芽力和快速預測種子發芽率具有重要意義，鑒定種子的生活力直接影響到種子的質量和植物材料使用者的經濟效益；現有技術中并沒有對黃瑞香種子生活力測定的報道，提供一種是當務之急。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種簡便易行、原理可靠、可重復性好的測定黃瑞香種子生活力的方法，這種方法可快速測定黃瑞香種子的生活力、工作效率高、重復性好。下面對本專利技術的內容及步驟做具體的說明:本專利技術，首先扦取黃瑞香種子，然后對所述黃瑞香種子進行如下后續處理步驟:a)凈度處理步驟:是將所述黃瑞香種子去除果皮，并清選，得到凈種子；b)消毒步驟:將所述凈種子消毒；c)預浸泡處理步驟:將消毒后的凈種子置于盛有蒸餾水的燒杯中，浸泡6_18h ；d)硬實破除步驟:隨機抽取步驟c)獲得的浸泡后的種子，用砂紙打磨堅硬的種皮，進行若干次重復實驗；e)種皮處理步驟:在不傷及種胚的情況下，對步驟d)獲得的種皮進行破皮處理，得破皮后種子，然后將破皮后種子置于試管中；f)染色步驟:將分析純2，3，5-三苯基氧化四唑用pH為7.8的磷酸緩沖液配制成質量分數為0.4-0.8%的TTC溶液，并加入到步驟e)中裝有破皮后種子的試管中，所述TTC溶液完全淹沒種子；然后將試管置于水浴鍋中，恒溫水浴；g)生活力測定步驟:從經染色步驟f)得到的種胚中挑選出深紅色的種胚，作為有生活力的種子，并計算有生活力種子的百分率。本專利技術的“生活力”是用“有生活力種子的百分率”來表示的，即有生活力種子占供檢種子的百分率。本專利技術的黃瑞香種子的測定方法，是依據生物體內的酶促反應進行的TTC染色反應，是用2，3，5-三苯基氧化四唑(TTC)的無色溶液作為指示劑，當TTC進入種子胚的活細胞后，活細胞呼吸作用中產生的還原態輔脫氫酶將其還原為紅色的、穩定而不擴散的TTF，可根據種子染色部位的大小和顏色的深淺來確定種子有無生活力。現有技術中，并沒有對黃瑞香種子生活力進行測定的方法報道，更沒有使用TTC法對黃瑞香種子生活力進行測定的報道，本專利技術的對黃瑞香種子生活力的TTC測定方法，簡單易行、容易操作、可重復率高，對黃瑞香種子的發芽率提供了依據，有利于黃瑞香植物的育種和繁殖。測定中所采用的黃瑞香種子，優選的為當年采收的種子。本專利技術的，所述步驟a)，是將所述黃瑞香種子以擠壓的方法去除果皮，并清洗干凈，獲得凈種子。擠壓法相對其他方法處理干凈、不損傷種子，更能保證種子的完整性。本專利技術的，所述步驟b)，是將所述凈種子用質量分數為1-5%的高猛酸鉀浸泡5分鐘進行消毒。對種子進行消毒可以防止種子的病蟲害、及細菌污染，妨礙對其生活力測定的準確性。 本專利技術的，所述步驟c)，所述浸泡過程是在自然光條件下25°C恒溫浸泡12小時。 本專利技術的，所述步驟e)中，所述破皮處理是用解剖針刺破種皮。種皮會阻礙TTC溶液的滲透，刺破種皮有利于TTC溶液進入而對種胚進行染色，提高種子生活力測定的準確性。本專利技術的，所述步驟e)中，所述破皮處理是先用解剖刀沿種子腹背之間縱向割破種皮，然后用鑷子輕輕剝出種胚，并將種胚置于試管中。完全去除種皮、取出種胚進行染色，對種子生活力的測定更準確、迅速。優選，本專利技術的，所述步驟f)，所述TTC溶液的質量分數為0.5%。質量分數為0.5%的TTC溶液，既能較好地染色，又不傷種胚，在這個濃度對黃瑞香種子生活力進行測定，既可保證對種子生活力測定的準確性，又能保證種子的發芽率。本專利技術的，所述步驟f)，所述恒溫水浴是在15-55°C條件下進行l_24h。優選，本專利技術的，所述步驟f)，所述恒溫水浴是在45°C條件下進行6h。進一步優選，本專利技術的，包括如下步驟:a)扦種步驟:扦取黃瑞香種子；b)凈度處理步驟:是將所述黃瑞香種子用擠壓法去除果皮，并清洗干凈，獲得凈種子；c)消毒步驟:是將所述凈種子用3%的高錳酸鉀浸泡5分鐘進行消毒；d)預浸泡處理步驟:將消毒后的凈種子置于盛有蒸餾水的燒杯中，在自然光條件下25°C恒溫浸泡12小時；e)硬實破除步驟:隨機抽取步驟d)獲得的浸泡后的種子，用砂紙打磨堅硬的種皮，進行若干次重復實驗；f)種皮處理步驟:在不傷及種胚的情況下，先用解剖刀沿種子腹背之間縱向割破種皮，然后用鑷子輕輕剝出種胚，并將種胚置于試管中；g)染色步驟:將分析純2，3，5-三苯基氧化四唑，用pH為7.8的磷酸緩沖液配制成質量分數為0.5%的TTC溶液，并加入到步驟f)中裝有種胚的試管中，所述TTC溶液完全淹沒種子；然后將試管置于水浴鍋中，45°C恒溫水浴6h ；h)生活力測定步驟:從經染色步驟g)得到的種胚中挑選出深紅色的種胚，作為有生活力的種子，并計算有生活力種子的百分率。本專利技術的的有益效果為:提供了一種用TTC法對黃瑞香種子的生活力進行測定的方法。這種方法可直接根據種胚的染色情況判斷種子生活力，相較其他方法，簡便易行，原理可靠，對種子無損傷，可重復性好；黃瑞香種子的生活力為 94.5%ο【具體實施方式】下面結合實施例對本專利技術作進一步說明:實施例1·，包括如下步驟:a)扦種步驟:扦取黃瑞香種子500g ；b)凈度處理步驟:將所述黃瑞香種子用擠壓法去除果皮，并清洗干凈，獲得凈種子;c)消毒步驟:是將所述凈種子用3%的高錳酸鉀浸泡5分鐘進行消毒；d)預浸泡處理步驟:將消毒后的凈種子置于盛有蒸餾水的燒杯中，在自然光條件下25°C恒溫浸泡12小時；e)硬實破除步驟:隨機抽取步驟d)獲得的浸泡后的種子，用砂紙打磨堅硬的種皮，進行若干次重復實驗；f)種皮處理步驟:在不傷及種胚的情況下，先用解剖刀沿種子腹背之間縱向割破種皮，然后用鑷子輕輕剝出種胚，并將種胚置于試管中；g)染色步驟:將分析純2，3，5-三苯基氧化四唑，用pH為7.8的磷酸緩沖液配制成質量分數為0.5%的TTC溶液，并加入到步驟f)中裝有種胚的試管中，所述TTC溶液完全淹沒種子；然后將試管置于水浴鍋中，45°C恒溫水浴6h ；h)生活力測定步驟:從經染色步驟g)得到的種胚中挑選出深紅色的種胚，作本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種黃瑞香種子生活力的測定方法，首先進行扦取黃瑞香種子步驟，其特征在于，所述測定方法還包括對所述黃瑞香種子進行如下后續處理步驟：?a)凈度處理步驟：是將所述黃瑞香種子去除果皮，并清選，得到凈種子；?b)消毒步驟：將所述凈種子消毒；?c)預浸泡處理步驟：將消毒后的凈種子置于盛有蒸餾水的燒杯中，浸泡6?18h；?d)硬實破除步驟：隨機抽取步驟c）獲得的浸泡后的種子，用砂紙打磨堅硬的種皮，進行若干次重復實驗；?e)種皮處理步驟：在不傷及種胚的情況下，對步驟d)獲得的種皮進行破皮處理，得破皮后種子，然后將破皮后種子置于試管中；?f)染色步驟：將分析純2,3,5?三苯基氧化四唑用pH為7.8的磷酸緩沖液配制成質量分數為0.4?0.8%的TTC溶液，并加入到步驟e)中裝有破皮后種子的試管中，所述TTC溶液完全淹沒種子；然后將試管置于水浴鍋中，恒溫水?。?g)生活力測定步驟：從經染色步驟f)得到的種胚中挑選出深紅色的種胚，作為有生活力的種子，并計算有生活力種子的百分率。

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：王勤禮，閆芳，毛著鴻，呂彪，高松，許耀照，
申請(專利權)人：甘肅凱源生物技術開發中心，
類型：發明
國別省市：