一種高良姜總RNA的提取方法技術

本發明專利技術公開了一種高良姜總RNA的提取方法。本發明專利技術針對高良姜次生代謝物質特別是多羥基黃酮醇含量豐富的特點，在常規的異硫氰酸胍-酚-氯仿抽提法基礎上進行了多方面的改進：在RNA抽提液中加入了丙酮、可溶性聚乙烯吡咯烷酮和β-巰基乙醇。丙酮能溶解黃酮醇類等有色物質，水溶性PVP能與酚類物質充分結合并形成螯合物，強還原劑β-巰基乙醇，能提供還原條件，使得多酚類物質不易被氧化，3種物質協同作用，有效抑制了多酚類物質的干擾和阻礙；本發明專利技術在獲得RNA粗提沉淀之后用Tris飽和酚和高濃度醋酸鉀處理，可同時去除部分蛋白和多糖。

【技術實現步驟摘要】

【技術保護點】
一種高良姜總RNA的提取方法，其特征在于包括以下步驟：1）取高良姜幼嫩葉片放入預冷研缽，在研缽中加入預冷裂解抽提液和預冷丙酮，反復加入液氮研磨成粉，室溫放置30?40min，將所得勻漿轉移至離心管中，4℃、12000g離心15min，轉移無色上清液層到另一離心管，得溶液A；所述的裂解抽提液由如下組分組成：5mol/L異硫氰酸胍，25mmol/L檸檬酸鈉，0.5%（w/v）十二烷基肌氨酸鈉，4%（w/v）可溶性聚乙烯吡咯烷酮，4%（v/v）β?巰基乙醇；2）向溶液A中加入1/3溶液A體積的Tris飽和酚、1/3溶液A體積的5mol/LKAc溶液，充分混勻，室溫放置15?30min，4℃、12000g離心15min，取水相轉移到新離心管，得溶液B；3）向溶液B中加入與溶液B等體積的氯仿，上下顛倒將兩相混勻，冰上放置10min后于4℃、12000g離心10min，取上清轉移到新的離心管中；重復步驟3）的氯仿抽提步驟1次，得溶液C；4）向溶液C中加入與溶液C等體積的異丙醇，混勻后置于?20℃中放置30min，4℃、12000g離心15min得到RNA沉淀物；5）用75%（v/v）乙醇清洗RNA沉淀物2次，吹干洗滌后的沉淀，用DEPC?ddH2O溶解吹干后的沉淀，獲得高良姜總RNA；步驟2）所述的Tris飽和酚，其pH值為8.8。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：李淑彬，徐詩如，周仁超，
申請(專利權)人：華南師范大學，
類型：發明
國別省市：廣東;44