一種構(gòu)建膈肌萎縮動物模型的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及實驗動物領(lǐng)域，具體而言，涉及一種構(gòu)建膈肌萎縮動物模型的方法。該方法包括步驟：（a）取6-8周齡Wistar雄性大鼠，并進(jìn)行麻醉；（b）將麻醉后的Wistar雄性大鼠進(jìn)行剃毛；（c）將剃毛后的Wistar雄性大鼠的腹部和背部分別浸入80-100℃的熱水中，使其所述腹部和所述背部具有Ⅲ度燙傷的體表面積為其總體表面積的30%-50%，得到膈肌萎縮動物模型。本發(fā)明專利技術(shù)提供的方法，操作方法簡單，制備的膈肌萎縮動物模型穩(wěn)定，重復(fù)性好，傷情適度，得到的動物模型接近于自然病理生理狀態(tài)，適合大規(guī)模的動物實驗，有助于深入研究燙燒傷后膈肌萎縮的發(fā)病機(jī)制，并根據(jù)其機(jī)制探尋有針對性的治療措施。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術(shù)涉及實驗動物領(lǐng)域，具體而言，涉及。該方法包括步驟：（a）取6-8周齡Wistar雄性大鼠，并進(jìn)行麻醉；（b）將麻醉后的Wistar雄性大鼠進(jìn)行剃毛；（c）將剃毛后的Wistar雄性大鼠的腹部和背部分別浸入80-100℃的熱水中，使其所述腹部和所述背部具有Ⅲ度燙傷的體表面積為其總體表面積的30%-50%，得到膈肌萎縮動物模型。本專利技術(shù)提供的方法，操作方法簡單，制備的膈肌萎縮動物模型穩(wěn)定，重復(fù)性好，傷情適度，得到的動物模型接近于自然病理生理狀態(tài)，適合大規(guī)模的動物實驗，有助于深入研究燙燒傷后膈肌萎縮的發(fā)病機(jī)制，并根據(jù)其機(jī)制探尋有針對性的治療措施。【專利說明】
本專利技術(shù)涉及實驗動物領(lǐng)域，具體而言，涉及。
技術(shù)介紹
嚴(yán)重燙傷，無論是否合并吸入性損傷，均可導(dǎo)致呼吸功能障礙，而膈肌為主要的呼吸肌，膈肌萎縮是呼吸功能障礙的重要原因之一。目前并沒有用于分析嚴(yán)重燙傷后膈肌萎縮情況的動物模型，導(dǎo)致嚴(yán)重燙傷后膈肌萎縮情況不詳，燙傷后呼吸肌萎縮的發(fā)生機(jī)制仍未闡明，臨床上缺乏有效的治療措施，也無法進(jìn)行嚴(yán)重燙傷后膈肌功能障礙研究。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供，以解決上述的問題。在本專利技術(shù)的實施例中提供了，包括以下步驟:(a)取6-8周齡的Wistar雄性大鼠，并進(jìn)行麻醉；(b)將麻醉后的Wistar雄性大鼠進(jìn)行剃毛；(C)將剃毛后的Wistar雄性大鼠的腹部和背部分別浸入80_100°C的熱水中，使其所述腹部和所述背部具有III度燙傷的體表面積為其總體表面積的30%-50%，得到膈肌萎縮動物模型。優(yōu)選地,在所述(a)的步驟中，所述Wistar雄性大鼠的重量為200_280g。優(yōu)選地，在所述(`a)的步驟中，所述麻醉采用腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉或三溴乙醇或體積比為1:1的鹽酸氯胺酮/速眠新II。優(yōu)選地,在所述(a)的步驟中，所述戍巴比妥鈉的使用量為50mg/kg ;所述三溴乙醇的使用量為:150mg/kg;所述體積比為1:1的鹽酸氯胺酮/速眠新II的使用量為:1ml/kg ο優(yōu)選地，在所述步驟(b)之后，步驟(C)之前，還包括分別對剃毛后的Wistar雄性大鼠的背部和腹部分別標(biāo)記出浸入熱水的區(qū)域。優(yōu)選地，在所述(C)的步驟中，所述腹部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的12%-20%，所述背部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的20%-30%。優(yōu)選地，在所述(C)的步驟中，所述腹部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的15%，所述背部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的25%。優(yōu)選地，在所述(C)的步驟中，所述腹部浸入80_100°C的熱水中的時間為5-8秒。優(yōu)選地，在所述(C)的步驟中，所述背部浸入80-100°C的熱水中的時間為10-15秒。優(yōu)選地，在所述(C)的步驟中，燙傷后4天得到膈肌萎縮動物模型。本專利技術(shù)提供的，操作方法簡單，制備的膈肌萎縮動物模型穩(wěn)定，重復(fù)性好，傷情適度，得到的動物模型接近于自然病理生理狀態(tài)，適合大規(guī)模的動物實驗，有助于深入研究燙燒傷后膈肌萎縮的發(fā)病機(jī)制，并根據(jù)其機(jī)制探尋有針對性的治療措施。【專利附圖】【附圖說明】圖1示出了本專利技術(shù)實施例1中40%燙傷組與假傷組中的Wistar雄性大鼠燙傷后的膈肌重量變化圖；圖2示出了本專利技術(shù)實施例1中不同燙傷面積的Wistar雄性大鼠燙傷后4天時的膈肌重量變化圖；圖3示出了本專利技術(shù)實施例2中假傷組的Wistar雄性大鼠燙傷后4天時膈肌肌纖維超微結(jié)構(gòu)圖；圖4示出了本專利技術(shù)實施例2中40%燙傷組的Wistar雄性大鼠燙傷后4天時膈肌肌纖維超微結(jié)構(gòu)圖；圖5示出了本專利技術(shù)實施例2中40%燙傷組的Wistar雄性大鼠燙傷后4天時膈肌間質(zhì)細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)圖；圖6示出了本專利技術(shù)實施例2中假傷組的Wistar雄性大鼠燙傷后4天時膈肌凋亡的TUNEL及免疫組化雙標(biāo)檢測的縱斷面圖；圖7示出了本專利技術(shù)實施例2中40%燙傷組的Wistar雄性大鼠燙傷后4天時膈肌凋亡的TUNEL及免疫組化雙標(biāo)檢測的縱斷面圖；圖8示出了本專利技術(shù)實施例2中40%燙傷組的Wistar雄性大鼠燙傷后不同時間膈肌caspase-3及其活性片段的蛋白表達(dá)Western Blot檢測圖；圖9示出了本專利技術(shù)實施例2中40%燙傷組的Wistar雄性大鼠燙傷后不同天數(shù)時膈肌caspase-3活性片段的蛋白表達(dá)水平變化圖。【具體實施方式】下面通過具體的實施例子對本專利技術(shù)做進(jìn)一步的詳細(xì)描述。本專利技術(shù)實施例中提供了。包括以下步驟:(a)取6-8周齡的Wistar雄性大鼠，并進(jìn)行麻醉；(b)將麻醉后的Wistar雄性大鼠進(jìn)行剃毛；(C)將剃毛后的Wistar雄性大鼠的腹部和背部分別浸入80_100°C的熱水中，使其所述腹部和所述背部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的30%-50%，得到膈肌萎縮動物模型。Wistar大鼠是動物實驗大鼠類最為常用及生物醫(yī)學(xué)研究中使用歷史最長的品種，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的實驗。處于幼年的Wistar大鼠生長發(fā)育不完全，其膈肌發(fā)育不成熟，可變因素大；處于年老的Wistar大鼠自身的生長代謝出現(xiàn)老化，構(gòu)建膈肌模型可影響因素多；因此，選擇6-8周齡的Wistar雄性大鼠，其處于成長期，此期的Wistar大鼠生長發(fā)育較快，抵抗力強(qiáng)，個體形態(tài)差異小，構(gòu)建的膈肌模型更穩(wěn)定。具體地，在所述(a)的步驟中，所述Wistar雄性大鼠的重量為200-280g。由于在實際實驗過程中，所購買的Wistar雄性大鼠的重量不可能達(dá)到完全相同，因此，在實驗過程中，Wistar雄性大鼠的重量會有一定的偏差。進(jìn)一步的，Wistar雄性大鼠的重量為245_255g。為了符合動物的實驗標(biāo)準(zhǔn)以及方便控制大鼠，對Wistar雄性大鼠先進(jìn)行麻醉，采用腹腔內(nèi)注射戊巴比妥鈉或三溴乙醇或體積比為1:1的鹽酸氯胺酮/速眠新II。具體為，巴比妥鈉的使用量為50mg/kg ;三溴乙醇的使用量為:150mg/kg ;體積比為1:1的鹽酸氯胺酮/速眠新II的使用量為:lml/kg。Wistar雄性大鼠放入熱水燙之前，需要先暴露其體表，因此，進(jìn)行了剃毛處理，剃毛后每只Wistar雄性大鼠的體表暴露度幾乎一致，避免了體表毛發(fā)對燙傷過程的影響，此外，還有利于觀察其體表進(jìn)入熱水的深度及體表燙傷的程度，方便控制燙傷的過程。對Wistar雄性大鼠體表剃毛后，為了有目的的將其背部和腹部浸入熱水，先對其背部和腹部標(biāo)記出浸入熱水的區(qū)域，這樣，利于控制得到的燙傷面積。優(yōu)選地，在步驟(b)之后，步驟(c)之前，還包括分別對剃毛后的Wistar雄性大鼠的背部和腹部分別標(biāo)記出浸入熱水的區(qū)域。Wistar雄性大鼠的背部處于其上部，暴露方便，且其背部體積大，因此，選擇的背部III度燙傷的面積大于腹部。優(yōu)選地，在所述(C)的步驟中，所述腹部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的12%-20%，所述背部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的20%-30%。具體的，采用腹部浸入80-100°C的熱水中的時間為5-8秒，可得到腹部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的12%-20% ;背部浸入80-100°C的熱水中的時間為10-15秒，可得到背部具有III度燙傷的表面積為其總表面積的20%-30%。由于不同的燙傷面積對Wistar雄性大鼠造成不同的傷害，其中，燙傷面積為總面積的比重本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點】

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：段紅杰，
申請(專利權(quán))人：段紅杰，
類型：發(fā)明
國別省市：