本發明專利技術公開了一種葡萄糖的比色檢測方法，是將樣品經預處理、加緩沖液稀釋后與葡萄糖氧化酶混合，反應生成過氧化氫，然后加入二硫化鉬溶液、顯色劑和緩沖液，混合反應后，采用目視比色法或紫外-可見分光光度計測定得出樣品中葡萄糖的含量。本發明專利技術利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生成過氧化氫，再以二硫化鉬為催化劑催化過氧化氫與顯色劑的顯色反應，采用目視比色法半定量測定葡萄糖濃度，或通過紫外分光光度計定量測定葡萄糖濃度。本發明專利技術解決了現有技術中對葡萄糖檢測的操作要求高，檢測過程復雜，檢測成本高，檢測時間長，背景干擾大等問題，本發明專利技術的方法成本低、操作簡便、能夠實現可視化快速檢測樣品中葡萄糖含量。
【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開了，是將樣品經預處理、加緩沖液稀釋后與葡萄糖氧化酶混合，反應生成過氧化氫，然后加入二硫化鉬溶液、顯色劑和緩沖液，混合反應后，采用目視比色法或紫外-可見分光光度計測定得出樣品中葡萄糖的含量。本專利技術利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生成過氧化氫，再以二硫化鉬為催化劑催化過氧化氫與顯色劑的顯色反應，采用目視比色法半定量測定葡萄糖濃度，或通過紫外分光光度計定量測定葡萄糖濃度。本專利技術解決了現有技術中對葡萄糖檢測的操作要求高，檢測過程復雜，檢測成本高，檢測時間長，背景干擾大等問題，本專利技術的方法成本低、操作簡便、能夠實現可視化快速檢測樣品中葡萄糖含量。【專利說明】—種葡萄糖的比色檢測方法
本專利技術屬于葡萄糖檢測
，具體涉及。
技術介紹
近年來由于飲食結構的改變、生活節奏的日趨緊張以及少動多坐的生活方式等諸多因素的影響，全球糖尿病的發病率增長迅速，使糖尿病成為繼腫瘤、心血管病變之后第三大嚴重威脅人類健康的慢性疾病。血清中葡萄糖含量的檢測是臨床檢驗和監控糖尿病的主要手段。目前用于血清葡萄糖含量檢測的國家衛生標準參考方法(標準號:WS/T 350-2011)是采用己糖激酶和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶聯合的方法。這些天然酶在溫和條件下具有較高的底物特異性和催化效率，但是天然酶存在純化困難、易失活、不易保存、價格較高等缺點。在目前已經公布的葡萄糖含量檢測相關專利中，主要為電化學方法(專利號:200710176028.0 ;專利號:200910067282.6 ;專利號:201010617684.1 ；專利號:201110083906.0 ;專利號:201110391001.X ；專利號:201110343243.1 ；專利號:201110345081.5 ;專利號:201220071992.3 ;專利號:201210189645.5 ;專利號:201210416267.X ;專利號:201310087177.5 ;專利號:201310141232.4 ;專利號:201310290148.9 ;專利號:201310354574.4)。電化學檢測靈敏度高，但是容易受到血氧以及血液中其他電活性物質的干擾，而且在檢測過程中需要消耗一定的能量，另外，電極的制備往往較為復雜且無法直觀判斷血清葡萄糖含量，需要專門的儀器。其他檢測葡萄糖的方法如共振散射光譜法(專利號:200810073470.5)、近紅外光譜法(專利號:98100787.2)、化學發光法(專利號:200910236714.1 ;專利號=201210509888.2)、熒光光譜法(專利號:200680029822.6 ;專利號:201310250093.9)等都需憑借昂貴的專業儀器并且在專業技術人員的操作下才能完成對葡萄糖的檢測。而葡萄糖快速測定的相關試劑盒(專利號:201210459910.7)、試紙(專利號:200410033020.5 ;專利號:201210579953.9)等因其構造復雜，制作過程繁瑣，價格昂貴，在實際應用中也受到很大的限制。基于酶催化體系的比色檢測法是近年來較熱門的檢測方法，它利用反應過程中體系顏色及色度的變化實現對目標物的檢測，具有檢出限低，靈敏度高的優點，但是常需要使用過氧化物酶(HRP)，而過氧化物酶價格較高、易失活、不易保存。因此，又有人提出基于模擬酶檢測血清葡萄糖的方法。自中國科學院閻錫蘊課題組發現納米材料四氧化三鐵具有類過氧化物酶催化活性(NatureNanotechnology, 2007, 2, 577-583)以來，汪爾康等人利用該特性實現了對過氧化氫和葡萄糖的檢測(Analytical Chemistry, 2008,80, 2250-2254),氧化石墨烯也被發現具有類過氧化物酶活性，并已應用于過氧化氫和葡萄糖的檢測(Advanced Materials, 2010，20，2255-2262)。在申請的專利中，人們也提出基于模擬酶比色檢測葡萄糖的方法(專利號:201110275358.1 ;專利號:201310244132.4 ;專利號:201310260524.X)。然而這些方法成本高、顏色變化較為單一、不易保存攜帶。
技術實現思路
本專利技術的目的在于提供，利用葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生成過氧化氫，再以二硫化鑰為催化劑催化過氧化氫與顯色劑的顯色反應來檢測葡萄糖，可解決現有技術中對葡萄糖檢測的操作要求高，檢測過程復雜，檢測成本高，檢測時間長，背景干擾大等問題，本專利技術的方法成本低、操作簡便、能夠實現可視化快速檢測樣品中葡萄糖的含量。為實現上述目的，本專利技術采用如下技術方案: ，是將樣品經預處理，加緩沖液稀釋后與葡萄糖氧化酶混合，反應生成過氧化氫，然后加入二硫化鑰溶液、顯色劑和緩沖液進行顯色反應，采用目視比色法，將反應后的溶液顏色與比色標準系列進行比較，或在顯色反應后加入硫酸溶液終止反應，再采用目視比色法半定量測定葡萄糖的濃度。所述比色標準系列的制備是將葡萄糖標準品加緩沖液稀釋，配制成已知的不同濃度的葡萄糖標準溶液與葡萄糖氧化酶混合反應后，加入二硫化鑰溶液、顯色劑和緩沖液進行顯色反應即得比色標準系列，或在顯色反應后加入硫酸溶液終止反應得到比色標準系列。，是將樣品經預處理，加緩沖液稀釋后與葡萄糖氧化酶混合，反應生成過氧化氫，然后加入二硫化鑰溶液、顯色劑和緩沖液，顯色反應后采用紫外-可見分光光度計測定溶液的吸光度，或在顯色反應后加入硫酸溶液終止反應，再采用紫外-可見分光光度計測定溶液的吸光度，并根據標準曲線方程計算葡萄糖的含量。所述標準曲線方程的建立是將葡萄糖標準品加緩沖液稀釋，配制成已知的不同濃度的葡萄糖標準溶液與葡萄糖氧化酶混合反應后，加入二硫化鑰溶液、顯色劑和緩沖液，顯色反應后采用紫外-可見分光光度計測定在652 nm波長處的吸光度，或在顯色反應后加入硫酸溶液終止反應，再采用紫外-可見分光光度計在450 nm波長處測定吸光度，并以吸光度作為縱坐標，葡萄糖的濃度作為橫坐標，繪制標準曲線并得出標準曲線方程。稀釋樣品和葡萄糖標準品所用緩沖液的pH值為3-9。顯色反應中所用緩沖液的pH值為1-9。顯色反應的溫度為30?60 °C。所用的顯色劑為3，3’，5，5’ -四甲基聯苯胺、2，2-聯氮-二(3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸)二銨鹽或鄰苯二胺。本專利技術的顯著優點是: (I)本專利技術通過葡萄糖氧化酶氧化葡萄糖生成過氧化氫，再由二硫化鑰催化顯色劑與過氧化氫反應產生顏色變化，以指示葡萄糖的不同濃度。葡萄糖濃度不同，則溶液顏色及顏色深淺均不同；通過肉眼觀察即可判斷葡萄糖是否超標，而不必借助任何儀器，因此檢測成本低，操作簡便。(2)本專利技術所使用的二硫化鑰無需修飾即可用于葡萄糖的檢測。(3)本專利技術中分光光度法檢測葡萄糖的檢測限可以達到I PM，線性范圍為5 UM到 150 uM (R2=0.9992)。(4)本專利技術的反應條件溫和，檢測速度快，重現性好，且無需昂貴的檢測儀器，操作簡便，可實現葡萄糖的可視化快速識別和檢測。【具體實施方式】標準葡萄糖溶液的檢測:將20 μ L葡萄糖氧化酶溶液與180 μ L用緩沖液(pH3-9)配制的不同濃度的葡萄糖溶液混合,3(T60°C下反應30 min,然后加入0.05 mL的二硫化本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：郭良洽，林天然，
申請(專利權)人：福州大學，
類型：發明
國別省市：
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