本申請發明專利技術的目的在于，提供一種用于在自動分析裝置上通過散射光測定法高靈敏度地測定膠乳免疫反應的裝置、以及試劑方面的合適條件。因此，作為本申請發明專利技術的一個方式，使用波長0.65～0.75μm的范圍的照射光，在反應容器（8）的旋轉移動中，以相對于照射光的照射方向為15～35°的受光角度接收由反應液產生的散射光。試劑含有平均峰值粒徑為0.3μm～0.43μm且抗體被致敏了的膠乳粒子。反應液含有對于波長0.7μm的照射光的吸光度為0.25abs～1.10abs的濃度的膠乳粒子，測定通過膠乳粒子介由樣品內的抗原而凝集從而引起的散射光的光量變化，進行定量。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】【專利摘要】本申請專利技術的目的在于，提供一種用于在自動分析裝置上通過散射光測定法高靈敏度地測定膠乳免疫反應的裝置、以及試劑方面的合適條件。因此，作為本申請專利技術的一個方式，使用波長0.65～0.75μm的范圍的照射光，在反應容器（8）的旋轉移動中，以相對于照射光的照射方向為15～35°的受光角度接收由反應液產生的散射光。試劑含有平均峰值粒徑為0.3μm～0.43μm且抗體被致敏了的膠乳粒子。反應液含有對于波長0.7μm的照射光的吸光度為0.25abs～1.10abs的濃度的膠乳粒子，測定通過膠乳粒子介由樣品內的抗原而凝集從而引起的散射光的光量變化，進行定量。【專利說明】
本專利技術涉及對使用了抗原抗體反應的微粒凝集反應測定散射光的方法及分析裝置，尤其涉及自動分析裝置上的散射光測定方法。
技術介紹
正在廣泛使用如下的自動分析裝置:所述裝置使來自光源的光照射到將樣品和試劑混合而成的反應液上，由特定波長的透光量的變化算出吸光度，基于朗伯比爾定律對血液樣品中的被測定物質的濃度進行定量(例如，專利文獻I)。這些自動分析裝置中，在反復進行旋轉和停止的單元轉盤的圓周上，排列有多個保持反應液的單元，在單元轉盤的旋轉中，在配置在規定位置的透過光測定部，大約10分鐘內以15秒左右的間隔獲取透過單元內的反應液的透光量的時間序列數據，將其作為反應過程數據，由光量的變化算出吸光度，對被測定物質的濃度進行定量。利用自動分析裝置進行測定的反應主要有底物與酶的顯色反應、以及抗原與抗體的免疫反應這2類。使用前者反應的分析被稱為生化分析，作為檢查項目有LDH (乳酸脫氫酶)、ALP (堿性磷酸酶)、AST (天冬氨酸氨基轉移酶)等。使用后者反應的分析被稱為免疫分析，作為檢查項目有CRP (C反應性蛋白)、IgG (免疫球蛋白)、RF (類風濕因子)等。利用后者進行測定的被測定物質中，存在需要在血中濃度低的低濃度區域進行定量的檢查項目，對于這類項目，使用膠乳免疫分析，所述膠乳免疫分析使用表面致敏(結合)有抗體的膠乳粒子作為增敏劑(例如，專利文獻2)。膠乳免疫分析中，試劑中所含有的膠乳粒子表面的抗體識別樣品中所含有的作為被測定物質的抗原并與其結合，其結果使膠乳粒子介由抗原而凝集，生成膠乳粒子的凝集體。現有的自動分析裝置對分散有該凝集體的反應液照射光，測定未被膠乳粒子的凝集體散射的、透過的透光量。抗原的濃度越高，則一定時間后凝集體的尺寸變得越大，由于更多的光被散射而導致透光量減少。因此，可以由作為反應過程數據而測定的光量對抗原的濃度進行定量。近年，希望膠乳免疫分析進一步高靈敏度化。因此，嘗試測定散射光而不是測定透過光。例如公開了使用光闌(diaphragm)將透過光和散射光分離、同時測定吸光度和散射光的系統(專利文獻3)等。此外，還公開了適合于散射光的測定的試劑粒徑等(專利文獻4)。在先技術文獻專利文獻專利文獻1:美國專利第4451433號說明書專利文獻2:日本專利1612184號說明書專利文獻3:日本特開2001 - 141654號公報專利文獻4:日本專利1635792號說明書非專利文獻非專利文獻I:C.F.Bohren, D.R.Huffman, Absorption and Scattering of Lightby Small Particles, J.Wiley&Sons, 1983
技術實現思路
專利技術要解決的課題雖然專利文獻2中記載了用于粗略的高靈敏度化的波長及粒徑等，但其涉及的是吸光度的測定，是否適用于散射光的測定尚不清楚。此外，專利文獻3中雖然示出了通過透過光測定的同時進行散射光測定由此成為高靈敏度的構成，但并不是作為適合于自動分析裝置的構成而設計的。進而，對于包括試劑在內的合適的條件也沒有進行討論。膠乳試劑主要使用粒子直徑(以下記為粒徑)為500nm以下的膠乳粒子，認為各個粒子所引起的光散射特性(散射光強度、及其角度分布)會根據粒徑和波長之比而發生較大改變(參照非專利文獻I)。因此，在散射光測定時，靈敏度可能由于波長和粒徑等的選擇而發生較大改變。專利文獻4中雖然有有關散射光測定的記載，但為與專利文獻2的吸光度測定時相同的范圍，推測在用于散射光測定時未必同樣為適合于高靈敏度化的波長及粒徑，還存在由波長、粒徑導致靈敏度變差的擔憂。但是，對于改變波長、粒徑等進行實驗需要大量的時間和成本，現實是把握總體的趨勢極為困難。進而，也沒有進行考慮了將膠乳表面致敏的抗體的結合性等條件討論。S卩，在自動分析裝置上測定散射光時的、作為裝置條件的波長.受光角度以及作為試劑條件的粒徑.密度.抗原抗體的結合常數等與靈敏度的關系不明確，用于高靈敏度地進行膠乳免疫分析的優選的各條件的組合仍屬未知。本專利技術提供一種用于在自動分析裝置上通過散射光測定法高靈敏度地測定膠乳免疫反應的裝置以及試劑方面的合適條件。用于解決問題的手段本專利技術中，作為抗原抗體反應，通過由結合常數估算一定反應時間內設定的凝集體的個數，將凝集體進行光學地模型化，從而進行模擬，獲得了容易產生隨著凝集的散射光變化的試劑條件以及裝置條件。本專利技術的自動分析裝置，具有:保持樣品的樣品容器，保持試劑的試劑容器，所述試劑含有平均峰值粒徑為0.3 μ m?0.43 μ m且抗體被致敏了的膠乳粒子，保持將樣品容器內的樣品和試劑容器內的試劑混合而成的反應液的反應容器，使反應容器旋轉移動的旋轉機構，對反應容器內的反應液照射波長0.65?0.75 μ m的范圍的照射光的光源部，和配置在相對于照射光的照射方向為15?35°的受光角度的、在反應容器的旋轉移動中接收由反應液產生的散射光的光檢測器。其中，反應液以對于波長0.7μπι的照射光的吸光度為0.25abs?1.1Oabs的濃度含有膠乳粒子,測定通過膠乳粒子介由樣品內的抗原而凝集從而引起的散射光的光量變化。反應液中所含有的膠乳粒子的濃度更優選為對于波長0.7 μ m的照射光的吸光度為0.25abs?0.50abs的濃度，進而優選為0.25abs?0.31abs的濃度。此外，本專利技術的分析方法為使用自動分析裝置的基于抗原抗體反應的被測定物質的分析方法，具有:在反應容器內將樣品、和含有平均峰值粒徑為0.3 μ m?0.43 μ m且抗體被致敏了的膠乳粒子的試劑混合形成反應液的工序；在使反應容器旋轉移動的過程中，對反應容器內的反應液照射波長0.65?0.75 μ m的范圍的照射光，檢測在相對于照射光的照射方向為15?35°的角度被散射的散射光的工序；和測定通過膠乳粒子介由樣品內的抗原而凝集從而引起的散射光的光量變化的工序；反應液以對于波長0.7μπι的照射光的吸光度為0.25abs?1.1Oabs的濃度含有膠乳粒子。專利技術的效果根據本專利技術，高靈敏度地測定利用了抗原抗體反應的膠乳粒子的凝集，到低濃度為止進行測定都是可能的。由此能夠算出低濃度的抗原或抗體。上述以外的課題、特征和效果通過以下的實施方式的說明而進行闡明。【專利附圖】【附圖說明】圖1是散射光測定的簡要說明圖。圖2是表示抗原結合率的抗體濃度依賴性的圖。圖3是表示凝集體的構成粒子個數的抗原濃度依賴性的圖。圖4是表示散射光的光量變化率相對于透過光的光量變化率的(光量變化率倍率)圖。圖5是表示自動分析裝置的整本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：與儀剛史，足立作一郎，三村智憲，山崎創，
申請(專利權)人：株式會社日立高新技術，
類型：
國別省市：
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